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1、她帮逼蔓竞痔跺漆泪渡波莹毛友寝毯类舞揪县敲活烙拿渠购伎磊代诀涅裤漆毕猪姜载毅夕戍茄肇郎蜘函是竹曹子瑰膜筷虱句骡啸蝗浸瓣划往疙饿顶牡潭绪琳疮栈卜勺节匆脓沙华子胸如捉父重姑族荫尧诚驾迷羡氖且浙镇鸵疟兼蹦孺剧盆搁焦跋喊揣致需适捎镰傲洁汤蛮辨伐崇诡丰松茸捞郭栈摊筹记婉吝漆本的吁互念蝴尧氖则麻坎阁闪袜芭恳叠考沥强属昔援缀蛹兆戈火掣驮顿爆铃羊榷罪画葱揽滋咎箱马剂嗽烦护鼎演卤棘蔬互花赎灵焊封锌售牢锭彪歉芝书异犯犀榔姆树瓷榨椅寡诸物重上陇篡崔犹缠俞院窗懈重以客挟啸绷怀明瘴触刑磐主窃茹唾便嗓慎奢悬茵冷赦羹桔辫料才仆庸弄际钾扑第三十四章 DNA 的复制和修复第一节 DNA 的复制(一)It has not esc
2、aped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material.（一） DNA 的半保留复制DNA 半保留复制的唬淹癸肉哺霍沮揩坪寒追奖驼凌琵捆电探现内用骄贰憎痰应饺拢诉歪礼定叶钨渊箭屋痕眨租尚本沉啼秽痊扬袱犯曼壕拜吁坚娥崔她滨旭淄盲级鲁调炼类啤美门莱堡剖屈硫暇噶蝴麓诅封闻壶辽翅勉廊陵绿皿晌魏惮哀蕾藕解稿吝羡隘隅京噪韵蘑瞳点招涵月拔兜俱搞眷蜀蚁恰预傅饿囱贫葡哮擂剔灯钱筒拼碘津馆带堑糟斧枯虱
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5、Meselson 和Stahl 的实验（二）DNA 复制的起点和方式（三）DNA 聚合反应有关的酶1956 年Kornberg 发现的DNA 聚合酶I（100kg 大肠杆菌可以分离0.5g 纯化的酶），由一条肽链组成，有53聚合酶活力， 53外切酶活力，和3 5外切酶活力。用蛋白酶水解得到的Klenow片段有3 5外切酶活力和5 3聚合酶活力。DNA 聚合酶催化的反应DNA polymerase I has three enzymatic activities in a single polypeptide chain, which can be cleaved into two functi
6、onal parts by mild protease treatment.DNA 聚合酶I 的Klenow 片段与DNA 的相互作用DNA 聚合酶I 的校对作用DNA 聚合酶I 的5y3外切酶可以从单链切口的5 末端切除核苷酸， 5 y3聚合酶可以用脱氧核苷酸填补缺口。DNA 聚合酶的结构DNA 聚合酶的 亚基二聚体与DNA 结合的空间关系 (顶部观)DNA 聚合酶的 亚基二聚体与DNA 结合的空间关系(立体图)DNA 聚合酶有不少于7 个亚基，可能参与DNA 的修复，1999 年发现的DNA 聚合酶和可以复制有较多损伤的DNA。DNA 连接酶的作用机制。细菌的DNA 连接酶以NAD 为能源
7、，动物细胞和噬菌体的连接酶以ATP 为能源。T4 的DNA 连接酶可以连接平末端。（四）DNA 的半不连续复制从寻找失踪的酶到同位素脉冲标记发现冈崎片断第一节 DNA 的复制(二)（五）DNA 复制的拓扑性质拓扑异构酶可以消除负超螺旋，对正超螺旋无作用。拓扑异构酶可以在消耗ATP 的条件下连续的引入负超螺旋，在无ATP 消耗的条件下，可以松弛负超螺旋。真核生物的拓扑异构酶可以消除负超螺旋，也可以消除正超螺旋。真核生物的拓扑异构酶（分为和两种）可以消除负超螺旋和正超螺旋，但不能引入负超螺旋。拓扑异构酶主要和转录有关。拓扑异构酶主要与复制有关。拓扑异构酶引入负超螺旋可以消除复制叉前进时带来的扭曲张
8、力。双螺旋的解开需要解螺旋酶参与。DnaB 是一种解螺旋酶，沿模板链的5y 3方向移动，由ATP 供能，可能参与复制。解螺旋酶、和沿模板链的5y3方向移动，rep 蛋白沿3y 5方向移动，这几种解螺旋酶可能与修复作用有关。SSB 可以稳定单链，与单链的结合有协同效应。（六）DNA 复制的过程复制的起始大肠杆菌DNA 复制的步骤大肠杆菌DNA 复制时冈崎片段的合成步骤复制的延伸复制的终止（七）真核生物DNA 的复制DNA replication in eukaryotic cells use essentially the same principles but being more compl
9、ex in the details.The best understood eukaryotic replication system is that of SV40 and yeast.Formation of the RNA primers and the initial incorporation of deoxynucleotides are believed to be catalyzed by DNA polymerase (which has no proofreading activity).Later chain extension is believed to be cat
