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1、伊利特使用说明1. 样品配制1.1样品浓度不宜过大，尽量使用接近流动相的溶剂溶解1.2样品应均一稳定，澄清透明，无可见不溶物。任何样品，进样前皆应经过0.45m 滤头滤过2. 检测器选择2.1无紫外吸收 用蒸发光散射检测器（详见ELSD使用说明）2.2有紫外吸收将对照品溶液在紫外分光光度计中进行全波长扫描，确定最大吸收波 长3. 开机注意事项3.1流动相瓶中液体不可直接使用，有机相需重新过滤，水相弃去换新，过滤、超声脱 气3.2观察管路中是否有气泡，如有气泡则应开启冲洗阀门，将气泡排出3.3有机泵、水泵各司其职，不应经常变换，如需变换，则应采取与排气泡相同的操作 步骤，将吸液滤头与管路中的旧液
2、体置换过来，否则极易产生气泡3.4泵启动时以0.2为宜，逐渐升至1ml/min，停止时逆向操作3.5废液瓶尽量封闭，减少挥发4. 流动相选择4.1参照文献4.2根据极性大致判断，对于C18柱而言，常见流动相洗脱力为：四氢呋喃乙腈甲 醇，一般后两者与水混合即可满足要求。另外，当检测波长旬10nm时，已接近甲 醇最大吸收，最好选用乙腈4.3流动相比例确定：4.3.1从95%有机溶剂开始试验，逐渐降低有机相比例，直到目标峰保留时间满足要 求4.3.2设置梯度洗脱程序，在一定时间内（一般1h），从10%有机相到100%有机相 梯度洗脱，观察目标峰的出峰时间，推测合适流动相比例5. 样品分析进样前最好清
3、洗进样阀，Load和Inject位置皆需清洗，进样时擦净针头，防止污染进 样口。5.1等度洗脱：等度洗脱时泵与EC2000独立运行，操作如下：泵处于运行状态，进样阀位于Load位置，点击EC2000进样按钮，进样，掰至Inject 位置，自动触发数据采集。EC2000允许在采集过程中更改采样时间，如果既定时间过 短，可随时更改，过长也可随时停止。5.2梯度洗脱：梯度洗脱时通过EC2000控制泵的运行，操作如下：5.2.1泵处于停止状态，进样阀处于Load位置，点击梯度按钮，设置需要的梯度 程序，梯度项中“形状”值“0”表示突变，“1”表示渐变，确定。5.2.2更改泵的操作菜单，在菜单2中选择外
4、控，退出，启动泵，泵即自动按5.2.1 所设置的梯度初始比例启动并受控。5.2.3进样，掰至Inject位置，自动触发数据采集，泵即按外控梯度程序开始运行， 数据采集窗口中可看到梯度实时变化，并可随时更改梯度程序及采集时间。6. 谱图积分数据采集完毕后一般会自动积分，可以通过设置积分方法和积分事件来调整积分性 质，并通过手动积分来调整个别谱峰。如果谱图不积分，则可能是设置了禁止积分事件 或积分门槛过高，适当调节后再点积分按钮重新积分。每次调整积分方法都会带来谱峰 面积的一定变化。7. 结束分析关机7.1如果流动相中添加了缓冲盐，则应先以水占大比例的流动相冲洗色谱柱，使缓冲盐 清洗完全，再逐渐切
5、换到纯有机相冲洗色谱柱。（可关闭检测器冲洗，以节省灯源 寿命）7.2处理自己配制的流动相，加缓冲盐的水相最好倒掉，因为这种水溶液是细菌滋生的 优质土壤（特别是夏天），切不可将吸液滤头长期浸泡其中。7.3清洗进样阀，以防对下次实验造成污染。7.4认真填写实验记录，包括使用中发现的问题及排除过程。附：蒸发光散射检测器使用说明蒸发光散射检测器（ELSD）可用来检测非挥发性的物质，一般用于没有紫外吸收的化 合物检测，但灵敏度相对低于紫外。其检测原理是：当流动相携带化合物进入检测器时先经 过雾化成为微小液滴，再经过蒸发将流动相挥发仅剩化合物小颗粒，光线照射在这些小颗粒 上引起散射，散射光经过光电转换变为
6、电信号输出。伊利特运行时只能连接一台检测器，所以当使用ESLD时就需要有一个切换过程，建 议的使用程序如下：1. 开泵时连接紫外管路，但紫外检测器不开，同时打开ELSD电源预热15min。2. 紫外管路冲洗柱子后逐渐切换到所需流动相比例。3. ELSD预热完毕后按OPERATE键进入操作菜单，设置所需的雾化温度（Neb）、蒸发 温度（Evap）。雾化温度允许范围为20-70，但要不低于室温，最常用为30；蒸发温度 允许范围为20-150，但一般不低于40，且至少要比Neb温度高10，最常用为50。Neb温度及Evap温度与噪音、峰信号相关，有时需要考察优化，使信噪比达到最大。其他设置Metho
7、d、Attenuation Filter可保持默认。4. ELSD设置温度稳定后（状态显示由Not ready变为Ready），打开氮气瓶气阀，按 GV OPEN打开ELSD气阀将氮气引入，调节气压表使ELSD中显示的氮气压力在 1.2-2.0Bar之间，最常用为1.5Bar。保持至少15min。5. 停泵，切换管路与ELSD连接，开泵。6. 进行样品分析，分析中注意调节稳定氮气压力，同时注意ELSD状态是否保持Ready， 如果显示Not Rready则需要立刻停泵，检查原因。一般是由于Neb温度及Evap温度 超出允许浮动范围（2C ）造成，待其恢复后重新开泵。7. 分析完毕，如果在流动相里使用了修饰剂（尽量不要使用），使用甲醇/水（50/50）以 1ml/min的流速冲洗ELSD至少15分钟。如果没有使用修饰剂，继续下面的步骤。8. 停泵，管路切换回紫外端，进行柱冲洗ELSD保持氮气流速至少5min，按ESCAPE 键关闭气阀，关闭电源。总之，在有流动相通过ELSD时必须伴随有氮气通入，在停止流动相通入后也要继续保持氮气一定时间使流动相完全排出。
