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1、货号：MS3110规格：100管/48样锰过氧化物酶（Manganese peroxidase , Mnp）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中， 属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、 DTT，多环芳烃等。测定原理：锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征 吸收峰。自备实验用品及仪器：天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水 浴
2、锅。试剂组成和配制：试剂一：液体110mLX 1瓶，4C保存。试剂二：液体2mLX 1支，4C保存。试剂三：液体4mLX 1瓶，4C避光保存。试剂四：液体2mLX 1支，4C保存。酶液提取：1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积（mL）为1： 510的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试 剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4C，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为5001000： 1的比例（建议500万细 胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后4C，10000g离心
3、10min，取上清置于冰上待测。3. 培养液或其它液体：直接检测。测定操作：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至465nm，蒸馏水调零。2、测定前将试剂一、二、三、四在37C（哺乳动物）或25C（其它物种）放置10min以上。3、样本测定表试剂名称（此）测定管样本20试剂一100试剂二20试剂三40试剂四20在微量石英比色皿或96孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录465nm下30s时 的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算A A=A2-A1。注意：若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液，在37C（哺乳 动物）或25C（其它物种）放置1
4、0min以上，测定时加入20此样本和180此混合液测定。酶活计算公式：a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下1. 按照蛋白浓度计算酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化Inmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/mg prot ） = AXV 反总：（ Xd ） X1Oo（V 样 XCpr） -FT=413XA AiCpr2. 按照样本质量计算酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/g 鲜重）= AXV 反总：（ Xd）X1Oo ：（V 样XW：V 样总）：T二 413XA A：W3. 按照细胞数
5、量计算酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/104 cell） = AXV 反总：（ Xd）X1Oo ：（V 样X细胞数量：V 样 总）：T=413XA A：细胞数量4. 按照液体体积计算酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/mL） = AXV 反总：（ Xd）X1OoV 样：T= 413XA A ：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V反总：反应总体积，2X10-4 L； V样：反应中样本体积，0.02
6、mL； V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间，2minb. 用96孔板测定的计算公式如下1. 按照蛋白浓度计算酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/mg prot ） = AXV 反总：（ Xd ） X109】：（V 样 XCpr） -FT=826XA AiCpr2. 按照样本质量计算酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/g 鲜重）= AXV 反总：（ Xd）X109 ：（V 样XW：V
7、样总）：T二 826XA A：W3. 按照细胞数量计算酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。MnP 活性（nmol/min/104 cell） = AXV 反总：（ Xd）X109 ：（V 样X细胞数量：V 样 总）：T=826XA A：细胞数量4. 按照液体体积计算酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。 MnP 活性（nmol/min/mL） = AXV 反总：（ Xd）X109】：V 样：T= 826XA A :愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm； d： 96孔板光径，0.5cm； V反总：反应总体积， 2X10-4L； V样：反应中样本体积，0.02mL； V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白 浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间，2min