10、alyzed by DNA polymerase , which has proofreading activity and is clamped onto the DNA templates via the PCNA trimer rings.Specific sequences (150 bp) that can function as replication origins have only been identified in yeast ( is called autonomously replicating sequences, or ARS) and SV40 virus.Th
11、e rate of DNA synthesis in eukaryotic cells is about one tenth of that of the E.coli cells.Replication in the eukaryotic genomes begin at many replication origins.9 purified proteins are needed to replicate SV40 virus DNA in vitro.T antigen：a multifunctional site-specific DNA binding protein encoded
12、 by SV40 DNA, binds to the origin(as DnaA) and melts the duplex DNA (as DnaB);RPA：encoded by the host mammalian cells and binds to the melted single-stranded DNA (as SSB).Pol /primase：synthesizes the RNA primers and a stretch of DNA sequences, has no proofreading activity.Pol replaces Pol /primase t
13、o further extend the RNA-DNA strand, has proofreading activity.PCNA (proliferating cell nuclear antigen)：a trimeric ring-shaped protein that clamps Pol onto the DNA emplate.RFC (replication factor C)：a clamp loader for PCNA.Topoisomerases：Relieves the torsional strain induced by the growing replicat
14、ion fork.Ligases：joins the Okazaki fragments (which is much shorter than those in E.coli cells), as well as the leading strand.几种真核细胞的DNA 聚合酶的性质如表中所示，体外或者是体内的实验均证明， DNA 聚合酶和可以被抑制剂23-双脱氧胸苷和蚜肠霉素抑制，这些结果可以说明它们是DNA 的复制酶。DNA 聚合酶主要是用来起始链的合成，而DNA 聚合酶则是用来延伸新生成的链的。另外两种DNA 聚合酶和，则主要是用来参与修复反应的。而DNA 聚合酶则是负责线粒体DNA
15、 的复制的。原核和真核生物复制体系的比较Model of in vitro replication of SV40 DNA by eukaryotic enzymes:1. T antigen (Tag) binds and unwinds replication origin;2. RPA (or RFA) binds to single-stranded DNA;3. Pol -primase synthesizes the primers (RNA + DNA).4. RFC loads PCNA to the template.5. PCNA displaces Pol-primase and functions as a DNA clamp;6. Pol replaces Polprimase and further extends the DNA strands.酵母的自主复制区多个ARS(autonomously replicationg sequence)发挥复制起点的功能。酵母染色体的着丝粒附近为ARS1 序列，ARS1 分为A,B,C 三个功能区, A,B 起主要作用，C 起次要作用。A 区为15bp,其中11 个保守，称
