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1、存档日期： 存档编号连云港师范高等专科学校毕 业 论 文（设 计）论文题目：酸奶中乳酸菌菌落总数的测定名：系科：生命科学系专业、班级：08生物技术及应用师：连云港师范高等专科学校教务处目录中文摘要3ABSTRACT31.引言42.材料与方法42.1 实验样品 42.2 主要的试剂与仪器 42.3 培养基52.4 准备工作 53实验过程53.1 编号53.2 样品稀释 53.3 制作平板 63.4 菌落培养 63.5 菌落计数 64.结果64.1 菌落观察结果 64.2 菌落计数结果 64.3 计算样液中的乳酸菌菌落数 75.分析与讨论8参考文献8中文摘要摘要: 本试验采用平板记数法，对完达山优
2、钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝 原味发酵型酸牛奶3个品牌市售酸奶中乳酸菌菌落总数进行了测定。测定结果显 示，完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3种市售酸 奶均符合国家标准(GB2746-1999)规定的质量标准。其中，完达山优钙酸牛奶中 乳酸菌菌落总数最多，平均达到298cfu/mL，最少是君乐宝原味发酵型酸奶平均 达到110 cfu/mL。关键词: 酸奶；乳酸菌；菌落总数的测定；平板记数法ABSTRACTAbstract: This test method to count the flat panel, WanDaShan optimal calcium yogur
3、t, YiLi flavor to the yogurt, JunLeBao plain yogurt fermentation type three the sold yogurt active lactobacillus total colonies were determined. The determination results showed that WanDaShan optimal calcium yogurt, Yili flavor to the yogurt, jun LeBao plain yogurt fermentation type three the sold
4、yogurt which conform to the national standard (GB2746-1999) stipulated quality standards. Among them, WanDaShan optimal calcium in the most lactic acid bacteria colonies yogurt, average was exceed 298 cfu/mL, At least a royal LeBao plain yogurt fermentation type average was exceed 110 cfu/mL.Keyword
5、s: yogurt, lactic acid bacteria, determination of total colonies, plate counting method酸奶中乳酸菌菌落总数的测定1.引言随着人们经济水平的提高及自我保健意识的增强，乳制品日益受到广大消费 者的喜爱。酸奶是以灭菌乳接种乳酸菌发酵而成，比普通牛乳的营养更丰富,其 蛋白质和钙更易于被人体消化吸收。酸奶还有增强消化、促进肠蠕动、增进机体 的物质代谢、产生有益抗生素、抗衰老、抗肿瘤等作用3，这是因为酸奶中含有 大量的乳酸菌。乳酸菌都对人体有益，但乳酸菌需达到一定数量，才有可能到达 并定植在人体肠道内，抑制有害菌的增殖
6、和活动，维持肠道的微生态平衡，增进 人体的健康。因此，乳酸菌数量是评价乳酸菌制品质量的重要指标。乳酸菌多数属于厌氧菌或微好氧菌,在普通培养条件下，乳酸菌菌体生长十 分缓慢，甚至不能生长,这给乳酸菌的研究带来了许多不便6。本试验拟采用中华人民共和国国家标准（GB4789.22010）中规定的食品 中菌落总数测定方法-平板记数法，对完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、 君乐宝原味发酵型酸牛奶 3 个品牌的袋装酸牛奶中乳酸菌菌落总数进行测定，以 考查市场酸奶产品的质量。2.材料与方法2.1 实验样品本实验以市售完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛 奶3 个品牌的袋装酸奶为实验材料。材
7、料均选自于连云港市新浦区苍梧路乐天玛 特大型超市。在产品保质期内完成测定，详情情况见表 1。表 1 样品编号及量取体积样品名称样品编 号量取体 积（ml）完达山优钙酸牛奶WDS1伊利原味酸牛奶YL1君乐宝原味发酵型酸牛奶JLB12.2 主要的试剂与仪器2.2.1试剂 生理盐水配制 称取9克氯化钠，用蒸馏水溶解定容至1000 ml，备 用。222主要设备与仪器 超净工作台（SW-CJ-1B）、手提式高压蒸气灭菌锅（上 海三申医疗器械YX280A）、恒温培养箱（PYX-120）、显微镜（OLYMPUS CH20）等。2.3 培养基在对完达山优钙酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶3个品
8、牌的袋装的酸牛奶进行的预实验中发现，乳酸菌不适合在普通牛肉膏蛋白胨培养 基上生长；然后在老师的指导与建议下，同时根据学校实验室现有条件，最终确 定本次实验采用LAB培养基（乳酸菌菌落计数用）。2.3.1培养基的主要成份LAB培养基的主要成份是，牛肉膏、酵母膏、乳糖、吐温80 、无水碳酸钙、无水磷酸二氢钾、琼脂、蒸馏水。2.3.2培养基（1000ml ）的配制及其灭菌 取一个白瓷缸洗干净后盛500毫升 蒸馏水放于电炉上加热，水沸后加入已称量好的牛肉膏10g、酵母膏10g、乳糖 20g、吐温80 1.0讪、无水碳酸钙10g、无水磷酸二氢钾2g，用玻璃棒不停搅拌, 再加入琼脂10 g,同时调低电炉温
