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1、对从中国四川泡菜中分离的乳酸菌进行识别和鉴定泡菜是传统的发酵蔬菜产品，在中国的四川省很受欢迎。本文研究白目的是通过分析来自四川省6个不同地区的36个样品来调查主要物质乳酸菌在泡菜中的多样性（实验室）。这些样品的实验室计数的记录是从3.90至IJ8.40cfuml-1。使用MRSO旨培养基，从这些样本中获得总共有185个假定的革兰氏阳性实验室和过氧化氢酶缺乏的属性，这些菌株被发现在物种水平生理测试上，16srRNA基因测序和PCRT增鉴定。结果显示，所有的所分离的乳酸菌都准确地确定为肠球菌thailandicus（2株）、孚L杆菌（16株）,l.短（24株）,l.paracasei（9株）,l.
2、杆菌（81株）,l.pentosus（38株）,l.sakei（8株）,l.spicheri（1株）、乳酸明串珠菌（1株）和片球菌属ethanolidu-rans（5株）。四川泡菜的主要实验室l.杆菌，它是从大多数样本中分离的。结果还表明，来自四川省不同地区的实验室物种复杂成分，和这样一个资源丰富的实验室菌株为进一步的研究提供原始数据涉及益生菌菌株的选择。关键词：识别；乳酸菌；泡菜;16srRNA基因序列介绍：泡菜，一种有点咸有点酸的发酵的蔬菜，四川人已经吃了数百年。由于制作简单和独特的风味，泡菜很受欢迎，经常作为四川主菜的配菜或者开胃菜。自制的泡菜都是基于高度依赖于原材料生存的微生物存在而自
3、然发酵，。对于所需酸度和风味水平的不同，泡菜的制备过程是很重要的。通常许多蔬菜，如白菜、芹菜、辣椒和萝卜都是沉浸在6-8%的盐溶液而红辣椒，葱和大蒜在一个特殊的罐子里夏天至少5-7天（约20-27C）冬天长达12-16天（约。C）8-15日。采收的蔬菜表面上有各种各样的微生物，虽然蔬菜表面乳酸菌的数量（实验室）通常是相对比较低的，在最后的发酵阶段，由于实验室厌氧和低盐的条件使其快速增长（Hanetal.,2007）。刚采摘的蔬菜表面所附着的微生物主要是革兰氏阴性腐生菌（Seoetal.,2010）。在自然发酵过程的初始阶段，实验室的数量是低的，使得硝酸盐还原细菌快速增长（Yanetal.,20
4、08）。在中间阶段，肠杆菌科（大肠杆菌、肠杆菌属等）和芽抱杆菌是低盐和厌氧条件下，他们逐渐死亡。同时，实验室菌种快速增殖，产生酸，在厌氧条件下成为优势种和抑制肠杆菌科和芽抱杆菌的生长。发酵结束时，大量的实验室将会控制微生物，使泡菜发酵保持稳定（Karasuetal.,2010;PanagouandKatsaboxakis,2006）。因此，它是值得实验室从泡菜中进行分离菌体使泡菜能都进行工业化生产。这项研究报告是对来自中国四川省不同地区的36个样品品种进行分离和鉴定。185个菌株通过表型特征进行初步鉴定，并且进一步通过16sRNA测序和PCRT增技术进行测定。材料和方法泡菜样品的收集，36个样
5、本的泡菜收集来自四川省的六个不同的地区，泡菜在抽样时的温度范围从8.7C到16.4C;平均温度为13.2C（表1）,在采样现场?菜汁的pH值测定应用校准便携式酸碱计（美国ExtechpH100）,室温下，泡菜汁的样品收集时间为15分钟，在冰上进行2-5h运输和样品到达实验室后立即进行了微生物分析。计数和隔离的实验室稀释是1毫升的泡菜汁加9毫升生理盐水（0.9%氯化钠）。进一步连续稀释10倍，范围是10-5到10-9,在实验室进行处理和测定，使用布朗甲酚紫（BCP琼脂、Nissui制药、To-kyo、日本）厌氧30C孵化2天，平板在30C用灭菌锅罐进行灭菌，（巴尔的摩生物实验室，GasPak10
6、0厌氧系统，BD生物科学，火花，医学博士，美国）。菌落是从MRSW养基上随机地挑取，每个平板含有30-300个菌落，（ManRogosaSharpe液体培养基，丙烯酰胺），并转移到5ml的MRS夜体培养基中，选中平板上白菌落在MRSIf养基上进行反复纯化，革兰氏阳性和过氧化氢阴性酶是从纯化的平板中提取，在-80。C,10%（w/v）脱脂牛奶进行冷冻储存。冻干隔离进行长时间存储。实验室常规鉴别，进一步鉴定革兰氏阳性和过氧化氢阴性酶，是由使用以下物理方法进行分离：从精氨酸氨生产；二氧化碳是从倒杜伦管中的含有葡萄糖的MRS夜体培养基中提取，Table1.Generalfeaturesofpickle
7、samplesfromsixdifferentregionofSichuan.SampleSampling TemperatureLABpHvalueMainmaterialnumberlocatio n( C)(logcfuml -1)15.9 0.53.8 0.35.54 1.491to3Chengdusummerradish4to7Chongzhou8to19Dayi20to25Pujiang26to34Qionglai35to36Xinjin(15.5?16.4) (3.5?4.0) (4.15?7.11)13.1 0.53.4 0.26.95 0.71celery,cowpea,ca
