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1、Phadia250全自动荧光免疫分析系统性能验证Phadia250全自动体外检测系统是由瑞典Phadia公司研制，基于荧光酶联 免疫分析法原理，以提供过敏、气喘及自体免疫疾病的临床诊断和监控为目的， 集反应、检测和数据分析为一体的全自动荧光免疫分析系统。ImmunoCAP特异 性IgE定量是检测人血清或血浆中过敏原特异性IgE的体外实验方法，是用羊抗 人IgE抗体包被的ImmunoCAP，捕获血清中存在的人体受食物和空气中变应原 攻击后所产生的特异性IgE抗体，再以荧光标记的发展液与之结合，荧光强度的 大小与待检特异性IgE的含量呈正相关。以WHO标定的IgE标准品含量的对 数做横坐标，以荧光
2、强度为纵坐标，绘制半对数曲线，由该曲线可以确定不同的 荧光强度所对应的特异性IgE含量。PhadiaImmunoCAP检测过敏原的方法被认 为是国际过敏原检测的公认标准，其他任何一种方法都要与其进行比较。我科于 2011年购买了一台该型号的仪器， 我们对该仪器的准确性、稳定性、重复性、 线性等相关性能的进行了评价，现将检测结果报告如下。1仪器与方法1.1仪器 瑞典Phadia AB公司生产的Phadia 250全自动体外荧光免疫 分析系统。1.2 试剂ImmunoCAP特异性IgE质控品、ImmunoCAP 特异性IgE 校准 品（条）0100 ImmunoCAP特异性IgE酶标二抗、清洗液、
3、底物液以及终 止液等。所用试剂及质控品均为Phadia AB公司原装进口。1.3加样精度 分别对样本（sample）发展液（development）和终止液（stop solution）加样量进行测试，按IDM软件中虚拟Immuno反应盘提示，将20个已 称重量（G1）的检测ImmunoCAP放入反应盘中的正确位置，选择“Replicate”为 20次。执行加样操作后，将检测CAP小心取出，并立刻称重（G2）。加样重量 （G）按G=G2G1。计算20次加样的均值和CV%，CV%应小于厂家声明的加样 2%。1.4精密度 该方案在EP5文件的关于精密度方案的基础上进行改良，取 足够量的特异性IgE
4、项目两个浓度（低值0.35 kUA/L、高值100kUA/L）的阳 性质控品，每天做2批实验，批间的时间相差不少于2 h，每批的样品做双份 检测，共做5 d实验。一共20个结果，每对结果间的差是每批的批内差。一天 中每批双份结果的均值之间的差表示这一天的批间差。对这些批间差统计后，减 去其中的批内差，成为真正的批间不精密度1。并按公式（1）计算变异系数 （CV，%），变异系数应符合厂商声明的要求，批内精密度（CV，%） 5%， 批间批间精密度（CV，%） 5%。1.5准确性 阳性质控品：测试特异性IgE项目三个浓度的阳性质控品 （0.35 kUA/L、17.5 kUA/L、100 kUA/L）
5、，每个质控品测试2次，分别计算 平均值，平均值应在标称范围内。并分别计算绝对偏差=测定值靶值，相对偏差 =绝对偏差/ 靶值X100%，因国际及厂家均无此项有关偏倚的声明，参照美国 临床实验室修正法规（CLIA88）规定的总允许误差】2。允许偏倚设为15%。阴性质控品：测试样本稀释液和0.35 kUA/L阳性质控品各2次，分别计算荧 光响应值平均值，稀释液荧光响应平均值应0.35 kUA/L阳性质控品荧光响应 值。1.6线性 将特异性IgE浓度为90kUA/L的标本（H），混合均匀后，用专 用 Diluent 稀释液（L）按 H、1 h+5 L、2 h+4 L、3 h+3 L、4 h+2 L、
6、5 h+1 L、L进行稀释， 按浓度由高到低的顺序进行检测后，在按浓度由低 到高的顺序进行检测。 取各浓度水平的平均值。以稀释浓度（预期值）为自变 量，以测定结果均值（实测值）为因变量求出线性回归方程，计算线性回归的相 关系数。1.7携带污染率取高浓度特异性IgE质控品（100kUA/L）和低浓度质控 品（0.35kUA/L）各一份， 先测定高值3次（H 1、H2、H 3）， 再测定3 次低次（L1、L2、L3）； 同样先测定高值3次（H 1、H2、H3）， 再测定3 次低值（L1、L2、L3）。按公式： K = （L1L3） / （H 3L3）计算携带污 染率。按厂家声明，携带污染率应104
