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1、自动生化分析仪参数设置技巧随着检验医学的发展，自动化仪器在一些大中小医院都得到了进一步使用，尤其是自动生化分析仪基本普及到了乡镇卫生院一级，正确 设置参数是使用好仪器得出可靠结果的重要环节，下面就自动生化分析仪参数设置的技巧谈一点看法。1、基本原理及主要参数：了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。生化分析 仪根据自动化程度分半自动和全自动，从目前试剂盒供应情况来看，主要的测定方法为：终点法（包括一点终点法和两点终点法）、速 率法（连续检测法）、速率两点法（两点法），后两种统称动力学法。在生化分析仪上重要参数有：方法类型、测定波长、测定温度、 样
2、本体积分数、吸液量、延迟时间、监测时间、标准浓度、K值、试剂吸光度上下限等。这些主要参数设置正确是保证结果准确的首要 问题。2、主要参数设置的技巧：2.1方法类型：可根据试剂盒要求或反应原理来设置。对于半自动生化分析仪终点法只是一点终点法，全自动生化仪单试剂选择一点终点 法，而双试剂选择两点终点法。大多数酶学测定使用速率法，尿素氮、肌酐测定等用两点法。2.2测定波长：测定波长选择有三个主要条件：（1）待测物质在该波长下的光吸收最大。（2）其吸收峰宜较宽而钝，（3）常见干扰物在该波长 下的光吸收最小。试剂盒说明一般已提供波长参数。有些仪器波长选择受滤光片数量限制，应该就近选择为原则。2.3测定温
3、度：一般全自动生化仪都是37C，而半自动生化仪有室温、25C、30C、37C等，终点法由于反应在机外进行，选择室温可 以减少仪器温度调整时间，提高工作效率，而速率法和两点法都选择37C比较合适。2.4样本体积分数：样品体积分数即样品体积与反应液总体积的比值（SV/TV）。酶活力测定中，样品在总体积中的比例应在10%以下。 一般来说，待测物质在样品中含量低的、生理波动范围大的，样品用量较大。如Trinder反应测定血清葡萄糖、胆固醇等，样品试剂比 例多为1： 100,测定血尿酸或高密度脂蛋白胆固醇，常增加为1： 50； ALT和AST的样品试剂比例多为1： 10至1： 20。方法灵敏、吸 光度高
4、的实验方法，样品试剂比例小，如白蛋白BCG法，样品试剂比例常为1： 200。肌酐Jaffe氏法监测时间短、吸光度值较低，样品试 剂比例多为1： 10。一般应以试剂说明为准，不宜轻易改动。可根据最终反应液的量来计算样本量和试剂量。2.5吸液量：主要是针对流动比色的全自动或半自动仪器的参数，原则是吸入量不得大于或等于反应液总体积，否则会导致吸空形成比色 池气泡，最好留100200“的余地。2.6延迟时间：延迟时间（Delay Time）指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。延迟时间的选择取决于被测物质的浓度（酶的活性） 大小、反应速度的快慢、酶促反应的级数、样品中干扰物消除所需的时间等。比如：C
5、HE活性高仅需2030秒，LDH 级反应需3040秒, ALT需4060 秒, AST需6075 秒, CK需90120秒。半自动生化仪上酶活性连续监测法的延迟时间设定，由于只能单份样品逐一测定，若延迟时问全部设置在仪器内，每个延迟时间加监测时间至少1分钟以上，守候时间较长。工作量大时，可以根据仪器控温、加 样及读数和试剂特点，以及室温情况，将延迟时问挪一部分到机外，套式操作，但要确保机内延迟时间不要进入线性反应期。兼顾延迟 时间和监测时间反应时间是有限制的。在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底物 耗尽。2.7监测时间：酶促反应延迟期后，在过量底物
6、的存在下，反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段，即酶促反应以恒定的速率进行， 不受底物浓度的影响，这段时间称为线性反应期或零级反应期，自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90-120S 或至少4点（3个AA）,少于3个AA不能称为连续监测法，因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽，可测范围变窄。 2.8标准液浓度：终点法和两点法必须设置标准，选择合格的标准品很重要。有些试剂盒配有标准液，但是部分项目标准液定标偏差太大， 我们使用的是干粉复合罗氏校准液，复溶后分装冷冻保存，只要复溶的水质保证，避免反复冻融，校准的结果还是很满意的。注意校准 液靶值获得的方法学，
7、方法不同耙值是有差异的，比较典型的是ALP测定有IFCC和DGKC法，差异比较大，不可简单套用。2.9 K值：速率法测定无需带标准或做标准曲线，首先确定样本量和工作试剂量，再根据被测物质的摩尔消光系数，就可按速率法计算 公式计算出因素K值了。K=TVx106/（xSVxL）, TV为反应液总体积，SV为样本体积，L为比色杯光径（cm）, e为毫摩尔消光系数，如NADH/NADPH340nm为6.22，对硝基苯胺405nm为9.9，5-氨基-2-硝基苯甲酸405nm为9.5，对硝基酚405nm为10.5，5-硫代-2-硝基苯 甲酸405nm为13.3。用此法计算的K值为理论值，在临床实际工作中，
8、仪器诸多因素如波长的准确性、半波宽的大小、比色杯光径及磨 损与清洁度、温控的准确性、加样系统状况等若不符合要求或发生变化都会影响指示物的e值或上述公式中的相关项，所以有人主张用 标准品获得K值，这里的前提条件是定标物要可靠。2.10试剂吸光度上下限：有的生化仪要求设置试剂吸光度上下限，主要是用来监测试剂的质量的，但是试剂吸光度上限和下限不是试剂 质量的唯一指针。因此，一定的校准频率和室内质控是质量保证的必需手段。我们在实际工作中就遇到酶活力测定的试剂空白数据在规 定限值内，但质控物测定结果连续偏低，病人结果因每天标本少而难以判断，最后发现是试剂质量下降。总之，生化分析仪参数设置是保证仪器结果准确可靠的首要环节，不同的试剂和仪器参数设置是有区别的，实际工作中必须了解仪器和 试剂的方法学原理，可以结合观察仪器反应曲线来合理设置参数，同时要切实开展室内质量控制和参加室间质量评价来校正仪器的系统误差，从而保证生化检验的质量。
