《芍药苷对STZ损伤的INS1细胞的保护和修复作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《芍药苷对STZ损伤的INS1细胞的保护和修复作用（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、摘要】目的研究中药单体芍药苷对INS1细胞的影响，及对链脲佐菌素(STZ)损伤的胰岛细胞的保护、修复作用，并初步探讨其保护机制。方法INS1细胞传代培养后，用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力，并测定细胞培养液中胰岛素浓度、丙二醛(MDA) 浓度、总抗氧化能力(TAOC )。结果芍药苷可促进INS 1细胞释放胰岛素。STZ损伤后，INS 1细胞活力降低;胰岛素分泌量减少;MDA含量明显升高;TAOC下降。芍药苷保护组能不同程度改善STZ引起的上述指标的改变。结论芍药苷可促进INS1细胞释放胰岛素，对STZ损伤的INS1细胞有显著的保护作用，这种作用可能是通过提高INS1 细胞的抗氧化能力
2、实现的。【关键词】芍药苷;INS1细胞;STZ;抗氧化能力【 Abstract】 Objective To study the effect of the traditional Chinese medicine monomer paeoniflorin on INS 1 and the protective and prosthetic effects of Paeoniflorin on STZ induced INS 1 cell damage, and to explore its protective mechanisms. Methods After subculturing IN
3、S 1 cells, the cell viability were determined by tetrazolium (MTT) assay; and insulin concentrations, malondialdehyde (MDA) concentration and total antioxidant capacity (T AOC) of cell culture medium were also tested. Results Paeoniflorin promoted the release of insulin; after STZ injury, the cell v
4、iability and insulin of INS 1 were declined; MDA concentration was increased significantly;and T AOC capacity was declined.The paeoniflorin protection group improved these indicators that induced by STZ on various extent. Conclusions Paeoniflorin can promote the insulin release of INS 1 cells, and h
5、as a significant protective effect on STZ induced INS 1 cells damage, that may be achieved through increasing antioxidant capacity of INS 1 cells.【Key words】 Paeoniflorin;INS 1 cell; STZ;Antioxidant capacity肥胖与胰岛素抵抗(IR)高度相关，IR是肥胖者发生2型糖尿病、高血压及脂质代谢紊乱 等的重要原因。芍药苷(Paeoniflorin)是芍药的主要有效成分之一，具有止痛、镇静、解痉、 抗炎
6、以及抗自由基损伤的作用13。前期实验发现白芍水提取液可以抑制去卵巢大鼠肥 胖，改善脂代谢紊乱，清除体内过多自由基4 ;离体实验证明芍药苷促进离体脂肪组织释 放游离脂肪酸及降低丙二醛(MDA)的含量，提高总抗氧化能力(T AOC)水平。而芍药苷对 胰岛细胞有否作用，目前国内外尚未见报道。因此本实验观察了芍药苷对胰岛细胞的影响及 对STZ损伤后胰岛细胞的保护、修复作用，并初步探讨其作用机制。1 材料与方法1.1 材料大鼠胰岛素瘤细胞(INS1)购自中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，中药单体芍药苷购自陕西旭煌植物科技公司，1640培养基购自Gibco公司，小牛血清购自杭州四季青公司, 噻唑蓝(M
7、TT)购自Sigma公司，胰岛素放射免疫试剂盒购自中国原子能研究所，T AOC、 MDA 试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2 方法1.2.1 细胞培养INS 1用含10%小牛血清的1640培养液,37C, 5%CO2饱和湿度细胞培养箱内培养, 0.25%胰蛋白酶1 ml消化24 min后传代，分瓶继续培养，23 d传代一次。1.2.2胰岛素、MDA、T AOC测定INS 1按1 X 105个/ml、每孔200 p l置于96孔培养板，培养24 h后，分别加入不 同浓度的葡萄糖(5.6、8.4、11.2、16.8、22.4、33.6 mmol/L)、链脲佐菌素(STZ)及芍药苷，药 物容量
