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1、10 实实验10.11 显微微镜的使使用及微微生物形形态观察察10.11.1 目的要要求了解光学学显微镜镜的结构构、各部部分的功功能；掌掌握光学学显微镜镜的使用用、保养养方法；观察微微生物的的形态，学学会生物物图的绘绘制。10.11.2 器材和和材料10.11.2.1 仪仪器或其其它用具具光学显微微镜、镜镜纸、吸吸水纸等等。10.11.2.2 溶溶剂或试试剂镜油：香柏油油或石蜡蜡油。镜头清清洗液：二甲苯苯或醚醇醇清洗液液（乙醚醚70mmL，无无水乙醇醇30mmL）。10.11.2.3 菌菌种米酒酵母母、链霉霉菌、青青霉、曲曲霉、根根霉等装装片。10.11.3 实验内内容10.11.3.1 显显
2、微镜的的基本结结构普通光学学显微镜镜由机械械和光学学两大部部分组成成，见图图10.1。图10.1 显微微镜构造造示意图图1. 目目镜；22. 镜镜筒；33. 镜镜臂；44. 标标本移动动器；55. 粗粗动限位位器；66. 粗粗调节器器；7. 细调调节器；8. 镜座；9. 反光镜镜；100. 虹虹彩光圈圈；111. 聚聚光器；12. 载物物台；113. 物镜；14. 物镜镜转换器器（引自钱钱存柔、黄黄仪秀. 微生生物学实实验教程程. 北北京：北北京大学学出版社社. 119999）机械部部分镜座是显显微镜的的基座，使使显微镜镜能平稳稳地放置置在桌子子上。镜臂用以以支撑镜镜筒，也也是搬动动显微镜镜时
3、手握握的部位位。镜筒是连连接目镜镜和物镜镜的金属属筒。镜镜筒上端端插入目目镜，下下端与物物镜转换换器相接接。载物台是是放置标标本的地地方。镜镜台上有有压片夹夹用以固固定被检检标本，较较好的显显微镜则则有标本本移动器器，转动动螺旋可可使标本本前后和和左右移移动。有有的标本本移动器器带有游游标尺，可可定位标标本所在在位置。物镜转换换器安装装在镜筒筒的下端端，其上上装有334个个不同放放大倍数数的物镜镜，可以以通过转转动物镜镜转换器器选用合合适的物物镜。调节器安安装在镜镜臂的基基部，是是调节物物镜与被被检标本本之间距距离的装装置，通通过转动动粗调节节器和细细调节器器便可清清晰地观观察到标标本。光学部
4、部分物镜是显显微镜中中很重要要的光学学部件。根根据物镜镜的放大大倍数和和使用方方法的不不同，分分为低倍倍物镜、高高倍物镜镜和油镜镜三种，常常用的放放大倍数数为低倍倍物镜110、高倍倍物镜440、油镜镜1000。目镜是把把接物镜镜放大的的实像再再放大一一次，并并把物像像映入观观察者的的眼中。通通常有55、100等规格格。聚光器安安装在载载物台下下，能将将平行的的光线聚聚焦于标标本上，增增强照明明度。聚聚光器可可以升降降，升高高时增强强光强，下下降时减减弱光强强。虹彩光圈圈附于聚聚光器内内部，可可开大或或缩小，以以调节进进入镜头头的光线线的强弱弱。光圈圈大小应应适当，使使物像能能得到更更清晰的的效
5、果。反光镜是是普通光光学显微微镜的取取光设备备，使光光线射向向聚光镜镜，分平平、凹两两面，使使用低倍倍镜和高高倍镜均均应用平平面镜；凹面镜镜聚光力力强，适适合于光光线较弱弱时，一一般在使使用油镜镜时用凹凹面镜。内光源是是较好的的光学显显微镜自自身带有有的照明明装置，安安装在镜镜座内部部，由强强光灯泡泡发出的的光线通通过安装装在镜座座的集光光镜射入入聚光镜镜。其强强弱可进进行调节节。10.11.3.2 显显微镜的的使用方方法（1） 显微镜的的取用和和放置从显微镜镜箱或柜柜内取出出显微镜镜时，应应一手提提镜臂，另另一手托托镜座，让让显微镜镜直立，防防止目镜镜从镜筒筒中脱落落。显微微镜应直直立放置置
