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1、体内药物分析作业分析方法建立后需进行包括准确度、精密度等一系列的评价项目进行验证。请问：对所建立的药物体外及体内分析方法，其验证要求有何不同，为什么？举2文献说明，标明文献出处。评价一个体内药物分析方法的优劣主要有以下几个指标：精密度、准确度、灵敏度、专属性或选择性、可测浓度范围、测定所需时间以及对生物样品的适应性(分析方法要模拟生物样品在预处理或储存容器中的状态，是生物样品保持稳定性)等。由于体液中的药物含量通常很低，且样品量往往一定，同时一些内源性杂质和药物代谢产物会干扰分析，故对分析方法验证要求灵敏度更高，选择性（分离杂质能力强）更好，还应与生物样品相适应，保持样品稳定性。例一高效液相色
2、谱法测定石杉碱甲微球在大鼠体内的血药浓度及药物残留量（符旭东，平其能，高永良，中国药科大学药剂教研室,20031210)本文首先用碱化后有机溶剂提取的方法处理样本,然后采用乙腈和含02的三乙胺水溶液作为流动相的主要组成，通过调节二者的比例，可在排除内源性物质干扰的前提下，尽量地缩短保留时间提高检测的灵敏度。本文曾比较三氯甲烷和乙酸乙酯的提取效果，结果表明用三氯甲烷提取血浆样本，可在满足提取回收率大于70的前提下，减少内源性物质的萃取。而用乙酸乙酯提取肌肉匀浆液样本，可获得更高和更稳定的提取回收率。结果：血浆样品测定的线性范围为25500g/L，最低定量浓度为25g/L。肌肉匀浆液样本测定的线性
3、范围为10082016 mg/L，最低定量浓度为1008 mg/L。两种方法的相对回收率均在85115范围内。RSD小于12。与另一篇文献中，体外检测药物含量相比，便可说明体内药物分析的高灵敏性和高选择性。如：石杉碱甲注射用缓释微球制备方法的比较及其体内外评价(潘峰，陈庆华怫，包泳初，朱大元，蒋山好,上海医药工业研究院)中，检测石杉碱的含量，便为体外为普通的药物检测。例二苄片人体药动学及生物利用度(王珍，金锐，于景翠，杜智敏，哈尔滨医科大学第二临床医学院临床药学药物研究所，黑龙江省高校重点实验室，黑龙江哈尔滨150081)研究头孢氨苄片在健康人体内的血药浓度经时过程及人体生物利用度。方法采用H
4、PLC法测定20名健康受试者单剂量1：3服19头孢氨苄片受试制剂及参比制剂后的药动学数据。经过血浆样品处理，血浆标准曲线的制备，回收率与精密度试验等血浆中头孢氨苄的最低检出浓度为05mgL，回收率及日内、日间变异系数等，均符合生物等效性试验的要求HPLC法测定头孢氨苄甲氧苄啶胶囊含量的方法改进(韩志云，朱迎春江苏省淮安药品检验所淮安2230001)以HPLC法同时测定复方头孢氨苄甲氧苄啶 胶tt中头孢氨苄与甲氧苄啶的含量。方法 以o02mol/L一磷酸溶液(用20氢氧化钠调节pH值至3-5o05)-乙腈(85：15)为流动相，检测波长为235nm。结果 头孢氨苄在10009000g/mL、甲氧
5、苄啶在20018-00g/mL范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系；头孢氨苄平均回收率为100%、RSD为015 ；甲氧苄啶平均回收率为1001% 、RSD为019.23 1的HPLC法含量测定色谱条件：色谱柱Cl B柱(46 mmx250 mm，5am)；流动相甲醇008 molL乙酸铵缓冲液(pH 6O)(50：50)；检测波长3 10 nm；流速10mlmin；柱温40；进样量20 ul。测定方法：精密称取l微球25 mg置lO ml量瓶中，加乙腈2 IIll，涡旋至溶解，用甲醇定容，摇匀。经045岬尼龙滤膜过滤，滤液以流动相稀释10倍，经离心(17 000xg)10 min后，取上清液
