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1、浙江万里学院毕业设计（论文）题目乐昌含笑组织培养过程中根的诱导研究姓名 俞慧丽学号 系别生物与环境学院专业生物技术034指导教师吴月燕摘要以乐昌含笑离体培养得到的无根苗为试验材料，采用5因素4水平的正交设计， 研究不同因素不同水平对乐昌含笑诱导生根的影响。结果表明：NAA对乐昌含笑生 根作用影响最大,其次是IBA，再次是MS培养基，而IAA和6-BA对诱导生根的作用 很小；最佳激素浓度分别为1.0mg/LNAA，0.5 mg/LIBA，1/2MS，0.5mg/LIAA，0.8mg/L6-BA ；最佳生根培养基组合为1/2MS+1.0mg/LNAA+0.5 mg/LIBA ；并以最佳 组合为生根
2、培养基，研究不同添加物（维生素C、6-BA、维生素E、活性碳）对乐昌 含笑生根诱导的影响，发现添加物活性碳（AC）和维生素E对生根诱导有明显的促 进作用。关键词：乐昌含笑；组织培养；诱导生根ABSTRACTSeedlings without root of Michelia chapensis from tissue culture were used to investigate the effect of different hormones and sucrose in the medium on induction of root with the orthogonal design
3、L16(45). The results showed that the effect of NAA on rooting was the most obvious, next was IBA, then MS medium, but the effect of IAA and 6-BA was quite small. The best levels of different hormones were 1.0mg/LNAA, 0.5 mg/L IBA, 1/2 MS, 0.5mg/L IAA, and 0.8mg/L 6-BA, respectively. The growth of ro
4、ots was best on 1/ 2MS medium with the addition of 1.0 mg/L NAA +0.5 mg/L IBA. Then, take 1/2MS medium with the addition of 1.0 mg/L NAA + 0.5 mg/L IBA. Meanwhile, the effects of different additives (vitamin C, 6-BA, vitamin E and AC) in the sample on induction of root were also studied in this pape
5、r. The results demonstrated that the addition of AC and vitamin E were good for rooting induction.Key Words: Michelia chapensi; tissue culture; rooting induction目录1前言12材料与方法22.1材料22.2方法22.2.1材料消毒22.2.2试验设计32.2.2.1不同基本培养基浓度与不同激素种类和浓度的试验32.2.2.2不同添加物的试验32.2.2.3暗培养的试验32.3统计方法53结果与分析53.1不同基本培养基浓度与不同激素种类
6、和浓度对诱导生根的影响53.1.1不同基本培养基浓度对诱导生根的影响83.1.2不同激素种类和浓度对诱导生根的影响83.1.2.1 NAA对诱导生根的影响 83.1.2.2 IBA对诱导生根的影响 93.1.2.3 IAA对诱导生根的影响 93.1.2.4 6-BA对诱导生根的影响 93.2不同添加物质对诱导生根的影响103.2. 1活性碳（AC）对诱导生根的影响 103.2.2维生素E对诱导生根的影响113.2.3维生素C对诱导生根的影响113.2.4 6-BA对诱导生根的影响 113.3暗培养对诱导生根的影响114结论与讨论12参考文献14致谢15附录1外文翻译16附录2文献综述271刖言
7、乐昌含笑又名景列含笑，属木兰含笑属，常绿乔木，为南方的兰花，是含笑属 中较为耐寒的常绿树种。其树形壮丽，树干通直，分枝均匀，枝叶茂密，花黄白色， 芳香优美，适宜与在江浙一带种植。近10年以来，乐昌含笑在黄河以南各省广泛引 种栽培，适应性强，生长快，已成为新优绿化观赏树种。在园林绿化上，广泛应用 于行道树，庭阴树及园林风景树，特别是在提高城市环境质量方面有着重要的应用 价值和发展前景。乐昌含笑还具有干形通直，木材纹理直，密度小，干缩差异小， 易干燥，不翘曲，不弯裂，生长迅速等特点，符合用材林的培育目标，是马尾松， 杉木等针叶树种的理想代替种。但由于长期以来对乐昌含笑天然林的掠夺性利用， 导致目前
8、南方林区乐昌含笑天然林资源的严重破坏，且日趋枯竭。乐昌含笑在自然条件下以种子繁殖为主，但种子量少，价格较昂贵，且由于受 环境的制约以及物种自身的原因，发芽率低，成苗率不高，生根难。常规繁殖速度 慢而且易产生变异。人工栽培主要是进行播种繁殖，扦插繁殖成活率极低，木兰科 植物中，鹅掌楸、紫玉兰及含笑属中的一些种扦插已获成功，但该科中的常绿树种生 根率普遍低于落叶树种，而乐昌含笑尚未见成功报道1。目前，由于对该树种缺乏 系统研究，不能为绿化与生产造林提供足够的合格苗，加之种子来源困难不敷育苗 所需，常规繁殖技术尚不成熟，从而制约了种苗产业化与造林规模化的发展。在生 产实践中，采用组织培养繁殖技术，不
