《倒置荧光显微镜操作说明》由会员分享，可在线阅读，更多相关《倒置荧光显微镜操作说明（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、显微镜及数码成像系统操作简要 第一部分观察方法步骤1、明场观察方法步骤2、相差观察方法步骤3、荧光观察方法步骤第二部分使用 IPP 拍摄图像流程（相差观察、荧光观察） 第三部分使用 BX2-BSW 拍摄图 像流程（明场观察）第一部分观察方法步骤1、明场观察方法步骤步骤涉及部件打开电源开关主开关 拨到“I”选择LI镜观察光路三目观察筒选择杆拨至最内聚光镜选择明场（BF）聚光镜选择钮相差移出光路 放入标本于载物台载物台、标本夹选择合适物镜进入光路开始观察调节瞳间距观察筒瞳间距调节调节屈光物镜选择钮寻找标载物台控制手柄手动调焦度 镜屈光度调节环调节光照亮度图像采集 准备工作：柯勒照明光轴中心调节 第
2、一次观察须完成此调试，完成后不需要再调节，直至装卸过部件后，使用过程 中请不 要扭动聚光镜中心调节旋钮。1聚光镜升咼到最高位置聚光镜高度升降旋钮2用10X物镜聚焦至清晰3视场光阑打至最小视场光阑4 逐步下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像 聚光 镜升降旋钮5 调节聚光镜中心调节旋钮，使正多边形移至视场中心聚光镜中心调节旋钮6 逐步打开视场光阑，使正多边形与视场边缘内切视场光阑7稍加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即可视场光阑2、相差(PH)观察方法步骤步骤涉及部件打开电源开关选择 L1 镜观察光路主开关拨到“I”三目观察筒选择杆拨至最内放入标本于载物台载物台、标本夹选择合适物镜进入光路
3、物镜选择钮选择与物镜匹配的相差环进入光路聚光镜选择钮PHI对应10X物镜、PHI对应20X物镜、PH2对应40X物镜开始观察调节瞳间距观察筒瞳间距调节调节屈光度目镜屈光度调节环寻找标本载物台控制手柄 手动调节调节光照亮度图像采集3、荧光观察方法步骤准备工作：高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯）及部件主开关拨到“I”选择合适的荧光激发块 打开光闸开始观察选择合适的物镜 物镜选择按钮选用合适的 ND 滤色片荧光反射照明器上 ND 片插槽调节汞灯透镜聚焦旋钮使视场亮度均一 汞灯透镜聚焦旋钮 调节视场光阑和孔径光阑改善反差 视场光阑/孔径光阑图像采集准备工作：高压汞灯对中
4、（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 调整完成 后，请不要触动对中部件，如汞灯对中旋钮，视场光阑对中钮等。 汞灯供电器开关打 到“I”灯供电器主开关：拨到“I”，待弧光稳定后进行调节。选择 LI 镜察光路光路选标本放于载物台中择杆载物台选择蓝色荧光激发块进行调节，打开光闸，光路通过荧光激发块选择按钮载物台控制手柄10X 物镜转入光路，标本聚焦清晰物镜选择 钮手动调焦距度取下物镜或使空物镜孔进光路调节瞳间 观察筒调节屈光屈光度调节环物镜转盘视场光阑拉出至最小，此时对中标本表面出现 2 个斑点视 场光阑杆使两斑点最清汞灯透镜聚焦调节旋钮使两斑点重合（先水平后重10X物镜转入光路，
5、向对中标本聚焦清晰，视场光阑推进至最大物镜选择按钮 视场光阑杆调节视场亮度均匀一致集光透镜聚焦旋钮（亮度最大） 对中视场光阑视场光阑拉出至最小调整正多边形至视野中央视场光阑中心调节钮完成高压汞灯对中第二部分1.在桌面点击以下图标打开IPPo使用IPP拍摄图像流程呆呆Dig口编辑（些17劃文件国 编辑（些乎集序列（$）増强因區礁制 左禎pl占li ；TlMi?心卜4 |甸Ml瞬入丫:2在菜单栏中，（采集）Acquire菜单下点击（视频/数字图像采集） Video/Digital Capture,或点击工具栏中画，即出现控制CCD拍照的对话框。3有两种拍照界面可选，点击图一Basic Dialog
6、和图二Advance即可在两种模 式下自由转换（以下操作将主要以图二的对话框为主）4点击图三More/Less按钮即可在基本对话框和扩展对话框间转换。5. 相机有两种状态可选：，一种是预览（Preview）模式，用来观察动态图像，一般 在聚焦和确定感兴趣区域时使用；另一种是拍摄（Snap）模式，用来获取图像。6. 点击预览后，如果显示的图像为完全黑色，最大的可能是光路转换器没有切换到 CCD,所以请把光路转换器切换到CCD。7. 点击预览后，一般会有图像太亮或太暗的情况，这是因为曝光时间不适合造成的 如下面两图所示。8. 自动曝光：自动曝光可以帮我们找到比较适合的曝光时间，即我们关心的样本看到
7、 比较清晰。当出现一个非常暗或者非常亮的图像时，可以通过以下三种方法之一获得 自动曝光时间。A. 点击自动曝光按钮。B. 先点击Auto Exp Area （自动测光区域），用鼠标在预览图上选定感光区域（或者点击Reset to Full Frame恢复全图预览），然后点击Calc Auto Exp，就 可以 根据设定的区域自动计算曝光时间。B方式C方式C. 点击Au to Set,此时软件将先自动计算曝光时间，然后提示选取一个区域做自动白 平衡（一般选在图像上最亮白的地方，此部分的详细操作请参考下面的“第12步：自 动白平衡”）。9. 预览时图像覆盖着一层透明膜的效果：在预览图片上点击右键，
