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1、 学科代码： 学 号： 2009407056 本科毕业论文（设计）题目：黔莓I号快繁外植体的筛选学 院：凯里学院专 业：生物科学班 级：09生物科学学生姓名：指导教师：2013年 3 月 12 日II目录摘要：II关键词：IIAbstract:IIKeywords:II1.前言11.1 草莓的简介11.2研究和发展前景11.3 研究的目的和意义22 实验器材33 黔莓I号不同外植体的组织培养33.1 组培对象33.2 培养基的配制33.3 培养基的灭菌53.4 外植体的消毒和接种53.5 外植体的组织培养53.6 培养结果和数据统计（见表二）54 分析和结论74.1 污染和褐化问题的分析74.
2、2 试验结果的分析74.3 结论8参考文献:9致谢！9黔莓I号快繁外植体的筛选余磊（凯里学院 环境与生命科学学院 09生物科学）摘要：草莓是一种种植广泛的经济类植物，其果实鲜美，内含丰富的维生素C，是一种营养价值极高的水果。为扩大生产和改良品种，研究草莓的快速繁殖技术，利用植物组织培养来选育适合的外植体，为良种的选育提供参考。关键词：草莓；植物组织培养；外植体Abstract: Strawberry is a widely cultivated economic plants, the fruit is delicious, contains rich vitamin C, is a very
3、 high nutritional value of fruit. To expand the production and variety improvement, rapid propagation technology of strawberry, the use of plant tissue culture were selected for the body to provide reference for breeding, breeding.Keywords: strawberry; plant tissue culture; explants1.前言1.1 草莓的简介 草莓又
4、叫红莓、洋莓、地莓等，它的拉丁语学名：Fragaria ananassa Duchesne；属蔷薇科蔷薇目双子叶植物纲；是一种红色的水果，具有一定的食用和药用作用，种植广泛。草莓是蔷薇科草莓属多年生草本果树, 果实具有较高的营养价值和经济价值1，外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含丰富维生素C ，有帮助消化的功效，含有特殊的浓郁水果芳香，与此同时，草莓还可以巩固齿龈，清新口气，润泽喉部。 草莓有许多品种，在适合在贵州栽培的较少，而黔莓I号以其优异的特性渐渐取代了原来的退化的品种。黔莓I号品种来源：黔莓I号草莓是由章姬与法兰帝杂交选育而成的新品种2。具有如下特征特性：属早熟品种。生长势强，分蘖性中
5、等，匍匐茎发生容易。叶大近圆形，绿色，托叶浅红，无叶耳。花序连续抽生性好，粗壮，梗长，花朵大，白色，两性花，花数812枚，雄蕊1922枚，花萼双层，宿萼绿色，主萼平离副萼反卷，萼心凹陷，除萼容易。果实圆锥形，红色，光泽好，果肉橙红色，髓心白色、小，果实完熟后髓心略有空洞，果尖着色易，萼下着色较慢，种子黄绿色，凹陷。果肉质地韧，味清香，风味酸甜适口。单果重26.4克，单株产量290.4克。耐寒性、耐热性及耐旱性较强。品质：可溶性固形物含量9.9%，糖含量7.78%，可滴定酸0.45%，Vc含量92.34mg/100g，果实硬度较好，储运性较好。栽种也是较为简单方便，技术难度不大，都适用于农田和大
6、棚栽种，所以推广起来也较为容易,因此在贵州得到较大发展。1.2研究和发展前景植物组织培养是本世纪初开始, 以植物生理学为基础并在德国植物学家G.Haherlarld 提出的“植物细胞具有全能性(1904年)”的设想指导下,经许多学者努力开拓而逐步发展起来的一项生物技术3。根据细胞理论，提出了高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞的植物细胞全能性的理论。我国兴起相对较晚，于70年代的育种才掀起高潮。但不可否认，自诞生以来, 植物组织培养技术在应用研究中已显示出很好的潜力和效果4。随着科学技术的不断发展, 研究领域的不断拓展与深入, 植物组织培养技术的应用也越发的广泛5。草莓组织培养以往的
7、研究主要局限于去病毒、快速繁殖和种质冷藏等方面，植物脱毒和离体快速繁殖也是目前应用最多、最有效的一项组培技术6。国内对草莓离体培养与再生研究已有许多报道，但其胚性愈伤组织诱导率及植株再生率都较低，影响了草莓体细胞胚状体的应用。近年来，一些学者对影响草莓体细胞胚状体诱导及再生的因素进行了研究，主要集中在外植体的选择、培养基、培养方式与环境等方面；比较突出的是无糖组织培养，由日本千叶大学古在丰树教授研究开发的一种新的植物组培技术7。我国现阶段的理论研究与生产技术相对落后，组织培养技术用于商品开发起步较晚，设备落后，理论研究不够透彻，研发项目不多，技术应用更少。在推广应用环节存在普及深度不够的问题，
