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1、实验食品中亚硝酸盐含量测定（格里斯试剂比色法）（）目的熟悉食品中亚硝酸盐的卫生标准，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。（二）原理样品经沉淀蛋白质、 除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在与 N1萘基乙二胺偶合形成紫红色染料后，与标准比较定量。（三）试剂实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。1氯化胺缓冲液 lL 容量瓶中加入 500ml 水，准确加人盐酸，振荡混匀，准确加入 50ml 氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至。2 L 硫酸锌溶液称取 120g 硫酸锌（ ZnSO4 7H20），用水溶解并稀释至1000ml。3. 20gL 氢
2、氧化钠溶液称取20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。4. 对氨基苯磺酸溶液称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。5. 0.1N 1萘基乙二胺溶液 称取 N 1荼基乙二胺，加 60乙酸溶解并稀释至 100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。6. 显色剂 临用前将 N 1萘基乙二胺溶液和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。7. 亚硝酸钠标准溶液 准确称取于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500ml 容量瓶中，加 100ml 氯化胺缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在 4避光保存。此溶液每毫升相当于 500ug 的亚硝酸钠。
3、8亚硝酸钠标准使用液临用前，吸取亚硝酸钠标淮溶液，置于100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于亚硝酸钠。（四）仪器1小型粉碎机2分光光度计（五）操作方法1样品处理 称取约 10.00g（粮食取 5g）经绞碎混匀样品， 置于打碎机中，加 70ml 水和 12m1 2氢氧化钠溶液， 混匀，用 2氢氧化钠溶液调样品至 pH8，定量转移至 200ml 容量瓶中加 10ml 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加 25m1 氢氧化钠，混匀。置 60水浴中加热 10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置，用滤纸过滤，弃去初滤液 20m1，收集滤液备用。2. 亚硝酸盐标准曲线的制备吸取 0，亚硝酸钠标准使用液（相当于0，5，10，15，20，25ug 亚硝酸钠），分别置于 25ml 带塞比色管中。于标准管中分别加入氯化胺缓冲液，加 2.5m1 60乙酸后立即加入显色剂， 加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用 1cm 比色杯（灵敏度低时可换2cm 比色杯），以零管调零点，于波长550nm 处测吸光度，绘制标准曲线。低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，亚硝酸钠标准使用液（分别相当于0，2，4，6，8，10ug 亚硝酸钠）。3. 样品测定：吸取上述滤液（样品处理滤液）于 25ml 带塞比色管中，其它操作同上。（六）结果计算
