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1、文件名：无菌检查标准操作程序）者多个5 %或2（取较w 2编号：SOP-QC-1101-A3 2 0 个0 0品射产及其他非注眼用（生物制品)2 %或11 0 个 20 00个（取较少者)料原无个每容器菌固体桶装4 w 者较取多）容或20%4个器（5 04 5 0（ 5 g ）药原料抗生素固体6个容器品液或的半成品生物制原制容个每容每个器（器品样取不少%量总的0 .1或为量上应，次瓶开每于10m l如抽法验）3m 1）每于少应品成半制断诊外体用品量不验抽批（）（10%或4件取器医疗具较多者1 0 0 w 1 0 件 5 0 01 00 N 5 0 0医疗器具培半量，但不得少4 0 m l lm
2、 l 1 全M量v 50mg半 M 300m g50m g w量0 0 m l剂固体制150mgM 射剂（大体积注品）起草日期：冻干血液制品审核日期：200w柜冻干每批准日期：5个颁发部门：质量管理部 5ml发布日期：每柜冻干实施日期：1 0个5个2 0 0 w 1 0 0分发范围：QC 个1 0 1 0 0 N w 5 0 05mlw供试品1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。3职责微生物检验员遵照执行。4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是 否无菌的一种方法 。若供试品符合无
3、菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现 微生物污染。无菌检查应在无菌条件下进行， 试验环境必须达到无菌检查的要求， 检验全过程应严格遵守无菌 操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、 工作 台面及环境应定期按医药工业洁净室（ 区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家 标准进行洁净度确认。 隔离系统应定期按相关的要求进行验证， 其内部环境的洁净度须符合无菌 检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养， 也可用于需氧菌的培养； 胰酪大豆胨液体培养基 用于真菌和需氧菌的培养。4.1.1
4、 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备， 亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。 配制 后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2?25 C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一 般 在 3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。硫乙酵酸盐流体培养基 4.1.1.1胰酪胨15. 0g氯化钠2. 5g酵母浸出粉5. 0g新配制的0. 1 % 刃 天无水葡萄糖5.0g青溶液1.0mlL-胱氨酸0. 5g琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g水1000ml（或硫乙醇酸）（ 0.3ml）除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解 ，调节 p H 为
5、弱碱性， 煮沸 ，滤清 ，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H，使灭菌后在25C的p H值为7.1 土 0.2。分装至适宜的容器中， 其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层 （ 粉红色 ）不超过 培养基深度的 1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100 C水浴加热至粉红色消失（不释过 2 0分钟），迅速冷却 只限加热 一次, 并防止被污染。除另有规定外 ，硫乙醇酸盐流体培养基置30? 35C 培养。4.1.1.2 胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨1 7 . 0g氯化钠5.0g大豆木瓜蛋白酶水解物3. 0g磷酸氢二钾2. 5g葡萄糖 /
6、无水葡萄糖2. 5g/2. 3g 水1000m l除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节p H使灭菌后在2 5C的p H值为7. 30. 2，加入葡萄糖，分装 ，灭菌 。胰酪大豆胨液体培养基置20?2 5 C培养。4.1.1.3 中和或灭活用培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。4.1.1.40.5% 葡萄糖肉汤培养基 （用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）胨1 0 . 0g 氯化钠5 . 0g牛肉浸出粉3 . 0g水1000m l葡萄糖5. 0g除葡萄糖外，取上述成分混合
7、，微温溶解，调节 p H 为弱碱性，煮沸 ，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH使灭菌后在 25C的p H值为7. 2 士 0.2，分装，灭菌。4.1.1.5 胰酪大豆胨琼脂培养基1 5 . 0g琼脂 15.0g 胰酪胨大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g水 1000m l氯化钠5.0g除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H使灭菌后在 25C的p H值为7.3 士 0.2 ,加入琼脂 ，加热溶化后 ，摇匀 ，分装，灭菌。4.1.1.6 沙氏葡萄糖液体培养基 动物组织胃蛋白酶水解物水 1000m l和胰酪胨等量混合物 10. 0g葡萄糖 20.0g除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，调节
8、p H使灭菌后在25C的p H值为5. 6 士 0.2， 加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。4.1.1.7 沙氏葡萄糖琼脂培养基动物组织胃蛋白酶水解物琼脂 15.0g和胰酪胨等量混合物1 0 . 0g 水 1000m l葡萄糖40.0g除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节p H 使灭菌后在 25 C 的 p H 值 为5.6 士 0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。4.1.2 培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查 的 要求 。本检查可在供试品的无菌检查、/.前或与供试品的无菌检查同时进
9、行。4.1.3无菌性检查每批培养基随机取不少于5 支(瓶 )5置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。4.1.4 灵敏度检查4.1.4.1 菌 种 培 养 基 灵 敏 度 检 查 所 用 的 菌 株 传 代 次 数 不 得 超 过 5代 ( 从 菌 种 保 存 中 心 获 得 的干 燥 菌 种 为 第 0 代 )，并采用 适 宜 的 菌 种 保 藏 技术 进 行 保 存 ，以 保 证 试 验菌 株 的 生 物 学 特 性 。金 黄 色葡 萄 球 菌 ( Staphylococcus aureus ) C M C C ( B)26 003 铜 绿 假单 胞菌 ( Pseudomonas ae
10、ruginosa ) C M C C ( B)10 104枯 草 芽孢 杆菌 (Bacillus subtilis ) CMCC(B)63 501生孢 梭 菌 (Clostridium sporogenes) CMCC(B)64 941 白 色 念珠 菌 (Candida albicans) CMCC(F)98 001CMCC(F) 98 003 (Aspergillus niger) 霉 曲 黑4.1.4.2 菌 液 制 备接 种金黄 色葡萄球菌、 铜绿 假单胞 菌 、 枯 草 芽 孢杆 菌 的 新 鲜培 养物 至胰酪大 豆 胨液 体培 养基 中或胰酪大豆胨琼脂 培养基上，接 种 生 孢梭
11、菌的 新 鲜培 养物 至 硫 乙 醇 酸盐流体培养基中，30? 35C培养18? 24 小时 ； 接 种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上， 20? 25C培养 24?48小时1寸，上述培养物用PH7. 0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0.9% 无菌氯化钠溶液制成每lm l 含菌数小于l00cfu(菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上520? 25C培养5? 7天，加入3? 5m l含0. 05%(ml/m l) 聚山梨酯 8 0的pH7. 0无菌氯 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氯 化 钠 溶 液 ，将 孢 子 洗 脱 。然 后 ， 采用 适 宜 的 方 法 吸 出 孢 子 悬 液 至 无 菌 试 管 内 ，用 含 0.05% （m l/m l） 聚 山 梨醋80 的 pH7. 0 无 菌 氯 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9
