药物敏感试验实验报告

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1、竭诚为您提供优质文档/双击可除药物敏感试验实验报告篇一：药敏试验报告药敏试验报告（琼脂稀释法）一、实验目的检测载铜离子土对沙门氏菌的最小抑菌浓度（mlc）二、实验 原理三、实验材料与试剂材料：平板，锥形瓶，10mLep管等；试剂：载铜离子土，沙门氏菌，琼脂平板计数培养基，mh肉汤培养基，硫酸（1%），氯钡（0.25%）。四、实验方法1 配制琼脂平板计数培养基，按配方配制 300mL，mh 肉汤培 养基100mL，待高压；2高压灭菌平板，锥形瓶，10mLep管等；3沙门氏菌扩大培养:10mlep管中加入4mlmh肉汤培养基,4ul 菌液，放置摇床37C，220rpm过夜培养；4麦氏比浊管0.5的

2、制备：25%氯化钡01ml, 1%硫酸4. 9ml。8（即细菌的近似浓度为X 10/ml）5将扩大培养的沙门氏菌调制 0.5麦氏比浊度后，再稀释100 倍备用；（每组做三个重复，16-24h后观察结果）五、实验结果实验组 1、2 以及对照组平板中，肉眼可见针尖状半透明菌落， 革兰氏染色后，镜下形态为红色短杆状，初步断定为沙门氏菌； 实验组 3、4、5 未见菌落，涂片染色后，镜下也未观察到细菌。 六、结论载铜离子土对沙门氏菌最小抑菌浓度（mlc ）为3g/L。篇二：001-药物敏感试验抗菌药物实验方法药敏试验由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药 性问题正变得越来越突出，不少耐药菌

3、株可耐受多种抗生素。由 此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延 长，死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经 济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类， 对人类健康也造成潜在威胁。专家强调指出，临床上应合理应用 抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜 禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分 发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损 失，阻碍了养殖业的快速发展和经济效益，所以使用抗菌药预防 和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。但由于 养殖过程中不科学的

4、、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正 变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成 的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡 率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失， 而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健 康也造成潜在威胁。因此，临床上应合理应用抗菌药，以避免或 减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要 内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效， 并尽可能减少其不良影响。一、什么是药敏试验？抗菌药物敏感性试验(Antimicrobialsusceptibilitytest, AsT),简称药敏试验，

5、是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试 验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择 治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治 疗选药。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能，也是使用 抗菌药物治疗前必不可少的一道环节。二、药敏试验的意义1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性， 指导临床合理用药。因为实验是在体外对已经分离的细菌进行药 敏，不需要生物载体，不需要实验动物，操作相对简单，成本相 对降低。是一种既经济又有效的方法。2、可以对流行病学调查进行监控，控制和预防耐药菌株的流 行。因为随着新型致病菌的不断出现，各种致病菌对不同的抗菌 药的敏感性不同，

6、同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也 有差异。进行有效的药敏试验可以及时掌握各种新型菌种和菌株 的耐药性，对流行病学调查建立监控，同时采取相应的措施也就 可以控制和预防耐药菌株的流行。3、为临床用药提供参考依据。因为一个正确的药敏试验结果 可作为临床兽医和畜禽养殖者选用有效抗菌药的参考。长期以来 由于各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药药效下降或消 失。不能很好的掌握药物对细菌的敏感程度，不但造成药物浪费 而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。近十几年， 在肉鸡生产中，为了控制大肠杆菌及某些细菌感染，一些抗菌药 物的盲目使用，导致耐药菌株越来越多。根据已进行的大量药敏 试验结果，

7、大肠杆菌、沙门氏菌对曾经敏感的氨基糖苷类、氟喹 诺酮类等，均产生了不同程度的耐药性，经常发现对十几种常用 抗菌药都不敏感的菌株。这是一个非常危险的信号。所以在临床 疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，应扩大常规抗菌药种 类进行药敏试验，根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意 交替用药，按疗程投药，这样才能收到较好的治疗效果。三、常用的药敏试验方法兽医临床常用的药敏试验方法主要有两种，即扩散法和稀释 法。其中扩散法属手工测试方法，通过测试药物纸片或者牛津杯 在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感 稀释法包括试管稀释法和微量稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培养 基内的生长

8、情况，判断其最低抑菌浓度（mlc）。（一）纸片法 由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实验室和基层 单位所采用。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法，目前牛 津杯法和打孔法在兽医临床已较少应用。以下简单介绍纸片法。1、 药敏纸片的制作纸片法中使用的药敏纸片目前市场上已有较多厂家的产品销 售。但也可根据需要自制，具体自制的方法如下：取质量较好的定性滤纸，用普通的打孔器打成直径6mm的圆 形小纸片。取圆纸片 50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中，以单 层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后，置于37C 温箱或烘箱中数天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0. 01ml计，在上述含有