9、度，不停搅拌，待琼脂全部溶解均匀时调pH值 至6.6,定容至1000ml，关掉电源，分装培养基。高压蒸汽灭菌，灭菌温度121C, 灭菌时间20分钟1，取出备用。2.4 准备工作将洗干净的培养皿，移液管，试管放置至彻底干燥，取适宜尺寸的干净牛皮 纸分别将培养皿、移液管、试管包扎紧矶然后高压蒸汽灭菌，灭菌温度121C, 灭菌时间15分钟，取出备用。3实验过程3.1 编号取无菌平皿3套，用记号笔标明10-7两套，剩余一个标明CK,为空白对照。 另取7支灭菌空试管，分别加入9ml灭菌生理盐水，排列于试管架上，用记号笔 依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。3.2
10、 样品稀释用1ml无菌吸管精确地吸取1ml完达山优钙酸牛奶样液加入10-1的试管中， 然后仍用此吸管将管内稀释液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开液面，使其混合均匀。另取一支无菌吸管自10-1试管中吸 1ml 放入 10-2中，吸吹三次，其 余依次类推，如此稀释到第 7 管，稀释度分别为 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、 10-7。伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发酵型酸牛奶分别按照以上叙述进行稀释。 通过预试验，本实验所采用的完达山优钙酸牛奶的稀释度为10-7，伊利原味酸牛 奶的稀释度为10-7，君乐宝原味发酵型酸牛奶的稀释度为 10-7。3.3 制作平板取 1ml
11、灭菌吸管，吸取 1ml 空白稀释液生理盐水加入 CK 中，做空白对照。用1支lml无菌吸管吸取10-7的完达山优钙酸牛奶稀释菌液1ml,放入编好 号的无菌平皿中，做两个平板，加上空白对照，共3个平板。分别在以上3 个培 养皿中注入15毫升已融化并冷却至45C左右的LAB培养基，并且迅速轻轻地、 小幅度地旋转几圈，使培养基均匀地平铺于培养皿底部，并且迅速在超净工作台 面上作平面旋摇，使稀释液与培养基充分混合。伊利原味酸牛奶、君乐宝原味发 酵型酸牛奶分别按照以上叙述进行平板制作。3.4落培养待培养基凝固后，移至37C恒温培养箱中，倒置，培养48小时。3.5 菌落计数计数时，采用肉眼观察，必要时用放
12、大镜检查 5，以防遗漏。先记下各培养 皿内菌落数后，再求出每个样品同一稀释度的各平皿的平均菌落数。4. 结果4.1菌落呈圆形，白色；大小不一，分布不均匀；4.2 菌落计数结果用直接计数法，记录每个平板的菌落数，然后计算每个样液同一稀释度的 两个平板的平均菌落数7。样品的测定与出厂间隔天数为3 天时，完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落数 分别为297、299，伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为251、265 ，君乐宝原 味发酵型酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为 174、180；样品的测定与出厂间隔天数 为6天时，完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为271、277，伊利原味酸牛 奶中乳酸菌菌落数分别为196
13、、200，君乐宝原味发酵型酸牛奶中乳酸菌菌落数 分别为127、135；样品的测定与出厂间隔天数为9天时，完达山优钙酸牛奶中 乳酸菌菌落数分别为212、214，伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为119、125， 君乐宝原味发酵型酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为108、112。详细结果见表2。表2 各样品的菌落计数的结果样品编 号空白对照-样品的测定与出厂间隔天数为3天样品的测定与出厂间隔天数为6天样品的测定与出厂间隔天数为9天平行1平行2平行1平行2平行1平行2WDS0299297271277212214YL0251265196200119125JLB01741801271351081124.3计算样
14、液中的乳酸菌菌落数同一稀释度做了两个平行样，稀释度均为10-7，按下列公式进行计算：计算公式为：N=EC/2Xd公式中：N样品中菌落数EC平板中菌落数之和d稀释度4.3.1计算结果样品的测定与出厂间隔天数为3天时，完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落数分 别为 297cfu/ml、299 cfu/ml,代入公式 N= EC/2 X d= (297+299) /2X 10?=298 X 107 cfu/ml,伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落总数分别为251cfu/ml、265 cfu/ml, 代入公式 N= EC/2Xd= (251+2 65) /2X 107=25 8X 107 cfu/ml,君乐宝原味发酵
15、 型酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为174cfu/ml、180 cfu/ml，代入公式N二EC/2X d= (174+180) /2X 107=177X 107 cfu/ml；样品的测定与出厂间隔天数为6天时, 完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为271cfu/ml、277 cfu/ml,代入公式 N= EC/2Xd= (271+2 7 7) /2X 107=2 74X 107 cfu/ml,伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌 落数分别为 196cfu/ml、200cfu/ml，代入公式 N=EC/2Xd= (196+200) /2X 107=198 X 107 cfu/ml ,君乐宝原味发酵型酸牛奶中乳酸菌菌落数分别为 127cfu/ml、135cfu/ml,代入公式 N= EC/2 X d= ( 127+135) /2 X 107=131 X 107 cfu/ml；样品的测定与出厂间隔天数为9天时，完达山优钙酸牛奶中乳酸菌菌落 数分别为 212cfu/ml、214cfu/m
