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1、AidQuick Gel Extraction Kit琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒目录号：DR01适用范围：适用于琼脂糖凝胶DNA回收: 试剂盒组成、储存、稳定性:，4*5*21。nTmrx/AJ、试剂盒组成gEJ-、 1 心 Al保存1 1 * :50次 (DR0101)100次 (DR0102)200次 (DR0103)平衡液室温5ml10ml20ml溶胶液DD室温50 ml50mlX2200 ml15 ml25 ml50 ml漂洗液WB室温第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB室温10 ml15 ml15 ml吸附柱EC室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200
2、个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。储存事项:1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直 接使用，可在37 r水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。3.2. 储存于低温（4C或者一20C ）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储 存均在室温下（15C-25C）进行。避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍:在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再 通过一系列快速的漂洗一离心的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质 去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲
3、液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点：1, 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附 量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2, 使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、 连接克隆等下游反应。3, 溶胶液加酚红调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到 最佳结合效果，大大提高回收效率。4, 改进的溶胶液配方，大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH 缓冲在最佳结合范围内。5, 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。 注意事项1. 所有的离心步骤均在室温
4、完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机， 如Eppendorf 5415C或者类似离心机。2. 溶胶液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。 若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速 降低。4. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15.， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达85%。5. 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波 紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。6
5、. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水 洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应 该保存在一20C。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0)，但熟。丁入可能影响下游酶切反应，使用时可以 适当稀释。 关于平衡液的使用1. 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影 响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水 基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强 碱性溶液，若不小心
6、碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触 空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37 r使沉淀完全消失。2, 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100叫的平衡液至柱 子中。13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。 此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。 操作步骤提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打 钩标记巳加入乙醇，以免多次加入！1. 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA 的凝胶，得到凝胶体积越小越好。2. 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.
7、5ml离心管，称重。先称一个空1.5ml离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得 到凝胶的重量。3. 加3倍体积溶胶液DD。如果凝胶重为100mg，其体积可视为100pl，则加入300pl溶胶液。如果凝胶浓度大于2%，应加入6倍体积溶胶液。4. 56C水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2-3分钟涡旋震荡一次帮助加速 溶解。5. 可选,一般不需要：每100mg最初的凝胶重量加入150gl的异丙醇，震荡混匀。 有时候加入异丙醇可以提高回收率，加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时， 不加入异丙醇，加入有时反而可能降低回收效率。平衡液预处理吸附柱：使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必
8、做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”6. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟， 12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。如果总体积超过750pl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变 成橘红甚至紫色，此为酚红PH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。7. 加入600以漂洗液WB （请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30 秒，弃掉废液。8. 加入600gl漂洗液WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。9. 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂 洗液中残留乙醇抑制下游反应。10. 取出吸附柱EC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50gl洗脱缓 冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70C水浴中加热效果更好），室温放置2分钟， 12,000rpm离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱 中，离心1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体 积，但是最小体积不应少于25/，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。