6、在桌上上。离桌桌缘3ccm，检检查各部部件是否否完好，镜镜身、镜镜头必须须清洁。（2） 标本放置置下降载物物台或升升高镜筒筒，使物物镜远离离载物台台。将低低倍镜转转至正下下方，把把标本玻玻片置于于载物台台上，用用标本夹夹夹住，移移动推进进器使观观察对象象处在物物镜的正正下方。（3） 低倍镜观观察侧面注视视，用粗粗调节器器调节上上升载物物台或下下降镜筒筒，使物物镜与玻玻片接近近，距离离约0.5cmm处，开开放光圈圈，下降降聚光器器。选用用平面反反光镜并并调节其其角度，使使视野内内光线均均匀，亮亮度适宜宜。如有有内置光光源灯可可通过调调节电压压以获得得适当的的照明亮亮度。再由目镜镜观察，同同时转动
7、动粗调节节器下降降载物台台或升高高镜筒，使使物镜逐逐渐远离离玻片，标标本在视视野中显显现后，再再使用细细调节器器调节至至图像清清晰。通通过玻片片夹推进进器慢慢慢移动玻玻片，认认真观察察标本各各部位，找找到合适适的目的的物，仔仔细观察察并记录录所观察察到的结结果。（4） 高倍镜观观察在低倍镜镜下找到到合适的的目标并并将其移移至视野野中心后后，侧面面注视，轻轻轻转动动物镜转转换器将将高倍镜镜移至正正下方。适适当调节节聚光器器光圈及及视野亮亮度，用用细调节节器使物物像清晰晰，利用用推进器器移动标标本，仔仔细观察察并记录录所观察察到的结结果。在一般情情况下，当当物像在在一种物物镜中已已清晰聚聚焦后，转
8、转动物镜镜转换器器将其他他物镜转转到工作作位置进进行观察察时，物物像将保保持基本本准焦状状态，这这种现象象称为物物镜的同同焦。利利用这种种同焦现现象，可可以保证证在使用用高倍镜镜或油镜镜等放大大倍数高高、工作作距离短短的物镜镜时，仅仅用细调调节器即即可对物物像清晰晰聚焦，从从而避免免由于使使用粗调调节器时时可能的的误操作作而损坏坏镜头或或载玻片片。（5） 油镜观察察使用同焦焦显微镜镜时，在在高倍镜镜或低倍倍镜下找找到要观观察的区区域后，移移开镜头头，在待待观察的的区域滴滴加12镜油油，将油油镜转至至油中，调调节光强强，使视视野的亮亮度合适适，用细细调节器器调节物物像清晰晰为止。对于不等等焦的显
9、显微镜，用用粗调节节器下降降载物台台或升高高镜筒，使使物镜逐逐渐远离离玻片，在在标本观观察区滴滴加镜油油，然后后将油镜镜转至镜镜筒下方方，须在在侧面注注视下，用用粗调节节器调节节上升载载物台或或下降镜镜筒，使使物镜与与玻片接接近，将将油镜前前端浸入入镜油中中，并几几乎与标标本相接接。将聚聚光器升升到最高高位置并并开足光光圈，调调节照明明，使视视野的亮亮度合适适，用粗粗调节器器上升镜镜筒或下下降载物物台，使使物镜缓缓慢离开开玻片，直直至视野野中出现现物像，并并用细调调节器使使其清晰晰准焦为为止。有时按上上述操作作还找不不到目的的物，则则可能是是油镜头头下降或或载物台台提升还还未到位位，或因因油镜
10、上上升或载载物台下下降太快快，以至至眼睛捕捕捉不到到一闪而而过的物物像。遇遇此情况况，应重重新操作作。另外外应特别别注意，不不要因在在下降镜镜头时或或提升载载物台时时用力过过猛或调调焦时误误将粗调调节器向向反方面面转动而而损坏镜镜头及载载玻片。（6） 显微镜用用毕后的的处理用粗调节节器使物物镜远离离玻片，取取下载玻玻片。用擦镜纸纸拭去镜镜头上的的镜油，然然后用擦擦镜纸蘸蘸少许镜镜头清洗洗液擦去去镜头上上残留的的油迹，最最后再用用干净的的擦镜纸纸擦去残残留的镜镜头清洗洗液。切忌用手手或其它它纸擦拭拭镜头，以以免使镜镜头沾上上污渍或或产生划划痕，影影响观察察。用擦镜纸纸清洁其其它物镜镜及目镜镜；用
