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1、总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)简介：总蛋白(Total Protein , TP)由白蛋白和球蛋白组成。对于生物体液(血清、尿液、脑脊 液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1所有蛋白质分子由纯多肽组成， 含氮量的质量百分比为16% ； 2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都 具有非常相似的特性。目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯 氏定氮法、沉淀法等。Leagene总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本 中的总蛋白含量测定。双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜 离子与肽键形成有色螯合的铜复合
2、物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比 例。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长。双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦 很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。本试剂盒仅用于科 研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：编号 名称TC0547120TStorage试剂(A):双缩脲试剂250ml4C试剂(B):蛋白标准20mgRT试剂(C):蛋白标准配制液5mlRT试剂(D):双缩脲空白试剂(备选)100ml4C使用说明书1份自备料：1、离心管或小试管2、水浴锅或恒温箱3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充
3、分溶解后配制成的蛋白标准溶液，配 制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20弋保存。亦可按自己试验要求继续进行 稀释，如稀释至1mg/ml。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也 宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖中亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。 一般也可以用NaCl或PBS作为溶解总蛋白标准品的稀释液。2、样本处理：血清、血浆样本直接取检测。对于组织样本，按组织质量(g):生理盐水比 例，加入生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。3、TP加样操作，按下表依次加入试剂：加入物(ml)空白管标准管待测管ddH?。0.04蛋白标准溶液(如1mg/ml)0.04
4、待检样品(血清、血浆、组织匀浆液0.04双缩脲试剂2.02.02.04、混匀,孵育。5、比色杯光径，分光光度计测定波长处的吸光度，如无，之间的波长也可。以空白管调零， 读取标准管和各待测管的吸光度。6、当遇到浑浊或溶血样本等，应设样本空白管”：取待测样品加入双缩脲空白试剂，以 双缩脲空白试剂调零，读取样本空白管吸光度。用待测管吸光度减去样本空白管吸光度 后的净吸光度，计算总蛋白浓度。计算：总蛋白(g/L)=(待测管吸光度/标准管吸光度)x蛋白标准液浓度(g/L)注意*：1、蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20弋长期保存。2、待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置 1h或60C放置15min，颜色会随着时间的延长不断加深。3、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂。4、如果没分光光度计，也可以使用酶标仪测定。使用酶标仪测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。5、检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。有效期：12个月有效。蛋白标准配制成溶液后应-20C冻存。