9、50片纸片的小瓶内加入药液05ml,不时 翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡30分钟即可。同时在 记录药物名称，于37C温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过 长，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。 干燥后即密封。切勿受潮，置阴暗干燥处或家用冰箱中保存，有 效期 4-6 个月。2、药液的制备自制药敏纸片时还需自行配制抗菌药液。抗菌药的稀释剂通 常用蒸馏水。一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度， 按 1g 需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制药液所加 蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料，其换算方法为：1g 本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做

10、药敏试验的药液。3、试验操作方法在超净工作台中或酒精灯旁，用无菌棉签或经酒精灯火焰灭 菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将菌液均匀涂布到 平皿中的固体培养基表面。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养 基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察 结果，要求药敏纸片均匀分布于培养基上，位置安排适中，防止 出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm，可在平皿中 央贴一片，外周等距离贴 56片。记住每种药敏纸片的名称。贴 完纸片的平皿15分钟后再置于37C温箱中培养16 24小时，观 察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈， 根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的

11、敏感性。表 1 药敏试验结果判定标准 抑菌圈直径（毫米）敏感性20XX-2010-14V100极敏感高敏感中敏感低敏感不敏感实践证明，利用自制药敏纸片进行药敏试验，可以灵活选药， 与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场 药品范围内或本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物。还可 在短时间内选择最佳药品和最佳剂量，既能缩短病程，又能避免 盲目用药，减少浪费。4、影响药敏试验结果的因素在以纸片法进行药敏试验时，以下几方面因素可影响试验的 结果：（1）培养基：首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养 基。培养基的成分的不同，不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影 响到抑制圈的直径。一般细菌

12、，如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普 通营养琼脂；做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板；链 球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次，倾注平板时，厚度 应合适（约5-6mm）,不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注 培养基 18-20ml 为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物 质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷 和对氨苯甲酸（pAbA）能拮抗磺胺药和Tmp的活性。（2）细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小 能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。（3）药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果， 需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。（4）培养时

13、间：一般细菌培养温度和时间为37C12-24小时, 有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好药敏纸片的培养基先 置4C冰箱内2-4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37C温箱中 培养，可以推迟细菌的生长，而得到较明显的抑菌圈。5、纸片法药敏试验存在的问题 当前进行药敏试验仍然存在一些问题，主要包括以下几方面（1）方法学不统一，没有标准化。（2）市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片等缺乏严格质 控，质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。（3）因需要先进行细菌的分离培养，所以药敏试验报告出结 果时间长，检验与临床缺乏沟通，对于基层兽医站或养殖场，药 敏结果不能满足临床治疗要求，容易延误治疗时机。

14、但根据有关 报道，也可进行简易的药敏试验，方法如下：无菌取病死畜禽的 部分肝、脾等组织，按 1：5 加生理盐水研磨制成悬液，静置 5 分钟，用无菌吸管吸悬液，加两滴于营养琼脂板上，涂布均匀，5 分钟后贴上药敏试纸，培养、观察抑菌圈大小。（4）对于部分营养需求较高的细菌或微生物，如链球菌和支 原体，临床上较难培养，限制了药敏试验的应用。（5）部分养殖场或基层兽医站缺乏做细菌分离培养和药敏试 验的意识。绝大多数养殖者或技术人员是在没有明确微生物学诊 断的情况下使用抗菌药物，养殖场规模越小，细菌培养和药敏试 验做的越少，有的养殖场轮翻使用多种抗菌药物而不做细菌培养 和药敏试验，致使疗效不佳，治疗时机

15、延误和药品的浪费。一些 病例用药前不做药敏试验，而是在大量使用多种抗菌药物疗效不 明显时才想起做细菌培养和药敏试验，而此时细菌已对多种抗菌 药产生耐药性。6、纸片法药敏试验中应注意的问题药敏试验不仅是兽医工作中的一项基本技能，也是使用药物 治疗前必不可少的一道环节，因此在实际操作过程中应注意以下 几个问题，以保证试验结果的可靠性。（1）病料采集：采集病料最好是典型的病例，原则上采集的 时间越早越好，特别是夏季，如果时间过长会发生质变，影响试 验的结果，通常采集 5 份以上，使其具有代表性。（2）划线接种：在接种的过程中，所用剪刀或手术刀必须灭 菌消毒，用酒精灯消毒时，在切口时注意不要过热，否则

16、烫死细 菌，划线涂布时定要均匀。（3）培养基的选择：如前所述，培养基的成分的不同，不仅 影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。因此，操作 过程中应注意培养基的选择，必要时可进行细菌分离培养。（4）待试菌的涂布：用灭菌铂金耳无菌操作进行待试菌涂布 时，应涂布均匀，并注意不要划破培养基的表面。（5）贴纸片：贴纸片时位置一定要安排适中，防止出现抑制 圈重叠。（6）判定结果：根据试验不同要求，并严格遵守细菌生化实 验室观察结果的时间要求，多在 24 小时内判定，注意时间过长或 过短都会影响到抑制圈的正常结果。（二）稀释法及其他方法1、肉汤稀释法1.1 常量肉汤稀释法1.1.1. 抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000 口 g/ml（如1280 口 g/m