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1、一采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸1. 氨基酸测定原理：食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三 酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。2. 测定氨基酸所用仪器：真空泵;恒温干燥箱;水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积2030mL。用去离 子水冲洗干净并烘干;真空干燥器（温度可调节）;氨基酸自动分析仪。3. 测定氨基酸所用试剂及其配制方法：3.1试剂：全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。浓盐酸（优级纯）;苯酚（须重蒸馏）；混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.00250mol/L; 不同pH值柠檬酸钠缓冲液；氢氧化锂（Li
2、OHH2O）；冰乙酸（优级纯）；二甲基亚飒（C2H6OS）； 水合茚三酮（C H O -H O）；还原茚三酮（C qH 0-2H O）;NaOH；高纯氮气（纯度99.99%）；冷 冻剂：市售食盐与冰按1 : 3混合。3.2试剂配制方法：3.2.1. 6mol/L盐酸：浓盐酸（3.1）与水1 : 1混合而成。3.2.2. pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O72H2O）和16.5mL浓盐酸加 水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2。pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到1000mL， 用浓盐酸或5
3、0%的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用 浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到 1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。3.2.3. 茚三酮溶液pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOHH2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279mL，加水 稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至5.2。茚三酮溶液：取150mL二甲基亚飒（C2H6OS）和乙酸锂溶液（3.6.1）50
4、mL加入4g水合茚三 酮（CHQyH,。）和0.12g还原茚三酮仁。/?是。）搅拌至完全溶解。9 4 3218 10 62二.液相法测定氨基酸柱前衍生法：参见文献（高效液相色谱柱-前衍生化法测定饲料中的含硫氨基酸 柱前衍生化反相高效液相色谱法测定板蓝根中的氨基酸 高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸含量）1. 仪器:Waters2695 HPLC; Waters2998 PDA检测器；电热恒温鼓风干燥箱色谱柱：Phenomenex Luna C （250mm X4.6mm,5pm）试剂：流动相A： 0.1mol/L醋酸钠缓冲液（以醋酸调pH6.5）-乙月青（93:7）流动相B：乙月青-
5、水（4:1）梯度洗脱检测波长：254nm2. 试剂：衍生试剂：PITC（异硫氰酸苯酯）；浓盐酸；三乙胺；正己烷；苯酚；氨基酸标准品 衍生化试剂的配制方法：1mol/L三乙胺-乙腈溶液：取三乙胺7mL加乙腈稀释至50M10.01mo1/L PITC-乙月青溶液：取PITC 60gL加乙腈稀释至50mL柱后衍生法：参见文献（高效液相色谱法同时测定糯米酒中17种氨基酸）1. 仪器：ShimadzuLC-20A高效液相色谱仪（在线脱气机，荧光检测器，柱温箱）；电子天平分析柱：钠离子交换柱（4.0X150mm,5gm）保护柱：钠离子交换柱（3.0X20mm,5im）检测波长：350-450nm梯度洗脱2. 试剂流动相A： 0.20mol/L柠檬酸钠（高氯酸调配pH至3.2）；流动相B： 0.60mol/L柠檬酸钠与0.20 mol/硼酸，（4mol/LNaOH调配pH至10.0）流动相C: 0.2mol/LNaOH溶液；OPA （氨基甲酸酯）衍生化试剂；氨基酸标准品三 国标饲料中氨基酸测定GB/T18246-2000详见国标
