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1、人凝血因子效价检验标准操作规程1 目的严格规范操作者的检测方法，使操作者能够快速有效和安全准确地完成检验操作，特制定本操作规程。2 适用范围本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子的供试品效价检测。3 制定依据中华人民共和国药典（2015年版）三部，附录3521人凝血因子效价测定法（一期法）。4 职责4.1 检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算。4.2 复核人对检验中的计算进行复核。4.3 确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定。5 仪器及器具5.1 仪器5.1.1 凝血仪5.1.2 电子天平5.1.3 电子分析天平5.1.4 漩涡混
2、匀器5.2 器具5.2.1 微量移液器5.2.2 吸头5.2.3 移液管5.2.4 洗耳球5.2.5 试管5.2.6 试管架5.2.7 砂轮5.2.8 凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等）6 试剂及试液6.1 试剂6.1.1 人凝血因子VIII国家标准品6.1.2 人凝血因子VIII比较品6.2 试液6.2.1 人凝血因子缺乏血浆6.2.2 稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液）6.2.3 激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂 6.2.4 氯化钙溶液7 操作步骤7.1 供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备7.1.1 供试品及比较品溶液的制备7.1.1.1 供试品及比较品的预稀释用人凝血因子缺
3、乏血浆将供试品预稀释成约1IU/ml（冻干制品先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取12g，加水溶解约为20倍。具体稀释过程如下：供试品区分冷沉淀人凝血因子洗脱原液、原液人凝血因子 半成品、成品、冻干及比较品供试品12g100l100l人凝血因子缺乏血浆1938g纯化水300l100l稀释倍数2042取上步稀释液-50l50l人凝血因子缺乏血浆-450l450l总预稀释倍数2040207.1.1.2 供试品预稀释液的工作稀释（供试品溶液）将上述含人凝血因子约1IU/ml的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍。具体稀释过程如下：先取500l已预稀释成含人凝血因子约1IU/ml的供试品预稀释液，
4、加500l稀释液，稀释成含人凝血因子约0.5IU/ml，混匀，再分别从中取200l移到3支试管中，分别加400l，600l和800l稀释液。供试品稀释可根据本身效价高低及仪器环境等变化作适当适当调整。如下表稀释：供试品溶液1供试品溶液2供试品溶液3供试品预稀释液500l500l500l稀释液500l500l500l稀释倍数222取上步稀释液200l200l200l稀释液400l600l800l总稀释倍数3040507.1.2 标准品溶液的制备7.1.2.1 预稀释：将标准品按标示量加入水溶解，取100l复溶品，加人凝血因子缺乏血浆适量预稀释成约1IU/ml。7.1.2.2 工作稀释：将上述1I
5、U/ml的标准品用稀释液稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍。稀释倍数2481632600l1IU/ml标准品600l2标准品600l4标准品600l8标准品600l16标准品稀释液600l600l600l600l600l人凝血因子效价0.5IU/ml0.25IU/ml0.125IU/ml0.0625IU/ml0.03125IU/ml7.2 检验操作7.2.1 凝血仪准备：7.2.1.1 先打开凝血仪电源，在反应盘上放入比色盘，预热使反应仓温度达到37。7.2.1.2 分别将激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂和氯化钙溶液加入凝血仪的相应区域。7.2.2 上机测试凝固时间7.2.2.1 将供试品杯
6、加到供试品盘上，并按要求在相应的供试品杯中加入供试液（标准品、比较品和供试品稀释液）和相应试剂。具体加入位置如下：Dil杯加入稀释液；18号杯加入人凝血因子缺乏血浆；114号杯加入待测液；7.2.2.2 按仪器操作规程启动人凝血因子效价测定程序；7.2.2.3 测定结束后，记录返回的凝固时间7.2.3 测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否则重测。7.3 结果处理7.3.1 标准曲线制作：将标准品5个不同稀释度所含人凝血因子效价（IU/ml），分别取对数值；再将其各相应浓度所测得的凝固时间（秒，s），也分别取对数值。然后按统计学方法作直线回归方程（用excel计算）：
7、logy = blogx+a其中：x为人凝血因子效价，IU/ml；y为测得相应凝固时间，秒（s）。7.3.2 供试品及比较品效价计算：将3个不同浓度的供试品所得到凝固时间（秒）分别代入方程式计算x值；然后将所得x值分别乘以相应的供试品稀释倍数，即得到3个相应的效价（IU/ml）；计算这3个效价值的平均值作为供试品中人凝血因子效价。7.4 注意事项7.4.1 标准曲线直线回归相关系数应不低于0.98。7.4.2 每个稀释度的标准品或供试品平行测定2管，2管之差不得超过均值10%，否则重测。7.4.3 直接接触标准品、供试品和血浆的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制品。7.4.4 应急预案7.4.4.1
8、 仪器与电脑无法连接（仪器无法将实验数据传到电脑上不易于对实验的考察及结果分析，试验过程中数据未能在电脑上读取）。检查线接口，重新连接仪器电脑。7.4.4.2 如遇到供试品还未上机检验停电，则待来电后，检验照常进行。如遇上机过程中断电在不影响检验结果的情况下继续检验直到结束，否则重新检验。7.4.4.3 电源无法关闭，可能是电路短路，会导致机器死机。7.4.4.4 长期频繁的开关会导致仪器电源的松弛，仪器不容易关闭，应减少开机次数，按仪器使用说明书定期维护。7.4.4.5 针头堵塞，操作仪器点击清洗，将针头冲干净。8 判定基准检验结果的判定依据相应品种的质量标准进行9 生效日期本规定自2015年12月01日起正式生效。
