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1、实验 标准曲线法测定罗丹明B的含量1 实验目的（1）了解紫外-可见分光光度计的结构及使用方法。（2）掌握标准曲线法定量分析的技术，了解紫外可见光谱法进行纯组分定 量分析的全过程。（3）掌握不同浓度的配制和样品含量的计算。2实验原理在有机化合物分子中有形成单键的o电子、有形成双键的n电子、有未成键 的孤对n电子。当分子吸收一定能量的辐射能时，这些电子就会跃迁到较高的能 级，此时电子所占的轨道称为反键轨道，而这种电子跃迁同内部的结构有密切的 关系。在紫外吸收光谱中，电子的跃迁有of。*、mo*、nn*和nn*四种类型, 各种跃迁类型所需要的能量依下列次序减小：oo*no* nn *nn* 跃迁类型
2、吸收带九max/nm特征典型基团smaxoo* 远紫外区150远紫外区测定C-C、C-H （在紫外光区观测不 至【）no* 端吸收150230紫外区短波长端至 远紫外区的强吸收-OH、-NH 、-X、-Snn* El带< 190芳香环的双键吸收(-C=C-C=C-) n >200K(E2)带< 217 共轭多烯、-C=C-C=O- 等的吸收& gt;10,000nn* R带200400 含 CO，NO 2 等 n 电 子基团的吸收C=O、C=s、一 N=O、一 N=N、C=N <100由于一般紫外可见分光光度计只能提供190850nm范围的单色光，因此， 我们只能测量n
3、o*的跃迁，nn*跃迁和部分nn*跃迁的吸收，而对只能产生 200nm以下吸收的oo*的跃迁则无法测量。紫外吸收光谱是带状光谱，分子中存在一些吸收带已被确认，其中有K带、 R带、B带、E1和E2带等。K带是二个或二个以上n键共轭时，n电子向n*反键轨道跃迁的结果，可 简单表示为nn *。R带是与双键相连接的杂原子（例如C=O、C=N、S=O等）上未成键电子 的孤对电子向n*反键轨道跃迁的结果，可简单表示为nn *。El带和E2带是苯环上三个双键共轭体系中的n电子向n*反键轨道跃迁的 结果，可简单表示为nn *。B带也是苯环上三个双键共轭体系中的nn *跃迁和苯环的振动相重叠引 起的，但相对来说
4、，该吸收带强度较弱。以上各吸收带相对的波长位置由大到小的次序为：R、B、K、E2、E1， 但一般K和E带常合并成一个吸收带。与可见光吸收光谱一样，在紫外吸收光谱分析中，在选定的波长下，吸光度 与物质浓度的关系，也可用光的吸收定律即朗伯一比尔定律来描述：A= lg (Io /I) =s be其中A为溶液吸光度，Io为入射光强度，I为透射光强度，为该溶液摩尔 吸光系数，b为溶液厚度，c为溶液浓度。特征峰：1. 吸收峰的形状及所在位置定性、定结构的依据2. 吸收峰的强度定量的依据A = lg(l/T)=KCLT：透射率九：摩尔吸收系数，单位：Lcm i.mol 1C：浓度L：光程长紫外可见光谱的两个重要特征波峰：九max, k例：九maxEt = 279 nm (k=5012， logk=3.7)3仪器与试剂 仪器：紫外分光光度计，移液管，吸耳球，微量注射器。试剂：罗丹明B溶液。4 实验内容与步骤(1)标准曲线的绘制 配制一系列标准浓度的罗丹明 B 水溶液，用水作空白溶液，测紫外吸收光 谱，确定Xmax，绘制c-A标准曲线。(罗丹明B原液浓度l.OOOmM)(2)未知罗丹明 B 溶液的紫外可见光谱 以水为空白溶液，测未知罗丹明 B 溶液的的紫外可见吸收光谱。5数据处理( 1)制作标准曲线。(2)根据未知罗丹明B溶液在Xmax的A，在标准曲线上查浓度。