8、bbage,bambooshoots(12.6?13.5) (3.2?3.5) (5.99?7.69)summerradish,celery,cowpea,cabbage,Ch12.3 1.7(8.7?15.1)14.5 1.53.7 0.46.65 1.34(3.5?4.5) (3.90?8.17)3.8 0.66.82 1.51(11.5?15.3) (3.2?4.5) (4.89?8.26)13.2 1.33.5 0.46.26 1.09(11.9?15.3) (3.0?4.2) (4.36?7.54)11.6 0.83.7 0.97.73 0.95inesecabbagesummerr
9、adish,celery,cowpea,cabbage,bambooshootssummerradish,celery,cowpea,Chinesecab bage,carrotsummerradish,cowpea,celery,cabbage,capsicumfrutescens(11.0?12.2)(3.0?4.3)(7.05?8.40)Average分别在10C,15 C,45C和50 C的情况下在 MR缴体培养基中生长5天，在pH值为3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,9.013.21.73.60.46.581.25和9.6的情况下在MRS夜体培养基中生长3天，MR流养基中的耐盐
10、度为含有2.0%3.0%,4.0%,6.0%,6.5%,8.0%O用一套商业工具通和10.0%氯化钠(w/v),在分离菌种的温度下培养3天(Ko-zakietal.,1992;Yuetal.,2011)过D和L乳酸产生葡萄糖同分异构体的类型和数量来改变MR流养基。(霍夫曼罗氏诊断,Mann-heim,德国)。碳水化合物发酵试验由根据Jayne-Williams描述的方法(1975)。26种碳水化合物通过使用糖基与氯酚红汤作为指标进行了测试。不同糖被添加到基础培养基用来改变培养基,以最终浓度为0.5%(w/v)。碳水化合物发酵的结果检查是根据Bergey系统细菌学手册(KandlerWeiss,
11、1986)中所提供的信息。16srRNA基因测序和亲缘关系分析，总基因组的DNA从5ML整夜培养的培养基中提取，温度设定为37。C,通过先前的方法(Yuetal.,2009)。纯化DNA浓度稀释到最后的100ng/口用来测定。16srRNA基因放大使用引物(GCAGAGTTCTCGGAGTCACGAAGAGTTTGATCCTGGCTCAG)and16S-RA(AGCGGATCACTTCACACAGGACTACGGCTACCTTGsun进行描述等等(2010)核甘酸1至21是16S-FAand16S-RA特定的测序引物，分别地，1.杆菌组的辨别，为进一步班别菌株1.杆菌组，进行多重PCR1I定r
12、ecA基于基因的引物：paraF(5-GTCACAGGCATTACGAAAAC-3)entF(5-CAGTGGCGCGGTTGATATC),planF(5-CCGTTTATGCGGAACACCTA3和上一页(5-TCGGGATTACCAAACATCAC-3PCRmix-ture和amplifi阳离子进行所述Torrianietal。(2001)。结果计数和分离的实验室泡菜样品的pH值范围从3.2到4.5(表1)。实验室的可行样品的数量都显示在表1。实验室36种泡菜样品在BCP琼脂培养基不同cfuml-1范围从3.90到8.40。从成都，Chongzhou,大邑，浦江,Qionglaia新津县地
13、区实验室计数分另I为5.541.49,6.950.71,6.651.34,6.821.51,6.261.09,1.097.73日志cfuml-1,分别。革兰氏阳性和过氧化氢阴性细菌生长的MR瓯培养基被认为是假定的实验室，和185个假定实验室分离出36泡菜样品。YUetal.Vol.58-_/Table2.PhenotypiccharacteristicofLABisolatedfromnaturalfermentedpickleinSichuanProvince,China.-aGroupsCharacteristics123456789Numberofisolates162491198112
14、5ShapeRRRRRRCCCGasfromglucose-+-+-bLacticacidisomerLDLLDLDLDLDLDLNHfromarginine-+-+-+-GrowthatpHvalue30c000000003.50068900003415249119411054.516249119511055.016249119511259.0009110511209.6000001020GrowthinNaCl(w/v)2.0%16249119511253.0%16249119511254.0%16249119511216.0%16109119511206.5%1007119510208.0%300895000010.0%000020000Growthattemperature(C)10142491190100