9、仅能有效克服种源欠缺，解决生产应用过程中繁 殖速率低的矛盾，而且还能保留母树的优良性状,快速繁育良种，建立优良的无性系，对 保存优良树种的种质资源具有重要的现实意义。选择性状优良的母种，选取乐昌含 笑的带芽茎段作为外植体，基于前期工作芽和愈伤组织诱导与分化，选取长势优良 的试管苗，进行根的诱导。本试验通过对影响乐昌含笑组织培养中根的诱导的不同 因素进行正交试验，获取试管苗快速生根的最佳培养条件，近一步使乐昌含笑能够 通过组织培养的方法来实现快速繁殖。随着木兰科植物品种化产业化的进展，组织培养技术将日显其重要。就目前的 具体情况来说，除鹅掌楸外，其他木兰科植物的组织培养的报道并不多，有关根的 诱
10、导方面的研究甚少。南京林业大学基于杂种鹅掌楸的产业化发展，开展了杂种鹅 掌楸苗木工厂生产的体细胞胚胎发生技术研究，已趋于成熟。其他研究所涉及的树 种还包括白玉兰，广玉兰，二乔玉兰，厚朴和凹叶厚朴，以及醉香含笑和深山含笑， 乐东拟单性木兰等，大部分处于初步探索阶段，表现在愈伤组织诱导不定芽产生， 不定根形成等阶段均较难以突破。华南植物圆曾宋君等报道了深山含笑的组织培养 技术研究结果，利用实生苗的胚轴为外植体在改良MS+培养基上成功实现了愈伤组 织和不定芽及诱导生根，生产组培苗1,2。木兰科植物在组织培养过程中，一般很难 诱导生根，生根率很低。本试验基于前人对木兰科植物组织培养上的研究，结合乐 昌
11、含笑的品种选育，运用了其组织培养技术，实现了生根诱导，为乐昌含笑品种的 组织培养技术规模化繁殖的继续研究积累了基础。2材料与方法2.1材料选取长势良好的高约为3.0cm的无根苗作为根的诱导的试管苗。2.2方法2.2.1材料消毒选用取自室内盆栽多年生植株的长势良好的，带有34个芽（含顶芽，腋芽）， 的茎段作为外植体。先将外植体进行预处理，即把刚从植株上剪下来的枝条不做任 何处理就直接放进冰箱里，在34C的条件下冷处理45天。冷处理是防止褐变 的有效方法。然后取出用先自来水冲洗，洗去表面残留物质。再将枝条在洗洁精中 浸泡510分钟，然后用自来水反复冲洗31小时后用蒸馏水冲洗45次，直到枝 条中不含
12、残留的洗洁精。在超净工作台上将枝条先剥除幼叶，修成23cm的茎段， 每个茎段上必须带有两个芽（顶芽或腋芽）。将茎段放入含有2%漂白粉的蒸馏水中 浸泡2030分钟后再用蒸馏水反复冲洗干净。先用75%酒精浸泡30s，用无菌水洗涤 23次，再用0.1%升汞浸泡6min，用无菌水洗涤5-6次，使茎段不含残留的灭菌 试剂。消毒时必须不断摇晃.将灭菌处理的茎段放在事先灭菌的滤纸上吸干表面水 分，把消毒过的伤口剪掉，然后接种于三角瓶中。培养基高压灭菌条件为压力 11kg.cm-2,121C 时保持 20min。将消毒处理后的外植体接种到MS+Zeatin2.0mg/L+6-BA2.0mg/L诱导培养基上 进
13、行芽和愈伤组织的诱导培养。如果嫩茎在培养基上诱导出的新芽，等其长至1.5 2.0cm时接入1 /2MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L分化增殖培养基;如果叶片与嫩茎诱 导后形成愈伤组织，形成40天后再转接在脱分化培养基上进行分化增殖培养3。30天 后选取继代培养的嫩梢，在壮苗培养基上培养35天。每35天继代一次,以获得优质健 壮小苗，为进一步诱导生根作准备.再将高为3.0cm的无根苗转到生根培养基上，进行 根的诱导。2.2.2试验设计2.2.2.1不同基本培养基浓度与不同激素种类和浓度的试验采用不同MS基本培养基(MS,1/2MS,1/3MS, 1/4MS)和不同浓度的植物生长激
14、 素(萘乙酸NAA,吲噪丁酸IBA,吲噪乙酸IAA, 6-苄氨基嘌吟6-BA)(表1),进 行正交试验。即L16 (45)正交设计(表2)。2.2.2.2不同添加物的试验通过基本培养基，激素种类与浓度的正交试验后，选出生根效果最好的最佳培 养基配方，再以最佳培养基为生根培养基，分别添加不同浓度的维生素C(0.2mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L)，6-BA (0.2 mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L)，不同浓度的维生素 E (0.2mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L)，活性碳(0.2%，0.5%,1.0%)，观察维生素 C, 6-BA， 维生素E，活性碳对乐昌含
15、笑生根诱导的影响。通过基本培养基，激素种类与浓度 的筛选，促进生根物质的添加，从而选出生根时间最短，生根率最高，根势生长最 好的生根培养基配方。2.2.2.3暗培养的试验以最佳培养基为生根培养基，在不添加维生素C、6-BA、维生素E、活性碳的情 况下，进行暗培养(10天后光照)。观察光照时间对乐昌含笑生根诱导的影响。各试验组合均加3%蔗糖，0.67%琼脂，调整pH5.66.每组合接种5瓶，每瓶 接种3颗苗，重复5次。本试验培养条件为：温度(252)C，光照强度2000lx，光照时间12h/d。表1诱导生根正交实验的因子与水平表Tab1L16 (45) orthogonal designs factor and level编号因子水平1水平2水平3水平4NO.factorlevel1level2level3level4A培养基MS1/2MS1/3MS1/4MSBNAA (mg/L)0.00.51.01.5CIBA (mg/L)0.00.51.01.5DIAA (mg/L)0.00.51.01.5E6-BA (mg/L)0.00.20.40.8表2诱导生根正交实验的方案Tab2 L16 (45)orthogonal
