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1、医学细胞生物学设计型实验设计报告小组成员：宋雪美(1310550143)古月(1310550144)韩露(1310550145)陈玲(1310550146)实验项目：细胞核的分离与鉴定实验原理：细胞核是细胞生命活动的调控枢纽，也是蕴藏和控制遗传信息的中心。要观察细胞核首先要将其从细胞中分离由来。我们在实验中用柠檬酸分离细胞核，在柠檬酸介质中分离细胞核可以显著地除去附着在细胞核膜上的细胞质成分。由于柠檬酸降低了溶液的ph值，这样可以减少细胞核的破碎率，并能分离得到较高分子质量的核酸。可能是由于核糖核酸(一种酸溶性蛋白)被柠檬酸除去，以及二价阳离子被柠檬酸螯合所致。柠檬酸的浓度对分离细胞核的质量有
2、较大影响。通常在较低的ph值时，可以得到较高的细胞核。但在过酸条件下，可能引起细胞核成分的改变和酶的失活。为了研究细胞内核酸，一般常在ph值为4,甚至在ph值为2.5时分离细胞核。如为了分离细胞核的酶则需要较温和的条件此时可以在ph值为66.2的极稀柠檬酸溶液中分离细胞核。细胞核的密度和大小与细胞内其他组分不同，将组织制成匀浆(指低温下，将组织块放入匀浆器中，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液)，在均匀的悬浮介质中用特定的离心力进行离心，分离，然后进一步分析鉴定。实验步骤：1.将小白鼠断头处死，手提小鼠使其腹内血液尽量流出2 .取10g肝脏剪成小块，按1：
3、10(重量：体积)加入1.5%宇檬酸溶液，将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆器，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿。左手握持匀浆器，右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块。3 .把匀浆液用4层纱布过滤，滤液以800900r/min离心10分钟，弃上清液，沉淀再用1.5%宇檬酸液洗一次。4 .将沉淀再悬浮于100ml0.25mol/l蔗糖-1.5%柠檬酸溶液中制成悬液，将离心管内预先加好200ml0.88mol/l蔗糖-1.5%柠檬酸溶液，并将上述悬液置于0.88mol/l蔗糖-1.5%柠檬酸溶液之上以1000r/min离心10分钟即可得到较纯的细胞核沉淀。5 .用玻璃棒碰一下细胞核的沉淀，
4、放在载玻片上轻磨，然后加一滴台盼蓝(trypanblue)染色液，加上盖玻片，在光学显微镜下进行观察。注意事项：尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持细胞组分的生理活性。预期结果：在低倍镜下找到标本，然后换高倍镜，可观察到被染成淡蓝色的圆形的细胞核。实验仪器、设备、器具表名称数量说明解剖器1解剖小鼠玻璃匀浆器1充分磨碎肝组织得到捣碎液天平1称量肝组织离心机1得到细胞核光学显微镜1观察染色后的细胞核实验试剂表名称用量说明0.9%M化钠清洗小鼠肝脏1.5%宁檬酸钠向清洗纱布过滤的沉淀0.25mol/l蔗糖-1.5%柠檬酸溶液100ml用于离心0.88mol/l蔗糖-1.5%柠檬酸溶液200ml用于离心台盼蓝染液12滴染细胞核台盼蓝染液：取0.4g台盼蓝、0.81g氯化钠、0.06g磷酸二氢钾和0.05g羟基苯甲酸盐于95ml重蒸水中，加热溶解后用1mol/l氢氧化钠溶液调ph值至7.27.3之间最后定容到100ml