7、。1.8报告范围按照CLSI EP9A2文件，随机选取无过敏史及风湿免 疫性疾病史的健康体检志愿者20例（男、女各10例）作为参考个体，比较小 样本参考区间和厂家提供参考区间之间的可比性。如果20例参考个体中不超过 2例（或10%的结果） 的观察值在厂家提供的参考区间之外， 厂家提供的 95%参考区间可以接受，也就是说，可以直接引用厂家提供的参考区间3。2结果2.1 加样精密度 进入仪器“PIPETTE DISPENSING TEST ”界面，分别 选择样本（sample）、发展液（development）和终止液（stop solution）测试， 按IDM软件中虚拟Immuno反应盘提示，
8、将20个已称重量（G1）的检测 ImmunoCAP放入反应盘中的正确位置，选择“Replicate为20次。执行加样操作 后，将检测CAP小心取出，并立刻称重（G2）。加样重量（G）按G=G2G1。计 算20次加样的均值和CV%。样本（sample）、发展液（development）和终止液（stop solution）三种加 样量的加样精度验证结果见表1。均小于厂家声明的加样CV%2%。2.4线性将特异性IgE浓度为100的患者血清用专用“dilution稀释后， 按预定方案测定2次，各点平均浓度分别为0.35、8.99、36.6、57.3、71.3、85.3 和92.5 kUA/L，其测定
9、值与理论值的直线相关系数为0.987，R2=0.974，特异 性IgE预测值与实测值散点图见下图。2.5携带污染率 高值和低值各次的平 均值为：96.5 kUA/L、97.4 kUA/L、100 kUA/L、0.35 kUA/L、0.35 kUA/L、 0.36 kUA/L。根据公式K= （L1L3） / （H3L3）计算携带污染率。特异性IgE的 携带污染率为0.1X104。符合厂家声明相符。2.6报告范围随机选取无过敏史及风湿免疫性疾病史的健康体检志愿者 20名，采空腹血5 ml，测定血清中特异性IgE水平，0.35 kUA/L质控品的平 均荧光响应值143。健康志愿者该项目荧光响应值除1
10、例为174,其余均低于143, 最小响应值为21。厂家提供的特异性IgE参考范围为V0.35 kUA/L, 20名志愿 者中，有19例测定值在该范围之内。3结论根据美国临床和实验室标准化协会(clin ica l and laboratory standards institute,CLSI)在 EP19P 中的注释，验证(demonstrat ion)是由医学检验部门进行，验证所使用系统获得预期性能方面的能力，并且验证实 验的实验方案要求简便、实用、易于操作4。本实验除进行了精密度、准确度、 线性范围及参考区间的验证外，还对仪器的加样精度、携带污染进行了验证，并 以制造商仪器说明书和试剂说明
11、书中声明的性能指标为验证目标或标准来判断 验证实验的成功与否。Phadia 250全自动荧光免疫系统由于其基于ImmunoCAP的特殊固相免疫 反应设计。其加样精度的验证不同于其他免疫系统或全自动生化分析系统，必须 依赖于检测ImmunoCAP进行称重。仪器右侧的加样针只进行40ul的样本或酶 液的吸取，左边的加样针仅进行50ul的development和200ul的stop solution 的吸取。并对相应体积进行了固定。本实验中，各种液体的加样量均符合相应要 求。Phadia250全自动体外检测系统是瑞典生产并提供试剂的全封闭性系统， 提供了欧美人群的特异性IgE参考区间，所以只需要选择
12、20个参考个体的样本 进行验证，20例样本特异性IgE的荧光响应值仅有1例超出参考范围下限0.35 的荧光响应值，其余均在此范围内，可以引用此参考区间作为本实验室特异 性IgE的参考区间。综上所述，Phadia250全自动体外检测系统测定特异性IgE的精密度、准 确度、分析测量范围及参考范围性能均与厂家声明一致；此验证方案和实验方 法简便可行， 可用于其他项目的性能验证。参考文献1 冯仁峰.临床检验质量管理技术基础.第1版.上海科学技术文献出版 社，2003： 42.2 张秀明，温冬梅，袁勇.临床生物化学检验质量管理与标准操作程序. 北京：人民军医出版社，2007： 103.3 王凡，蒋红君.罗氏2010免疫分析仪检测甲胎蛋白的性能验证.现代预防医，2012，39(15)： 39113914.4 张莉，吴炯，郭玮，等.医学检验检测系统应用前的性能评价.检验医， 2006, 21 (6)： 560563.
