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1、摇菌岗位工作手册一、工作职责按照SOP规定完成菌液样品收样及扩繁活化客户所送的菌液样品工作，并负责组 内相关仪器维护，准确地将所摇出的菌交接给提质粒岗，保证摇菌的成功率，对摇菌物 料的监控与质检。二、工作内容1. 找出并排列好需要处理的菌液（新样品，客服安排的重摇，模板空，前一天的重 摇菌液）2. 清理（打扫培养室，擦摇床，清理冰箱）灭菌（培养室的灭菌，器材的准备、灭菌）3. 准备接菌和摇菌4. 打摇菌表5. 查看交接，返样6. 清理桌面，保存样品，做好记录和交接三、一般工作流程查看前一天摇菌质量以及提质粒人员的反馈信息，并判断是否需要对未摇出的 菌液样品进行优化一一清理培养室后开始臭氧一一准
2、备灭菌器材进行灭菌一一 臭氧 半小时后开抽风一一 收取菌液样品（排序，给流水号）一一 抽风半小时后擦摇床并摆 放当天摇菌需用物品，紫外灭菌一一查看客服交接内容和前一天菌液样品提质粒结果， 找出客服安排需处理的菌液样品和重摇的菌一一收完菌液样品后，对样品进行接菌安 排（双份，单管）一一预冷器材，分装培养基，接菌，摇菌一一清理超净工作台，保 存当天收取菌液样品并填写好相关生产记录一一打摇菌表，做好交接一一 返样一一 清理收样室注：每个星期每隔一天需要用巴氏消毒液给培养间拖地消毒，周四需要预测摇菌物料消 耗情况并按需求领料，定期需对冰箱已处理菌液进行装袋封存（一个月）四、常见问题及注意事项1.摇菌未
3、摇出：可能原因如下:异常情况处理方法用错抗生素查看未摇出样品的抗性，检 查是否抗性用错改用正确抗生素安排重新 摇菌菌液较澄清查看菌体是否清澈，有无菌 体接菌前可预先进行活化并 加大接菌量菌液量太少可直接反馈给客户菌体活力情况查看是否菌体已死（菌液样 品严重沉淀，菌体偏白）可将菌液样品情况反馈给 客户大载体，低拷贝片段大小大于4K,拷贝数低单管摇菌抗生素浓度低大批量样品出现菌液摇不 出平板挑取的菌落活性不 足查看平板菌落大小（出现的 小白点过小）接菌前先进行小摇活化注：（1）检查摇床是否出现过不正常，比如说不小心关掉，温度不正常，转速达 不到等（2）操作的时候，严格按无菌操作流程做（杜绝外来污染
4、源）（3）确保摇菌时间最起码要在9个小时以上2. 沉降菌：步骤：（1）将玻璃培养皿清洗干净烘干后用报纸包扎好，连同配好的LB培养基放入灭 菌锅里高温灭菌后后使用（培养皿灭菌后应放进烘箱烘干后使用）（2）在超净工作台按采样需要将灭菌过的LB培养基平铺到各培养皿上（3）待培养皿上的LB培养基凝固后将相应的培养皿开盖放在相应的监控区域（4）15min后回收各监控区域的培养皿倒置放在小摇床上37摄氏度培养48小 时注：（1）实验前要将涉及沉降菌的器材准备充足并进行彻底灭菌（2）LB固体培养基必须无任何抗生素（3）测试前要确保被测试洁净区已经过消毒处理（4）采样需注意每个需测试空间的采样点不低于4个，平
5、皿不低于4个，恒温震荡培 养箱和洁净工作台内采样点和平皿数不低于2个（5）挑菌间和摇菌间测试应在空调净化系统正常运行30min以后进行3. 根据将要摇菌的数量配制培养基，需准备灭菌的物品如下：（1）每周一配制1600ml2*YT培养基;若有大量菌需要培养，则根据具体量确定（必须 使用质检合格的试剂原料和实验耗材（2）周一至少准备8盒200ul黄枪头，1盒1000ul蓝枪头，8个96孔深孔培养板（3）检查15ml和50ml离心管是否充足（4）牙签、离心管、封口膜注意：要使用质检合格的试剂耗材：在试剂瓶上贴有合格标签，在质检记录本上有保质 期等信息，若有疑问需咨询质控人员，每个月中旬要进行一次沉降
6、菌实验。4. 培养基2*YT:酵母粉（Yeast）、胰蛋白胨（Tryptone）、氯化钠、十二水合磷酸氢二钠、磷 酸二氢钾、硝酸钾、水【121摄氏度，20分钟灭菌锅内灭菌】4摄氏度冰箱内保存， 三天内用完LB：酵母粉（Yeast）、胰蛋白胨（Tryptone）、氯化钠、琼脂粉5. 加培养基：在加样槽外套一只紫外消毒的PE手套，将已加抗生素的培养基倒进加样槽中，倒培养基前先将锥形瓶瓶口在酒精灯外焰过火，倒的时候注意不能将液体倒 出手套外，倒完后重新将瓶口封好，不能暴露在空气中，根据摇菌表中记录的抗生 素类型，将含相应抗生素的培养基加入96孔深孔板中，每孔加2*YT培养基1000ul6. 接种：（
7、接种前将恒温震荡培养箱电源打开，设置转速为220转，温度为37摄氏度）（1）.菌液：吸取100ul菌液接入到已分好相应抗生素培养基的相应孔号，若菌液浓度 较低，则可加大接菌量，若菌有沉菌现象，可将枪头插进样品底部吹打混匀后再 接种（2）.菌体：用枪头吸取少许接入培养基中，然后用枪头吹打数次（3）.穿刺菌：用牙签插入到穿刺菌的穿孔中，稍微转动牙签，让牙签充分接触菌体， 将牙签取出后放入相应的培养孔中（4）.蓝白斑筛选菌：用10ul枪头挑取白色菌体接入到培养板的相应孔中（需挑取单 克隆菌）（5）.平板单克隆筛选菌：用10ul枪头在平板上按客户要求挑取相应的单一的微小菌 落接种到培养板的相应孔中（不能挑取太大或两个，三个粘连的菌落）注：注意核对抗生素的准确性，接菌前要对伸进超净工作台的双手进行酒精表面消毒， 接菌时不得超出超净台“安全线”之外，整个接菌过程中必须在酒精灯附近操作
