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1、xx 日：多酚氧化酶活性的测定。一、试验目的本试验的目的在于掌握多酚氧化酶活性测定的一般原理及操作技术。二、试验原理酚氧化酶（PPO）催化各种酚与02氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底 物，在0.2M磷酸氢二钠一0.1M柠檬酸缓冲液PH6.0的反应体系中，PP0催化 邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的0D值产生变 化，通过0D值上升的读数变化确定PP0的酶活大小。三、试验材料、试剂及试验用品材料：李子样本 80个（按照80个预算药品）李子处理：果实发育早期、果实发育中期、果实发育后期、发育中期果实用 1-MCP 处 理、发育中期果实用乙烯处理。药品：预冷的磷酸缓冲液（p
2、H6.4）20mLlmL（0.1mol/L） 邻苯二酚4mL磷酸缓冲液（pH6.4）四、实验方法：1. PP0的提取取lg李子果肉样品，冰浴研磨，加入预冷的磷酸缓冲液 （pH6.4）20mL，在4 C 下离心（4200r/min）10mi n,取上清液为蜜柚果肉PP0酶提取液。2. PP0活性测定采用比色法测定。将lmL（0.1mol/L ）邻苯二 酚加入4mL磷酸缓冲液（pH6.4）中，加入ImL酶液，立即于波长42 0nm下测定吸光度的变化，每隔20s记录1次，共记录3min。以不 加酶提取液的反应液做对照，以每分钟吸光度变化0.01为1个PP0酶活 性单位。3.最后作吸光度 A 与反应时间的关系曲线图，依据曲线最初直线段的斜率 （A/t）计算PPO活力。（注意空白为：2.5mL缓冲液和0.5 mL 0.01 mol/L邻苯二酚 溶液）一个酶活力单位定义为：以每分钟每毫升增加吸光值0.001的酶量为一个酶活力单位U。4.多酚氧化酶酶活的计算公式：E二Mx60/V （式 1）式中：M每秒钟增加的吸光值V粗酶液的体积/mL。
