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1、2,6-二氯靛酚滴定法测定番茄中维生素C的含量摘 要 自从波兰裔美国科学家卡西米尔冯克在 1912年综合了以往的试验结 果，发表了维生素的理论以来，国内外学者进行了广泛的研究。目前国内测定维 生素c的常见方法有:2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯脱法、荧光法、碘滴 定法、高效液相色谱法1-3等。关键词2,6-二氯靛酚滴定法；番茄；维生素 c；含量1 前言维生素c Vitamin C , Ascorbic Acid 乂叫L-抗坏血酸，是一种水溶性 维生素，是维持机体正常生理功能的重要维生素之一，具有多种重要的生理功能， 广泛参与机体氧化、复原等复杂代谢过程，是蔬菜水果中的一项非常重要的营养
2、 指标。维生素c的主要作用是提高免疫力，预防癌症、心脏病、中风，保护牙齿 和牙龈等。另外，坚持按时服用维生素C还可以使皮肤黑色素沉着减少， 从而减 少黑斑和雀斑，使皮肤白皙。富含维生素c的食物有番茄、花菜、宵辣椒、橙子、 葡萄汁等，可以说，在所有的蔬菜、水果中，维生素 c含量都不少。美国专家认 为，每人每天维生素c的最正确用量应为200300毫克，最低不少丁 60毫克。而 中国营养学会建议的膳食参考摄入量RNI,成年人为100mg/日，可耐受最高 摄入量UL为1000mg/日。市售的蔬果维生素c的含量不近相同，在此特意对 番茄进行维生素c的测定，为人们正确补充维生素和合理饮食提供依据和指导。2
3、实验局部2.1 实验原理维生素c届己糖衍生物，存在复原型与氧化型两种结构形态。复原型维生+素c分子中第二和第三个碳原子上的两个相邻的烯醇式羟基易离解出 H而具酸 性，故乂称抗坏血酸。复原型维生素C在弱酸中稳定， 而在碱中或加热条件下 均易被破坏， 其复原性乂使得极易被氧化剂氧化， 特别在碱性或中性环境中，2 - 或当有微量重金届离子如Fe2、Cu 等存在时，更易被氧化分解。述原 型维生素c氧化后脱氢即转化为氧化型维生素 C,后者加氢仍可复原成复原型维 生素c,故氧化型结构本身仍具有生物学活性。但氧化型结构在碱性及中性环境 中易自发地水化成为2, 3 一二酮古乐糖酸而失去维生素c的生物学活性，且
4、该 步反响不可逆，故当复原型结构在碱性及中性环境中被氧化就会失去生物学活 性。1】测定食品中L一抗坏血酸最实用的方法是基丁 L一抗坏血酸向脱氢抗坏血 酸的可逆氧化。复原型维生素c结构中具有一 C=G-烯醇式邻羟基而显示出复原I IOH OH性，可复原2, 6二氯酚靛酚染料。该染料的钠盐在水溶液中呈兰色，在酸性 溶液中呈红色，被复原后那么红色消失染料 2, 6一二氯靛酚的颜色反响表现在两 个特征，一是取决丁其氧化复原的复原状态， 氧化态为深蓝色，复原态变成无色， 二是受其介质的酸度影响。在碱性溶液中显深蓝色，在酸性介质中显浅色，用浅 蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素c酸性浸出液进行氧化复原滴定
5、，染料被 复原为无色。滴定开始时，染料溶液要迅速参加，直至红色不立即消失接着慢慢 的一滴一滴参加，并且要不断的振动三角烧瓶，直至呈粉红色丁 15秒内不消失 为止。由丁样品中可能有其他杂质也能复原 2, 6一二氯靛酚，但其复原该染料 的速度均较抗坏血酸慢，所以在滴定时以 15秒钟红色不褪为终点。2】当到达滴 定终点时，多余的染料在酸性介质中那么表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原抗坏血酸的含量。天然抗坏血酸有复原型和脱氢型两种， 本法适用丁测定一般 果汁及制品中的复原型抗坏血酸，不包括脱氢型抗坏血酸。2.2 材料与方法2.2.1 实验材料用丁实验的鲜番茄购丁韶关农贸市场，洗净后切片，放到研钵进
6、行研碎； 0.2mg/m1标准抗坏血酸Vc溶液，2,6 一二氯靛酚溶液等来自学校实验室，均 为分析纯。2.2.2 仪器分析天平上海天平仪器厂,100ml和250m 1容量瓶,100m 1烧杯式三角瓶， 微量滴定管，研钵，漏斗，直径12.5mm定性滤纸2.2.3 标准抗坏血酸溶液的标定吸取标准抗坏血酸溶液1ml,参加5ml 2%单酸，以2,6 一二氯靛酸酚溶液滴定至桃红色且 15s内不褪色，即为终点。根据已 知标准抗坏血酸溶液和染料用量，计算出每1ml染料溶液相应的抗坏血酸量mg。2.2.4 样品溶液的准备及测定称取3个鲜番茄，然后各自取4份4.49g样品放入研钵切碎匀浆，加蒸僻水 后用纱布过滤
