《三聚氰胺报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《三聚氰胺报告（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、三聚氰胺及其检测方法三聚氰胺是一种重要的有机化工原料，其最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂 （ST）的原料。本来三聚氰胺与食品或者饲料行业毫不相干，但不法商人在食品或饲料中添 加三聚氰胺（ 即所谓的“ 蛋白精”），主要是利用三聚氰胺的高含氮量（66.7）来提高 产品的表观蛋白质含量。三聚氰胺事件变成社会热点话题是在07年3月份，美国因宠物饲料致死猫狗事件大量召 回被三聚氰胺污染的宠物饲料。之后“ 蛋白精”愈演愈烈， 2008 年爆发了婴幼儿因食用了 含三聚氰胺的奶粉而致肾结石甚至死亡的恶性事件。卫生部等五部门立即颁布了“2008 年 第25 号乳制品及含乳食品中三聚氰胺临时管理限量值规定”
2、的公告，规定：婴幼儿配方乳 粉中三聚氰胺的限量值为1 mg/Kg，液态奶（包括原料乳）、奶粉及其他配方乳粉中三聚氰 胺的限量值为2.5mg/Kg。因此建立快速的检测方法以确保食品的安全十分必要。、三聚氰胺1.1三聚氰胺的概念三聚氰胺（英文名Melamine），是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有 机化工原料。简称三胺，又叫2 ,4 ,6- 三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6- 三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，分子式CNH、CN（NH），分子量126.12。其3 6 6 3 3 （ 2）3结构式为：1.2三聚氰胺的性质（一）物理性质三聚氰胺
3、性状为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573克/厘米3 （16C）。常压熔点354C （分解）；快速加热升华，升华温度300C。溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不 溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。（二）化学性质呈弱碱性（PKb=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中 b性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（PH值5.5-6.5） 与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟 基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。（三）生物学
4、性质三聚氰胺由德国化学家Justus von Liebig于1834年首次合成，是一种三嗪类含氮杂环 有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。经肠道吸收后哺乳动物肝脏不能转化代谢三聚氰 胺，最终三聚氰胺及其转化物三聚氰酸被血液运送到肾脏，随尿液排出体外。在此过程中， 由于尿液浓缩作用，可能相互聚集或与钙形成结石，造成肾小管物理阻塞，继而形成肾结石， 导致肾脏积水，严重时导致肾功能衰竭。（四）毒理学特性三聚氰胺对哺乳动物低毒。大鼠连续2h吸入粉尘200mg/kg，未见中毒症状。大鼠 80mg/kg100mg/kg，2 次/ 天，6 次/ 周，连续4 个月以上，现体重增加迟滞，中枢神经系 统及肾功能
5、紊乱，肺内炎性改变等，长时间反复接触可对肾脏造成损伤。 OkumuraM 等给 F344 雄性大鼠饲喂不同浓度三聚氰胺饲料36周，结果证明饲喂含3聚氰胺饲料能导致 F344鼠的膀胱结石形成，并且诱发膀胱肿瘤和输尿管肿瘤。随着膀胱结石发生率的增加， 公鼠膀胱肿瘤发病率也呈现增加趋势，而且这两个发病率之间高度相关。在2007 年的宠物 食品中毒事件中，受害宠物被诊断发生了组织病理学、毒理学和临床病理学的变化。对这些 动物进行的临床症状分析和实验室诊断均可确诊为尿毒症，具体症状包括食欲减退、呕吐、 昏睡、多尿症、氮血症以及高磷（酸盐） 血症。现有针对三聚氰胺的毒理试验也还只是停 留在动物实验上，没有
