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1、Waters高效液相色谱操作说明一. 简介本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相二.操作流程0准备工作确定色谱实验方法，处理好流动相1换好流动相，确定色谱柱选择无误1开机打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。检测器进入预热阶 段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统,待检测器自检完毕（整个自检过程约67min）,(Breeze 软件）。待程序完全启动，整个开机过程结束。系统默认进入上次使用的方案。2建立新方法和新方案2.1新建方案方案主要用
2、来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。Manage Breezename中输入方案2.1.1创建步骤选择名称（如abc）, comments中可填注释，也可不填。一单击finish界面下一单击2.1.2打开创建的方案Manage Breezef在project中找到你创建的方案（如在abc）f点击OK，即进入到我们自己的方案中了2.2新建方法在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。试验方法主要设定的包括洗脱方式, 检测波长等参数。2.2.1新建方法步骤单击f单击（Flow选项卡）f在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）f单击G 亡n
3、 eralChannel 1 Channel 2 Analog A Analog BEvents（channel 1 选项 卡）f在wavelength框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）（设定结Edit View Messages HelpExitFile束，保存）：单击f输入方法名称如（abc 1）f单击save2.2.2洗脱方式的设定（重要）在 programmed flow 中可看至U。其中Isocratic为等度洗脱，Gradient为梯度洗脱。以下我们来分述。2.2.2.1 若你用等度时（Isocratic）： pump mode中选择Isocratic
4、表格中Isocratic Flow A为流动相A的流速/Isocratic Flow B为流动相B的流速,Total Flow 为总流速。例如：假设方法要求用乙腈做A相，用纯水做B相，乙腈占70%,水占30%，等度，贝I：I IUl I II I I1-1-! I ILJYYPump M ode: 11 socraticIsocratic Flow AIsocratic Flow El :T otal Flow :(ml/min)(ml/min)ml/min|0.70|0.30|1.002.2.2.2 若你用梯度时（Gradient）： pump mode中选择Gradient表格中第1行默认
5、已有，单击下面空白行处添加新行。Time为时间，即此行开始时间；Flow不作更改，保持1ml/min的总流速；%A处填A相比例；%B处填B相比例；curve处为曲线型号，一般不变。例如:假设用方法要求乙腈做A相，用纯水做B相,010min乙腈从100%到50%； 1030min乙腈从50%到40%； 3060min乙腈从40%到80%；则:洗脱设置完毕继续按照2.2.1完成方案的创建。3洗泵和平衡方法设定完毕，我们还要进行洗泵与平衡两项工作，让机器做好进样前的准备。3.1洗泵在更换流动相，第一次使用机器，长时间未使用的情况下需要进行洗泵的工作。步骤 画Programmed FlowPump M
6、ode: Gradient壬Time (min)Flow (mlAnin)%ACurve11.00100.00.0210.001.0050.050.06330.001.0040.060.06460.001.0080.020.06如下：单击I（purge pump）next按指示图操作：打开泵面板，取塑料注射器，扭开排液阀旋钮，用注射器抽取泵中液体10ml左右（无气泡即可），反向扭紧旋钮，取出注 射器。根据需要灌洗AB泵。单击next按图示操作：向左打开参比阀，单击next（即 是对AB泵以默认的5mi/min的流速进行冲洗，若只充一个泵，只选一个即可。）默认冲洗 时间5min，5min后自动停
7、止，向右关紧参比阀finish结束洗泵3.2平衡洗完泵后，还要将色谱柱内杂质洗净。所以我们需要进行平衡。在每次进样前，我们equilibrate）在弹出的对话框选择所需方法（一般为都必须洗平衡。步骤如下：单击你的实验方法，如abcl）待基线稳定，且达到小数点后5位数字4的时候，即可停止洗平衡（一般十几钟到几十分钟不等）4.进样(abort)平衡好之后，即可进样（请先将注射器中样品准备好5）进样步骤如下：单击1(singleinjetion）在出现的对话框中输入进样名称，方法，进样体积（一般为10ul）,时间等内容,Method:zzdinject Samples-Increment after
8、 Each InjectionOptions.- Keep Dialog Open after Inject例如CancelHelp设置好之后f单击injectSpecify Single InjecLParametej-sSample Name: mihu505 no.5Function:按钮f等到操作动画出现时，将进样环手柄搬到load位置，平稳插入微量注射器，均匀恒 速注入样品液，除另有规定外，不应立即取下注射器，手柄搬到inject位置，即开始出现图像f点击(send date to review)出现大视图f等到样品跑结束，自动出现结果图。(中途可以按中止(abort )停止进样5数
9、据处理得出了色谱图，下一步就是对色谱图各峰的统计，并得出最终结果。5.1统计各峰时间，面积，高度等内容。步骤如下:(channels选项卡)找到你需要处理的内容双击打开7击processing parameters灯 Start New Processing Parameterswizard)选择，单击okf可输入统计开始时间和结 Clear Peak Width and Threshold束时间，也可不输，单击next注意不要选上，单击next可输入统计最小面积或最小峰高，也可不输，单击nextJ单击nextJ单击next f单击next单击next输入名称，单击finish出现统计表格：此
10、时建议右键选中某些不重要的行，并单击delete row(s)进行删除，只留下需要的几行数据即可f点击(saveall)，统计操作结束。5.2得出结果图。步骤如下：FindData点击jjFCurves 上+ia占etg Inj已ctiung | Chann已怎hlethdcJs Result Setg点击（results选项卡）找到你需要处理的内容，右键单击那一个结果行一单击SampleNameVial InjectionSarnpl 已TypeChannelDe scription1tiepiS 111Unknown2rnihuSUS no.111Unknown3tie)3i2111Unk
11、nown斗tongf：ii2 111Unknown5tongpiS 411Unknown6tongpi2 311Unknown7tonqf：ii2 211Unknown8tongpiS 111Unknown9tongpil 211Unknown10tongpil 311Unknown11tongpil 411Unknown12tiepi2 611UnknownReviewCopy To Froje匚View AsDelete Row(s)Print TableFT已”i已卩丿FT 匚 ess.Print.Export.CopyPaste.AcquisitionMethodDateFroc已空:
12、已dProcessingMethod|1CI429 35/9/201110:21:37 AMCI429 3 UV Ch1CI429 35Z8/20115:22:53 PMCI429 3 UV ChiCI429 35Z8Z201111:29:34 AMCI429 3 UV ChiCI429 3S.S.QO118:58:45 AMCI429 3 UV Chicl429 35/8/20118:30:19 AMcl429 3 UV ChiCI429 3S-Y-QOn8:44:07 FMCI429 3 UV ChiCI429 3S-Y-QCI116:25:54 PMCI429 3 UV Chil：I42
13、9 35.-7.-,20114:39:45 PMcl429 3 UV ChiCI429 3S-Y-QOn4:28:02 PMCI429 3 UV ChiCI429 3S-Y-QCI114:25:35 PMCI429 3 UV ChiCI429 3S-Y-QCI112:57:01 PMCI429 3 UV ChiMCI429 3S-Y-QOn2:11:54 PMCI429 3 UV ChiDateAcquired(preview)f对话框中选（也可以选第三个自己选择显示模式，但一般选择第二个即可），单击OK-单击a|(print)即打印出来实验结果（当然也可以保存此实验报告，单击file单击save report即可）6.关机关机前用纯有机相（最好是甲醇）洗平衡以保存柱子。洗干净后停止平衡一单击fileRumps Rurming ALExitYou are exiting with pumps still running. Do vu want to:圧 Shut Pumps Do艸nLeave Pumps RunningOK. | Cancel IHelp单击exit 一弹出