8、Transparency选择 OFF可以关闭此功能。10. 预览图像的直方图实时显示：在预览图像上点击右键，选中Live His to gram即可显 示，此功能可以帮助我们判断图像效果，但波峰在直方图中间部分时效果比较好。11. 如果预览图像中有很多红色的条带或比较多的红色点：这是因为我们选中了“饱 和提示Saturation Warning功能，如下图所示，把“饱和提示”功能关闭即可。12. 自动白平衡：在预览图像上右击鼠标，可以选择自动白平衡(Au to Whi te Balance), 或者点击以下菜单上的“Auto White Balance此时可以在预览图像 上选定白色区域， 然后
9、点击Calculate按钮即可实现自动白平衡。(下图中的选项在图像拍摄界面点击 More后即可显示)13. 手动调整曝光时间：当使用了自动曝光以后,可以通过手动调整来更加精确的得 到更好的图像效果。选中“Adjust Exp for Binning后，可以看到曝光时间会自动调整，此时虽然预 览和拍摄曝光时间不同,但是图像效果相同。14. 预览和拍摄图像条件的锁定：很多状况下,预览和拍摄的图像效果不一致,可以 锁定界面中的锁定钮使两种状况一致。包含以下条件的锁定：A. 拍摄区域的锁定：如果要改变区域，点击“SET PVW AREA的按钮，即可看到以下界面 此时，选择Select Area fro
10、m Live Preview即可在图像上划定感兴趣的区域；选择Resetarea to full frame即可重新把感兴趣区域划定为全图。B. 预览和拍摄Binning锁定：如果标本荧光较弱，可以采用Binning模式增强CCD敬 感度。C. 预览和拍摄Gain, Gamma, Offset的锁定D肖以上条件均已锁定，但色彩仍然不一致时，请到： Camera Configuration 一 Active Camera Settings, 在 Color Correction 下面,把 Preview 和 Acquire 都选中或者都不选中。15. 拍摄动态图像：如果需要连续拍摄动态多幅图像，
11、把拍摄界面转化到基本模式，并点击Image, 如下所示：般情况下，拍摄单张图像时，选取New Image，拍摄连续动态图像时，一般选取 Sequence要直接存储在硬盘中，选取F订e“Browse 输入图像名称）。IPP提供两种拍摄动态图像的模式，一种是以最快的速度连续拍摄，另一种是图像有间 隔时间拍摄，A. 需要以最快速度拍摄时，请输入拍摄帧数，并选中Use Minimum possibleInterval”，做了此设定后，在点击拍摄时，就会以最快的速度拍摄一定帧数的图像。B. 需要以一定间隔时间拍摄时，把Use Minimum possible Int erval去掉，然后点击Set Ti
12、me，在弹出的对话框中输入两幅图像的间隔时间，比如：10秒，点击 0K确定。此时，界面如下图所示。在拍摄帧数下就会有两幅图像之间间隔时间的显示。做了如此设定后，再点击拍摄时，就会以10s的时间间隔拍摄一定帧数的图像。警告：当不使用动态拍摄模式时，请务必把I mage选项选中“New Image”，否则，每次点击拍摄，都会得到动态图像。16. CCD 属性对话框的使用 :Camera Configuration：A. 当使用单色CCD时，有时会看到彩色图像，这是因为在相机确认里选择了彩色滤 镜，所以，到Camera Configuration中，把Color Filter的选项去掉即可。B. 制
13、冷型CCD要选择制冷模式，使芯片工作在制冷状态下，所以，到CameraConfiguration 中，选中 Enable Cooling,如下图所示：17. 当以上条件可以满足定的试验要求时，可以保存所有的参数设置，这样，以后做 类似试验时，可以直接调出相关试验条件，从而节省时间，并使试验过程简化。操作：直接点击Save/Save as，然后输入文件名，选择目录保存即可。调出时直接点击标有三个黑点的钮，选择要调出的文件即可。IPP提供了六个试验条件文件调出的快捷方式，如下图所示： 这样调出的文件可以显示在基本模式的简单控制条中，便于试验使用 第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程（明场观察）打
14、开DP-BSW软件启动DP控制器。调节显微镜。（见明场观察部分）显示预览图象。设置曝光时间。手动曝光模式？设置曝光时间自动选择测光区域（30%, 1%, 0. 1%） o 按下手动控制盒自动对焦红色按键，进行自动聚焦。（打开BX2-BSW软件）手动曝光模式？自动移动曝光区域，校正曝光。调节白平衡。记录图象。进入DP管理器。添 加注释或图释。象。 具体的参照图见下页的内容DP-BSW 软件:测光模式(30%/1%/0 曝光模式 预览 拍照1%)校正曝光。调节白平衡。记录图象。进入DP管理器。添加注释或图释。 象。储存图 具体的参照图见下页的内容DP-BSW 软件:0 i 1 -细”- CI k- *wwd测光模式(30%/1%/0. 1%) 曝光模式 预 览 拍照