7、，定容至 25ml 混匀液汁液量。分别编号为 A1 A2 A A B1. C4，接着各自取1ml汁液参加2部酸后进行离心。吸取上活液1ml 丁小 烧杯中，参加9ml草酸后用标定过的2,6 二氯靛酚溶液滴定至桃红色且 15s 内不褪色为止。记下染料用量。2.2.5 操作事项受到损伤的番茄组织维生素c容易受其体内抗坏血酸氧化酶的破坏。因此， 维生素c的测定应采用新鲜样品并且尽快用 2%草酸溶液制成匀浆，以保存番茄 中的维生素c。2.2.6 维c含量计算m。 mVo Vm: ImlVc标液含抗血酸的质量单位mgV。：滴定样品所用染料体积mlV：样品所用染料体积mlm样品中含抗血酸质量单位mg3结果与
8、分析滴定样品所用染料体积：24.8 ml番茄滴点样品均为4.49g,抗坏血酸含量的测定结果如下表。样品编号滴定消耗染料体积mlVc含量mgAi1.35mA1.37m2A1.34m3A1.40m4Bi1.35m5B21.36m6B31.33m7B41.39m8Ci1.37m9C21.34m。C31.35m，C41.34mk通过 m =可计算出，m值，即4.49g番茄中维生素的含量为：25 x mVo V4.49g番茄中维生素 c含量样品维生素c含量mgA0.272250.276250.270250.28225B0.272250.274250.268250.28025C0.276250.27025
9、0.272250.270253个不同番茄的维生素含量方差分析单个样本检验检验值=0差分的95%置信区间tdfSig.双侧均值差值下限上限A104.0353.000.27525000.2668300.2836700B109.5003.000.27375000.2657939.2817061C192.5103.000.27225000.2677493.2767507通过方差分析，此法测定误差可满足一般实验室对含维生素C较高的果汁及其制品中维生隶C抗坏血酸测定的要求。即:0.27225 0.27625 . 0.2702512= 0.27375mg所以：4.49g番茄的维生素c含量为0.27375 m
10、g参考文献1 张应年.沙枣中维生素 C的测定Q.湖北：湖北长江出版集团，19952 李明菊.食物中维生素 C的测定方法研究V.四川：攀枝花学院，20213实验局部3.1 材料与方法3.1.1 实验材料用丁实验的鲜番茄购丁韶关农贸市场，洗净后切片，放到研钵进行研碎； 0.2mg/ml标准抗坏血酸Vc溶液，2,6 一二氯靛酚溶液等来自学校实验室，均 为分析纯。3.1.2 仪器分析天平上海天平仪器厂,100ml和250ml容量瓶,100ml烧杯式三角瓶， 微量滴定管，研钵，漏斗，直径12.5mm定性滤纸2.2.3 标准抗坏血酸溶液的标定吸取标准抗坏血酸溶液1ml,参加5ml 2%单酸，以2,6 一二
11、氯靛酸酚溶液滴定至桃红色且 15s内不褪色，即为终点。根据已 知标准抗坏血酸溶液和染料用量，计算出每1ml染料溶液相应的抗坏血酸量mg。3.1.3 样品溶液的准备及测定称取3个鲜番茄，然后各自取4份4.49g样品放入研钵切碎匀浆，加蒸僻水 后用纱布过滤，定容至 25ml 混匀液汁液量。分别编号为 a A2 A3 A4 B1. C4,接着各自取1ml汁液参加2部酸后进行离心。吸取上活液1ml 丁小 烧杯中，参加9ml草酸后用标定过的2,6 二氯靛酚溶液滴定至桃红色且 15s 内不褪色为止。记下染料用量。3.1.4 操作事项受到损伤的番茄组织维生素c容易受其体内抗坏血酸氧化酶的破坏。因此， 维生素
12、c的测定应采用新鲜样品并且尽快用 2%草酸溶液制成匀浆，以保存番茄 中的维生素c。3.2 维c含量计算mk=mV0 Vm: 1mlVc标液含抗血酸的质量单位mgV0：滴定样品所用染料体积mlV：样品所用染料体积mlm样品中含抗血酸质量单位mg4结果与分析滴定样品所用染料体积：24.8 ml番茄滴点样品均为4.49g,抗坏血酸含量的测定结果如下表:1ml番茄样品中抗坏血酸的含量样叩编勺滴定消耗染料体积mlVc含量(mg)Ai1.35mA21.37m2A1.34m3A1.40Bi1.35m5B21.36m6B31.33mB41.39m8Ci1.37m9C21.34m。C31.35muC41.34m
13、12通过 m =可计算出，m值，即4.49g番茄中维生素的含量为：25 x mVo V4.49g番茄中维生素 c含量样品维生素c含里mgA0.272250.276250.270250.28225B0.272250.274250.268250.28025C0.276250.270250.272250.270253个不同番茄的维生素含量方差分析单个样本检验检验值=0差分的95%置信区间tdfSig.双侧均值差值下限上限A104.0353.000.27525000.2668300.2836700B109.5003.000.27375000.2657939.2817061C192.5103.000.27225000.2677493.2767507通过方差分析，此法测定误差可满足一般实验室对含维生素c较高的果汁及其制品中维生隶C抗坏血酸测定的要求。即：mx0.27225 0.27625 . 0.2702512=0.27375mg所以：4.49g番茄的维生素c含量为0.27375 mg
