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1、 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、基础知识1. 尿素是一种重要的 氮 肥，农作物 不能 （能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为 氨和CO2 ，这是因为细菌能合成 脲酶 。2科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为 热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物 ，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供 有利于目的菌株生长 的条件（包括 营养、温度、PH 等），同时 抑制或阻止 其他微生物生长 。3. 在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是 稀释涂布平板 法 。除此之外， 显微镜直接计数 也是测定微生物数量的常用方法。4. 采用稀释涂布平板法统计菌
2、落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于 1 个活菌 。通过统计 菌落数 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30300 的平板进行计数。5统计的菌落数比活菌的实际数目 低 。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是 一个 菌落。因此，统计结果一般用 菌落数 来表示。6设置对照的主要目的是排除 实验组中非测试 因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。7对照实验是指除了 被测试 条件外，其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组 ，未满足该条件的称为 实验组 。二、实验设计1. 实验设计的内容包括 实验方案 、 材料用具 、 实施步骤
3、 和 时间安排 等。2根据图示27填写以下实验流程： 菌落计数 -配制土壤溶液 系列稀释 涂布平板与培养 3土壤微生物主要分布在距地表38cm的近中性的潮湿土壤中，约7090为 细菌 。4分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是 不同微生物在土壤中含量不同 。5 培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。细菌一般在 3037 培养12d，放线菌一般在 2528 培养57d，霉菌一般在 2528 的温度下培养34d。6菌落的特征包括 形状、大小、隆起程度、颜色 等方面。7实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要 灭菌 。2）应在 火焰 旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90
4、mL 无菌水 的锥形瓶中，塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 火焰 旁进行。4）实验时要对培养皿作好标记。注明 培养基类型、培养时间、稀释度 等。5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先 制订计划 。三、结果分析与评价1对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 生物化学 的方法。2在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 脲酶 将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性 增强 ，PH 升高 。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。3在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 红 ，说明该细菌能够 分解尿素
5、。巩固练习1从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有 （ A ）尿素有机氮化合物无机盐有机碳化合物水无机碳化合物A （1）（3）（4）（5） B（2）（3）（4）（5） C （1）（3）（5）（6） D（2）（3）（5）（6） 2可用于菌落数目统计的培养基是 （ A ） A 固体培养基 B液体培养基 C半固体培养基 D天然培养基3产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是 （ C ） A一个细菌 液体培养基 B许多细菌 液体培养基 C一个细菌 固体培养基 D许多细菌 固体培养基4要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用 （ B ）A加入青霉素的培养基 B 固体培养基 培养
6、基生长状态SCM_SCM + V +Z _SCM+U+Y+SCM+Z+X_SCM+v+Y+SCM+U+X_SCM+Y+Z+ C液体培养基 D加入高浓度食盐的培养基5右表资料表明在各种培养基中细菌的生长，SCM 为简单培养，UVXYZ代表加入培养基的不同物质，问哪一种物质细菌不能合成 （ C ）A. U B.V C.Y D.Z6培养基中浓度过高抑制微生物生长的原因是（ B ） A含热量太多 B 会使微生物失水 C 导致微生物休眠 D培养基中的碳源和氮源比例失衡7不同种类的细菌菌落表现为不同的特征，下列属于菌落特征的是菌落大小菌落形状菌落的隆起程度菌落的颜色菌落的透明度 （ D ）A（1）（2）（
7、3） B（2）（3）（4） C（1）（3）（4） D（1）（2）（3）（4）（5）8某同学在、100、1000倍稀释液的平均菌落数为2760、295、46,则菌落总数为 ( C ) A 27600 B 29500 C 46000 D 377509.下列氮肥能被植物直接吸收的是 (1)硝酸盐(2)尿素(3)磷酸二氢氨 (4) 氨 ( B )A (1)(2)(3)(4) B(1)(3)(4) C (2)(3)(4) D (1)(3) 10将某种细菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，经过一段时间后能得到 （ D ）A 无一定形态的群体 B 菌丝 C单个细菌 D菌落11.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效
8、应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是( D)A链霉素能阻止结核菌的生长B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D链霉素可以用于治疗伤寒病人12. 测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是(C)A细菌个体小，真菌个体大 B细菌易稀释，真菌不易稀释C细菌在土壤中数量比真菌多 D随机的，没有原因13. 用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的
9、对照是(C)A未接种的选择培养基 B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D接种了的选择培养基14. 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(A)AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、琼脂、水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、尿素、琼脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水15. 在涂布平板操作时错误的是(A)A将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红 B取少量菌液滴加在培养基表面C将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后
10、，冷却8=s10s再用D涂布时可转动培养皿，使涂布均匀16. 在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，下列不属于厌氧细菌生存环境的是(C)A土壤深层 B人或动物体内寄生 C真空 D池塘淤泥17. 下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是(D)A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数18.在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于(D)A空白对照 B标准对照 C相互对照 D条件对照 / /