6、针对人类的。1.3三聚氰胺的主要用途（1）装饰面板：可制成防火、抗震、耐热的层压板，色泽鲜艳、坚固耐热的装饰板，作飞 机、船舶和家具的贴面板及防火、抗震、耐热的房屋装饰材料。（2）涂料：用丁醇、甲醇醚化后，作为高级热固性涂料、固体粉末涂料的胶联剂、可制作 金属涂料和车辆、电器用高档氨基树脂装饰漆。（3）模塑粉：经混炼、造粒等工序可制成蜜胺塑料，无毒、抗污，潮湿时仍能保持良好的 电气性能，可制成洁白、耐摔打的日用器皿、卫生洁具和仿瓷餐具，电器设备等高级绝缘材 料。（4）纸张：用乙醚醚化后可用作纸张处理剂，生产抗皱、抗缩、不腐烂的钞票和军用地图 等高级纸。（5）三聚氰胺甲醛树酯与其他原料混配，还可
7、以生产出织物整理剂、皮革鞣润剂、上光剂 和抗水剂、橡胶粘合剂、助燃剂、高效水泥减水剂、钢材淡化剂等。（6）少量时可用于我们日常食用的点心中，如：桃酥。（7）农业：在农业中三聚氰胺是用来加在化肥中的。二、三聚氰胺的检测方法经大量文献的查阅，我总结了十三种用于检测三聚氰胺的方法，这些方法不仅仅局限于 原料乳及乳制品中的三聚氰胺，还包括宠物饲料等中三聚氰胺残留测定。分别是气相色谱- 质谱联用检测方法、高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-串联质谱法、超高效液相色 谱与质谱联用法、离子交换色谱-紫外检测法、酶标仪检测法、表面增强拉曼光谱法、电位 滴定法、重量法、苦味酸法、升华法、高效毛细管电泳法。在气
8、相色谱法中，常用气相色谱 -质谱联用法测定。2008年10月7日，国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会批准发布了原 料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法（GB/T 22388-2008 ）国家标准，标准自发布之日起实 施。标准规定了高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）、气相色 谱-质谱联用法（GC-MS和GC-MS/MS）三种三聚氰胺的检测方法，检测定量限分别为2毫克 /千克、 0.05毫克/千克和0.01毫克/千克。各种方法各具优点和不足，应根据检测对象及其限 量的规定，选用与其相适应的检测方法。在以下三种方法中，前两种分别选取了具代表性的 不同样品即原
9、料乳及乳制品和宠物饲料中三聚氰胺进行了检测。 （一）气相色谱-质谱联用检测方法（ GC-MS）（GB/T 22388-2008国家标准规定方法） 1.1实验原理试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，将提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取 柱净化，用N, O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化，然后采用选择离子监测质 谱扫描模式(SIM)或多反应监测质谱扫描模式(MRM)，用化合物的保留时间和质谱碎片的 丰度比进行定性分析，外标法定量GC- MS法的最低定量限为0.05mg/kg。GC- MS法需要衍生 化处理，过程比较繁琐，但是灵敏度高，方法稳定。目前国内多数分析实验室采用该方法分 析
10、婴幼儿奶粉中的三聚氰胺。1.2试剂与材料吡啶(色谱纯)；衍生化试剂(色谱纯)；乙酸铅溶液(22 g/ L)；氩气；甲醸色谱纯；乙腈:色谱 纯；氨水；三氯乙酸；柠檬酸；辛烷磺酸钠色谱纯；三聚氰胺标准品(CAS108278201):纯度 大于99. 0 %；微孔膜；海砂；甲醇水溶液；三氯乙酸溶液(1 %)；氨化甲醇溶液(5 %)；离子 对试剂缓冲溶液；三聚氰胺标准储备溶液；阳离子交换固相萃取柱。1.3仪器设备气相色谱-质谱联用仪(气相色谱-质谱/ 质谱仪) :配有电子轰击电离离子源( EI) 。分析天平: 感量为0. 0001 g 和0. 01 g ;离心机:转速不低于4000 r/ min ;超