8、均为10 p l。药物作用一定时间后，收集细胞培养液，用放射免疫法测胰岛素含量, 比色法测定MDA含量和T AOC。1.2.3 MTT法测定胰岛细胞增殖活力INS 1 1X 105个/ml、每孔100 p l置于96孔培养板，培养24 h后，分别加入各浓度 药物作用12 h后，每孔加入5 mg/ml的MTT 10 p l,放入孵箱中培养4 h后，每孔加入二 甲基亚砜100 p l,过夜，用全自动酶标仪测定570 nm处吸光度(A)值，进行组间比较。1.3 分组共分为五组：正常对照组：培养的INS 1细胞不做任何干预处理;芍药苷组：培 养液中分别加入终浓度为1 X 10-5mol/L、1 X 1
9、0-6mol/L、1 X 10-7mol/L的芍药苷，作用12 h; STZ损伤组：培养液中加入STZ,使终浓度为3 mol/L，作用12 h;芍药苷保护组：培养 液中加入终浓度1 X 10-7mol/L的芍药苷和STZ(终浓度为3 mmol/L),作用12 h;芍药苷修 复组：培养液中先加入STZ(终浓度为3 mmol/L)作用6 h后，加入终浓度为1X 10-7mmol/L 的芍药苷，继续作用6 h。1.4 统计学分析采用SPSS10.0软件，计量资料用xs表示，组间显著性差异采用单因素方差分析法。2结果2.1 INS 1 对葡萄糖的刺激反应与正常对照组相比，随着葡萄糖浓度的增加(5.61
10、6.8 mmol/L)， INS 1分泌的胰岛素 量也逐渐增加;但22.4 mmol/L、33.6 mmol/L的葡萄糖则使胰岛素的分泌量随葡萄糖浓度的 增加有所减少。见图1。与正常对照组比较： 1)P0.05， 2)P0.05);芍药苷1X 10-6 mol/L组和1 X 10-7mol/L组可以显著促进INS 1胰岛素释放(Pv0.05;Pv0.01),而1 X 10-5mol/L的芍药苷对胰岛素分泌无统计学差异(P0.05)。见表1。表1芍药苷对INS 1 的作用表2芍药苷对STZ损伤的INS 1的作用2.3芍药苷对STZ损伤的INS 1的保护作用如表2所示，与正常对照组相比，STZ损伤
11、组的INS1增殖活力显著降低(PV0.01),胰岛素分泌量显著减少(Pv0.01), MDA含量升高(Pv0.01), T AOC能力下降(Pv0.05)。与 STZ 损伤组相比，芍药苷保护组的胰岛素分泌量明显升高 (P0.05)。3讨论肥胖是大多数疾病的重要危险因素,肥胖患者往往伴随体内脂肪堆积及糖、脂肪代谢的 异常。本实验采用大鼠腺肿瘤B细胞INS 1, INS 1是在SV40冰冻转染的胰腺胰岛细 胞基础上建立的,有较好的稳定性,可以在糖、胰高血糖素刺激下分泌胰岛素,并被糖皮质 激素所抑制，故INS 1成为体外研究胰岛细胞功能的理想模型。本实验证实INS 1胰 岛素分泌量在一定范围内，随着
12、葡萄糖浓度的升高(8.416.8 mmol/L)逐渐增加，说明葡萄 糖可以刺激INS 1分泌胰岛素，而且呈一定的剂量效应关系;但当葡萄糖浓度过高时(22.4 mmol/L, 33.6 mmol/L)胰岛素分泌量又逐渐下降，这与文献报道一致5, 6。表明该细胞 对葡萄糖刺激具有良好的反应性。芍药苷是从芍药中提取的最主要的生物活性成分，现代医学认为具有多种药理活性。芍 药苷具有抗自由基损伤、抑制细胞内钙超载等多种生物学效果。前期实验已证明白芍水提取 液能显著抑制去卵巢肥胖大鼠的体重和血清甘油三酯水平的升高，改善大鼠体内脂代谢紊 乱。芍药苷可以促进离体脂肪组织释放游离脂肪酸，但芍药苷是否对胰岛细胞有
13、直接的影响 作用，目前国内外尚未见报道。本实验研究显示，芍药苷可以促进INS 1胰岛素的释放。糖尿病的发生与胰岛B细胞的损伤和功能异常有关。氧自由基和一氧化氮(NO)可以导 致胰岛B细胞损伤。与其他组织细胞相比，胰岛细胞内抗氧化物酶水平较低，因此，在一些 因素的诱导下，容易发生氧化应激反应7。MDA是氧自由基作用于生物膜中多不饱和脂 肪酸引发脂质过氧化的主要代谢产物，能促使蛋白质合成能力下降或合成功能紊乱，其水平 的高低反映了受氧自由基攻击的程度。细胞T AOC主要是细胞外液中非酶促体系的抗氧 化物质和酶促体系少数小分子抗氧化物质的总和，是反映组织抗氧化能力的重要指标之一。 STZ对实验动物的
14、胰岛B细胞具有高度选择性毒性作用。在本实验中发现，加入STZ后， 胰岛细胞活力、胰岛B细胞分泌功能明显受到抑制，STZ损伤组中胰岛素含量较正常对照组 明显减少。同时，细胞T AOC明显降低，而MDA含量显著升高，提示STZ可能通过胰 岛细胞生物膜脂质过氧化损伤、抑制胰岛细胞抗氧化能力，导致自由基清除障碍，从而使其 分泌胰岛素的功能降低。在芍药苷保护组中预先加入芍药苷后，STZ所致的胰岛素分泌量明 显回升，同时MDA水平显著降低，提示芍药苷能有效保护STZ引起的胰岛细胞损伤，并 使胰岛细胞的功能有所恢复。表明芍药苷对胰岛细胞的作用可能部分是通过增强胰岛细胞清 除氧自由基的能力而发挥其保护效应的。
15、而芍药苷修复组中，在STZ损伤胰岛细胞后再加 入芍药苷，STZ所致的细胞活力、胰岛素分泌量降低程度没有明显改善，T AOC、MDA 含量也没有明显改变，提示在胰岛细胞损伤后，芍药苷的修复作用不明显。因此，对肥胖患 者及早干预治疗，可有效预防糖尿病，对控制血糖水平、保护胰岛细胞有很重要的临床意义。 参考文献：1金倩;氯地酊联合激光治疗座疮158例疗效观察J;广东医学;1997年10期2董新亭，李卫莉，张随学;自拟粉刺消治疗座疮126例J;中国中医药科技;1999年06期3查旭山，陈修飏;寻常座疮治疗体会J;江西中医药;http:/ 年 05 期4张随学，谭正辉，孙叶梅，李梅，俞玉芳，韩峰;3003例座疮患者特征分析与控制对策J;中华医学美学美容杂志;http:/www.yixue58.Com/xyfm/class/.2002年 06 期5刘勇，王冬梅;座疮的药物治疗J;临床医药实践杂志;2003年09期6高宜云;座疮从肝论治J;中医药临床杂志;2004年03期7欧其平，林维山;中西医结合治疗座疮J；中华皮肤科杂志;2004年09期8 陈五一;座疮辨治体