8、如目前组织培养的研究只局限于较大的科研单位，与新品种选育结合得不紧密，而许多较大的苗木公司及个体经营者又没有真正认识到组织培养的意义。未来组培技术的发展，可能会随着社会的发展带来的问题展开，在保护物种方面，改进优良品种体系方面将会有广泛应用，如我国苹果属植物组织培养快速繁殖技术8的开发；因此植物组织培养技术的发展空间，技术改进等方面都将会有突破性的进展。1.3 研究的目的和意义外植体是指植物组织培养中的各种接种材料，从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同，
9、其培养的微环境9也有所要求。为保证植物组织培养更容易获得成功，所以选择合适的外植体是非常重要的。草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物, 因其在种苗繁育上长期采用营养繁殖致使病毒不断累积而导致草莓产量降低、品质变劣等退化现象, 且一旦感染病毒便会代代相传。因此, 培育和应用脱毒苗是改善草莓品质、提高产量的有效途径10。此次研究的目的就是要找出草莓植物组织培养，快速繁殖中几种常用的外植体，那一种更容易培养，存活率最高。近年来，贵州的草莓生产逐步扩大，而在我们当地种植最广泛的，在下司的花桥等地11种植的圣峰，因为多年种植，已经慢慢退化，所以需要获得一个适合贵州地区的草莓品种。而黔莓I号就是经育种而成的一
10、个新品种，因为要大面积推广种植，所以必须找到一个快速繁殖的办法。现阶段的开放式组织培养12研究还在处于初探阶段，所以以传统方式的组培找出适合的方式，就可以得到不改变原有的优良性状且抗性强的种苗。本次试验只进行初步的组织培养，不对培养中的常见问题13深入研究，但对其研究也有一定的参考价值。2 实验器材药品：NH4NO3 、 KNO3 、CaCl22H2O 、 0.1%升汞等器材：冰箱、恒温箱、高压灭菌锅、无菌操作台、光照培养箱、电磁炉、分析天平、烧杯、容量瓶、培养皿、培养瓶、解剖刀、枪形镊、脱脂棉、滤纸等。材料：草莓种苗（黔莓I号）3 黔莓I号不同外植体的组织培养3.1 组培对象 本次试验用草莓
11、的作为试验材料，选择适合在贵州种植，方便取材的黔莓I号作为研究对象，取它的不同部分，分别以茎节，叶和芽作为不同外植体进行植物组织培养。3.2 培养基的配制 本次试验所用的基本培养基都是一样的，选用MS培养基（配方见表一），使用的生长调节剂也都是6-BA（萘乙酸）和NAA（6-苄基嘌呤），培养基的PH值为5.8。配制培养基时，采用先配制母液的办法配制大量元素（10倍）、微量元素（100倍）、铁盐（10倍）和有机成分（10倍）四种母液，其中大量元素中的CaCl22H2O（10倍）可以单独配制母液，这样效果更好，以解决大量元素浑浊的问题；植物生长调节剂也分别配制成母液(0.1 mg/mL)，其配制方
12、法是：分别称取这种物质10 mg，将NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期、每升移取量等，保存在冰箱的冷藏室中，妥善保管14。然后在根据倍数分别取量母液来配制培养基，配制好的溶液需要定容和测量PH值，再加入碳源（蔗糖）和琼脂，加热使琼脂充分溶解，需注意加热时烧杯炸裂和造成烫伤，搅拌均匀后趁热快速分装到培养瓶中，每次实验需制备3L培养基，每种外植体需制备3
13、0瓶，将培养平均倒入培养瓶中，每瓶约30毫升。表一 MS培养基用量一览表原配方中的量（mg/mL）理论称量（g）实际称量（g）大量元素（10100 mL）NH4NO3 KNO3 CaCl22H2O MgSO47H2O KH2PO4 微量元素(100100 mL)KI H3BO3 MnSO4H2O ZnSO47H2O Na2MoO42H2O CuSO45H2O CoCl26H2O 铁盐(母液)（10100 mL）Na2-EDTA2H2OFeSO47H2O 有机成分(母液)（10100 mL）甘氨酸 盐酸硫胺素(VB1)盐酸吡哆醇(VB6)烟酸肌醇琼脂蔗糖PH165019004403701700.836.216.98.60.250.0250.02537.327.82.00.40.50.51006g30g5.816.5194.43.71.70.0830.621.690.860.0250.00250.00250.3730.2780.020.0040.0050.00516g30g5.816.500519.00064.40263.70091.70030.08380.62011.69050.86090.02540.00270.00250.37310.2780