11、声波水浴;固相萃取装置;氮气 吹干仪;涡旋混合器;具塞玻璃离心管;研钵。1.4实验步骤1) 提取(液态奶、奶粉、酸奶、奶糖等)(1)称取5 g (精确至0. 01 g)试样于50 mL,具塞玻璃离心管; 加入25 mL三氯乙酸溶液； (3)涡旋30 s ; (4) 加入三氯乙酸15 mL ; (5) 超声提取15 min ; (6) 加入2 mL 乙酸铅; (7) 三氯 乙酸定容至50 mL ; (8) 10000 r/ min 离心10 min ，上清液待净化。2) 净化(1) 将待净化的溶液准确转移5 mL 至固相萃取柱中; (2) 3 mL 水淋洗; (3) 3 mL 甲醇淋洗; 抽至近
12、干;3 mL氨化甲醇洗脱，收集淋洗液;(6)淋洗液于50 C下氮气吹干待衍生化。3 )衍生化在上述氮气吹干的残留物中加入600 p L吡啶和200|J L衍生化试剂，混匀,70 C反应30 min，氮气吹干，准确加入800p L吡啶,供气相色谱2质谱及气相色谱2质谱/质谱定性定量分 析。4) 仪器参考条件(1)色谱柱:5 %苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱,30 m X0. 25p m X0. 25 mm或者相当；(2) 载气流速:1. 0 mL/ min ;(3) 传输线温度:250 C;(4) 进样口温度:250 C;进样量：1p L ;(6) 进样方式:无分流;(7) 程序升温:70 C保
13、持1 min，以10 C/ min的速率升温至200 C,保持10 min ;(8) 离子源温度230 C;(9) 扫描模式：选择离子扫描：定性离子m/ z99、171、327、342，定量离子m/ z 327。5) 工作曲线的绘制将三聚氰胺标准溶液逐级稀释，配制成衍生物浓度为:0. 05 、 0. 1 、 0. 2 、 0. 5 、 1 、 2 p g/ mL 的标准溶液，气相色谱-质谱仪分析，以浓度与定量离子的峰面积作图，绘制标准工作曲线。6) 定量测定 待测溶液中三聚氰胺的响应值应在工作曲线的线性范围内，超过线性范围则应对净化液稀释， 重新衍生化后再分析。7) 定性确证以标准样品的保留时
14、间和监测离子( m/ z 99 、 171 、 327 、 342) 定性，待测样品中4 个离子 的丰度比相差不大于20 %。8) 结果计算A x c x VxlOOO1= % f (1As x mxlOOO式中：才 试样中三聚氤胺的含暈，单位为毫克每干克(mglg);A样液中三聚就胺的峰而积；r 标准溶液中三聚飢胺的浓度单位为微克每毫升(ligmL)；V样液垠终定容体积，单位为毫升inLh标准溶液中三聚貳胺的峰面积；加试样的质量，单位为克名)；/稀释倍数9) 空白实验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。(二)高效液相色谱法(HPLC) (GB/T 22388-2008国家标准规定方
15、法)高效液相色谱法相比气质联用法简便、快速,适用于食品中含量较高的三聚氰胺的定量 分析，且有许多研究致力于用高效液相色谱法测定宠物饲料中的三聚氰胺，因此在介绍高效 液相色谱法时以宠物饲料为原料。2.1实验原理HPLC的原理是，试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，将提取液离心后经混合型阳 离子交换固相萃取柱净化。洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色谱仪进行测定。 HPLC的最低定量限为2mg/kg0测定时间约为10min,操作简便，结果准确，但不能满足国家 关于婴幼儿奶粉中三聚氰胺的限量要求。辜雪英等建立了饲料中三聚氰胺残留量的高效液相色谱分析方法，样品经反相柱分离后 采用波长为245 nm
16、的紫外检测器进行检测，该方法具有准确、快速、高效的特点。张美金等 建立了高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺的含量0饲料和宠物食品中三聚氰胺 的定量检测限是1. 0 mg/ kg,添加水平为1. 0 mg/ kg时，样品加标回收率为81 %105 %,RSD 10 %0赵永彪等建立了测定宠物食品中三聚氰胺的高效液相色谱分析方法0以10. 0 mmol/ L 的庚烷磺酸钠(用HC1调节p H3. 0)-乙腈(90 : 10)为流动相，在236 nm波长下检测三聚氰 胺含量0以下为一种测定宠物饲料样品中三聚氰胺的测定方法02.2仪器与条件Agilent 1 100高效液相色谱仪(美国，Agil