11、绸绸布清洁洁显微镜镜的金属属部件。放平反光光镜，把把聚光镜镜降下，将将物镜转转成“八”字形，将将各部分分还原，归归置镜箱箱中。10.11.3.4 显显微镜的的维护和和保养显微镜是是贵重精精密的光光学仪器器，正确确的使用用、维护护与保养养，不但但观察物物体清晰晰，而且且延长显显微镜的的使用寿寿命。（1） 显微镜应应放置在在通风干干燥，灰灰尘少，不不受阳光光直接曝曝晒的地地方。不不使用时时，用有有机玻璃璃或塑料料布防尘尘罩罩起起来。也也可套上上布罩后后放入显显微镜箱箱内或显显微镜柜柜内，并并在箱或或柜内放放置干燥燥剂。（2） 显微镜要要避免与与酸、碱碱及易挥挥发具腐腐蚀性的的化学物物品放在在一起，
12、以以免显微微镜受损损。（3） 显微镜应应防止震震动和暴暴力。粗粗、细调调节螺旋旋、聚光光器螺旋旋和标本本移动器器等机械械部分要要灵活而而不松动动，如不不灵活可可在滑动动部位滴滴加少许许润滑油油。（4） 显微镜的的目镜、物物镜、聚聚光器和和反光镜镜等光学学部件必必须保持持清洁，防防止长霉霉。镜检检时通过过转动目目镜、物物镜及调调整焦距距等措施施判断灰灰尘或污污脏所在在部位，如如附有灰灰尘，则则先用吸吸耳球吹吹去灰尘尘，或用用擦镜纸纸轻轻擦擦去。若若有污脏脏，用擦擦镜纸沾沾镜头清清洗液轻轻轻擦拭拭，然后后用擦镜镜纸擦干干。显微微镜的金金属油漆漆部件和和塑料部部件，可可用软布布沾中性性洗涤剂剂进行擦
13、擦拭，不不要使用用有机溶溶剂。（5） 用油镜观观察后，先先用擦镜镜纸擦去去镜头上上的油，然然后用擦擦镜纸沾沾少许镜镜头清洗洗液擦拭拭，最后后用干净净的擦镜镜纸擦干干。10.11.4 实验报报告绘出你所所观察到到的几种种微生物物形态图图思考题1. 镜检玻片片标本时时，为什什么要先先用低倍倍物镜观观察，而而不直接接用高倍倍物镜或或油镜观观察？2. 油镜用毕毕后，为为什么必必须把镜镜油擦净净？用过过多的清清洗液擦擦镜油有有什么危危害？3. 观察时为为什么要要用左眼眼，并且且两眼都都应睁开开？10.22 细细菌的简简单染色色法及革革兰氏染染色法10.22.1 目的要要求学习并掌掌握无菌菌操作技技术；学
14、学习细菌菌涂片、染染色的基基本技术术；掌握握细菌的的简单染染色法和和革兰氏氏染色法法；巩固固显微镜镜（油镜镜）的使使用方法法和学习习生物绘绘图技术术。10.22.2 染色原原理细菌个体体微小，菌菌体透明明，必需需通过染染色使其其着色后后，才能能较好地地在光学学显微镜镜下观察察其个体体形态和和部分结结构。10.22.2.1 简简单染色色法利用细菌菌在中性性环境中中带负电电荷，而而碱性染染料如结结晶紫、美美蓝、碱碱性复红红、番红红等解离离后带正正电荷，细细菌与染染料具有有亲和力力而被着着色的原原理，采采用一种种单色染染料对细细菌进行行染色，称称为简单单染色法法。适用用于菌体体一般形形态的观观察。1
15、0.22.2.2 革革兰氏染染色是细菌学学中的一一个重要要的鉴别别染色法法。由于于应用了了结晶紫紫和番红红两种不不同性质质的染料料进行染染色，故故又叫复复染色法法。根据据细菌对对此种染染色法的的反应不不同，可可将细菌菌分为两两大类，菌菌体呈者者为革兰兰氏阳性性菌，呈呈红色者者为革兰兰氏阴性性菌。其其原因是是由于这这两类细细菌细胞胞壁的结结构和组组成不同同决定的的。革兰兰氏阳性性细菌的的肽聚糖糖层较厚厚，交联联度大，类类脂质含含量低，经经用乙醇醇（或丙丙硐）脱脱色等处处理主要要发生脱脱水作用用，而使使孔经缩缩小，通通透性降降低，初初染剂结结晶紫和和媒染剂剂碘的复复合物保保留在细细胞内不不被脱色色，结果果使细胞胞呈紫色色；而革革兰氏阴阴性菌的的肽聚糖糖层较薄薄，类脂脂含量高高，当脱脱色处理理时，类类脂质被被乙醇（或或丙硐）溶溶解，细细胞壁通通透性增增大，使使结晶紫紫和碘的的复合物物较容易易被洗脱脱出来，用用番红复复染后，细细胞被染染上红色色。10.22.3 实验材材料和用用具10.22.3.1 菌菌种大肠杆菌菌、白色色（或金金黄色）葡葡萄球菌菌、枯草草芽孢杆杆菌（培培养188244h的斜斜面菌种种）。应应用新鲜鲜幼龄的的菌体进进行涂片片。10.22.3.2 试试剂及染染液（1）齐齐氏石炭