6、进样测定。标准曲线和方法学研究：精密称取1原药适 量，用甲醇制得浓度分别为125、25、5、10、20 Ltgml的标准溶液，进样测定，以峰面积(A)对l浓度(C)线性回归，得回归方程为A=51105c一38103，r=0999 9。高、中、低浓度样品的绝对回收率分别为(9994-104)，(1000士002)，(993士026)(珂=3)；日内月肋分别为07l、09l、266(n=5)；日间尺分别为151、O76、274(，产5)。24微球体外释药精密称取1微球50 mg置具塞玻璃瓶中，加入释放介质pH 74磷酸盐缓冲液(PBS)，含NaN，、吐温-80、吐温一20各002100 ml，于3
7、7水浴振荡(110 rmin)中进行释放试验。分别于d1、3、5、7、10、14、1 6取样l m1，并补充同温等量释放介质，离心(1 7 000xg)10 min，取上清液进样测定。标准曲线：精密称取1适量，用释放介质制得浓度为125、25、5、10、20 I，tgml的标准溶液，进样测定，以峰面积(彳)对1浓度(c)线性回归，得回归方程为峰面积A=51x105c_19104，r=0999 9。两种方法制得l微球的体外释放见图2。结果表明，ow法所得微球的首日突释明显大于oo法所得微球。原因与1易随乙酸乙酯扩散至外水相有关，嵌在PLGA微球骨架表层或近表层的药物释放。d10起释药速度减缓，d
8、16仍停留在约75水平。而oo法制备的微球能缓释14d，药物基本释完。25微球体内释药参考并改良了国外检测黄体激素释放激素(LHRH)的方法bJ，将1微球注入大鼠腹部皮下后，于不同的时间间隔小心切取注射部位的微球和肌肉组织，匀浆化后测定残留的药量，间接反映微球的体内释药速度。雄性SD大鼠36只，随机分成6组，每组6只。精密称取l微球适量置安瓿中，用含05羧甲纤维素钠和01吐温80的水溶液混悬。每只大鼠于腹部皮下注射05 ml(相当于1 2 mg)。同时用适量乙腈溶解注射器及安瓿中残余的微球，测定残余的药量，计算实际给药量。大鼠回笼饲养，分别于注射微球后d1、3、5、7、10、14处死1只，剖开
9、注射部位的表皮，小心取下微球及周围组织，冷冻后切成薄片，置玻璃匀浆器中，加乙腈一水(9：1)2 ml，反复研磨5 min，用流动相稀释至10 m1，涡旋混匀，离心(17 000xg)10 min后，取上清液进样测定。标标准曲线取大鼠腹部肌肉，加乙腈一水(9：1)适量制成匀浆液。取2 ml，共6份，分别加入50 tagml的1溶液01、02、05、1、2、4 m1，用流动相定容至10 ml，涡旋混匀，制成浓度为05、l、25、5、10和20 Irtgml的样品溶液，离心(17 000xg)10 min后，取上清液进样测定，以峰面积(彳)对1浓度(c)线性回归，得回归方程为A=48x 105c一2
10、2104，r=0999 9。定量限为05agml。取上述大鼠肌肉匀浆液2 ml，共3份，加入适量PLGA的乙腈溶液，再分别加入50 I_tgml的l溶液02、l、4 ml，用流动相定容至10 ml，涡旋混匀，制成浓度为1、5、20 lagml的样品溶液，离心(17 000xg)10 min后，取上清液进样测定。计算得回收率分别为(1020-a：254)，(972士174)，(1004士118)(n=3)。两种方法制备的1微球的体内释药结果见图3。大鼠注射部位微球药物残余量的检测结果表明，ow法制备的微球首日突释达50。而采用olo法制备的微球其释药呈三相模式：第一相是药物首日突释作用，其释放量约为(1819-4-150)；
