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1、实验二高效液相色谱法检测饮料中甜味剂一、实验目的学习高效液相色谱仪的基本操作，分析测定汽水、可乐型饮料、果汁、果茶 等食品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的色谱条件选择。二、实验原理试样中乙酰磺胺酸钾、糖精钠经高效液相反相C18柱分离后，根据保留时间 定性，外标峰高或峰面积定量。三、实验器材1、试剂1.1甲醇：色谱纯。1.2乙腈：色谱纯。1.3 0.02 mol/L硫酸铵溶液，称取硫酸铵2.642 g，加水溶解至1000mL。1.4 10%硫酸溶液。1.5中性氧化铝层析用，100目200目。1.6乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储备液：精密称取乙酰磺胺酸钾、糖精钠各 0.1000g，用流动相溶解后移入100mL
2、容量瓶中，并用流动相稀释至刻度，即含 乙酰磺胺酸钾、糖精钠各1mg/mL的溶液。3.7乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准使用溶液：吸取乙酰磺胺酸钾、糖精钠标准储 备液2mL于50mL容量瓶，加流动相至刻度，然后分别吸取此液1mL、2mL、 3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，各加流动相至刻度，即得各含乙酰磺胺酸 钾、糖精钠 4pg/mL、8pg/mL、12pg/mL、16pg/mL、20pg/mL 的混合标准液系列。3.8 流动相：0.02mol/L硫酸铵（740800）+甲醇（170150）+乙腈（9050） +10%硫酸（1mL）。2、仪器高效液相色谱仪（配有紫外检测器）；超声清洗仪（溶剂脱气
3、用）；离心机； 抽滤瓶；G3耐酸漏斗；微孔滤膜0.45m；层析柱，可用10ml注射器筒代替， 内装3cm高的中性氧化铝。四、实验步骤1、试样处理1.1汽水：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取试样2.5mL于25mL 容量瓶中。加流动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液作HPLC分 析用。1.2可乐型饮料：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取已除去二氧 化碳的试样2.5mL，通过中性氧化铝柱，待试样液流至柱表面时，用流动相洗脱， 收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气，此液作HPLC分析用。1.3果茶、果汁类食品：吸取2.5mL试样，加水约20mL混匀后，离心15min (
4、4000r/min)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用流动相洗脱。收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气，此液作HPLC分析用。2、色谱测定2.1 HPLC参考条件分析柱：Spherisorb C18、4.6mmx150mm。粒度 5pm。流动相：0.02mol/L 硫酸铵(740mL800mL)+甲醇(170mL150mL)+乙 腈(90mL50mL)+10% H2SO4(1mL)。波长：214nm。流速：0.7mL/min。2.2标准曲线：分别进样含乙酰磺胺酸钾、糖精钠4pg/mL、8pg/mL、12pg/mL、 16瞄/mL、20pg/mL混合标准溶液各10pL，进行H
5、PLC分析，然后以峰面积为 纵坐标，以乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量为横坐标，绘制标准曲线。2.3试样测定：吸取处理后的试样溶液10皿进行HPLC分析，测定其峰面积， 从标准曲线查得测定液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量。HPLC色谱图见图1：JUlAI1乙酰礴胺我押；-就精钠13 咖咋因*4 天门冬眺蒸丙氯酸甲随，图13、结果计算试样中乙酰磺胺酸钾的含量按下式计算：v V 1000X cm 1000式中：X一试样中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg 或 mg/L）；C由标准曲线上查得进样液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠的量，单位为微克 每毫升（四g/mL）；V一试样稀释液总体积，单位为毫升（mL）；m一试样质量，单位为克或毫升（g或mL）。计算结果保留两位有效数字。4、精密度在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。五、思考题1、分析总结本实验中产生测定误差的原因。2、正相液相色谱与反相液相色谱的区别？乙腈在流动相中的作用是什么？
