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1、标准文件Standard document文件编号Docume nt No.SOP-LOP-790-8/00高效液相色谱仪校验规程Calibration SOP forHPLC页码Page1 / 9状态Status正式Formal备份号Control No.起草人Written by起草日期Written date年 月 日颁发部门Issued department质量管理部Quality department审核人Reviewed by审核日期Reviewed date年 月 日批准人Approved by批准日期Approved date年 月 日生效日期Effective date年 月
2、 日分发部门Distributed department：质量负责人质量管理部QA QC1、目的Objective：建立高效液相色谱仪部校验规程，确保校验工作规、顺利进展。2、围Scope：本规程适用于本公司使用的高效液相色谱仪紫外-可见光检测器/二极管阵 列检测器的校验。3、职责 Responsibilities:3.1培训职责：本文件起草人或审核人或批准人负责对质量管理部全体人员培训。3.2 QC：负责制定本规程，并对本规程的实施负责。3.3 QA：负责监视和检查本规程的实施。4、定义 Definition：无。5、程序 Procedures：5.1 依据国家计量校验规程 JJG 705-
3、2002液相色谱仪，安捷伦液相说明书，岛津液相说明书。5.2 备件及材料5.2.1水： HPLC 级水。5.2.2 化学试剂：乙腈HPLC、丙酮分析纯。5.2.3 咖啡因标准品。5.2.4 咖啡因标样。-考试资料-文件编号Document No.SOP - LOP-790-8/00高效液相色谱仪校验规程Calibration SOP for HPIC页码Page2 / 80.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml 和 0.250 mg/ml 咖啡因水溶液。5.2.5 色谱柱：4.6mmx250mm, C18, 5p
4、m。5.2.6容量瓶： 10ml。5.2.7 玻璃注射器。5.2.8限流阻尼管。5.2.9 分析天平。5.2.10秒表。5.2.11 热电偶5.3 校验工程及技术指标5.3.1 泵性能的测试表1校验项目指标流量设定值(ml/min)0.51.01.52.02.5流量设定值误差，issi5%2%2%2%2%流量稳定性误差，SR 3%2%2%2%2%5.3.2柱温箱温度稳定性测试*表2校验项目指标温度设定值(C)2025303540温度设定值误差T| 2C控温稳定性误差T 1CC备注：如药典专论规定的特定柱温,不在以上温度围之,那么对分析该品种的仪器增加该 温度点校验,校验工程和可承受指标一样。5
5、.3.3 检测器性能测试表3校验项目指标基线噪声：W5x10-4AU文件编号Document No.SOP - LOP-790-8/00高效液相色谱仪校验规程Calibration SOP for HPIC页码Page3 / 8基线漂移：w5x10-3AU/h波长准确度：|入 |w2nm线性测试：相关系数R响应因子f的RSDM0.999W5.0%5.3.4 进样器性能测试表4校验项目指标进样器精细度测试：定性重复性(Rt)RSD定性定性W 1.0%定量重复性(峰面积)RSD 定量W 2.0%自动进样器线性测试*:相关系数R 响应因子f的RSDM0.999W5.0%5.3.5 梯度组成的测试*表
6、5校验项目指标梯度准确度|TSH-MSH|W2%梯度准确度的精细度W0.5%注：*表示该工程的部校验取决于仪器的配置，有该配置那么为必检工程。5.4 校验方法5.4.1 校验通那么5.4.1.1 HPLC 的部校验由仪器所属部门经培训的使用者按本规程进展校验，其校验工程依 仪器配置和使用围而定。541.2政府部门每一年对H PLC进展校验，每六个月部对H PLC进展一次校验；仪器配置 的关键部件大修或更换后，可参考本规程对该部件相关的工程进展校验，以对仪器的性能 进展确认。5.4.1.3 校验时，同时检查、确认仪器的安装，使用环境符合要求，仪器处于正常的状态 下，并检查、确认仪器的接线结实，接
7、地良好。5.4.1.4 不同配置的仪器，须按照规定的校验工程及指标进展部校验，以保证该仪器的所 有使用功能均进展了校验。5.4.2泵性能的测试-S和S的测定SR5.4.2.1 测试条件：流动相：水；文件编号Document No.SOP - LOP-790-8/00高效液相色谱仪校验规程Calibration SOP for HPIC页码Page4 / 8色谱柱：限流阻尼管。5.4.2.2 测试：分别设定流速为 0.5ml/min， 1.0ml/min，1.5ml/min，2.0ml/min，2.5ml/min 等值进展 校验，这些流速覆盖了实验室使用的流速围。待流速稳定后，在流动相流出口处用
8、容量瓶 准确地收集流动相10.0ml, 同时用秒表计时，各测量3次，按公式、(2)计算S和S,SR 并以下表所列容记录测试数据和结果。表 6 泵性能的测试泵流量设定值：流动相体积：次数工程-123收集时间t(秒)流量实测值Fm(ml/min)泵流量设定值误差ss泵流量稳定性误差Sr5.4.3柱温箱温度稳定性测试一AT和Tc的校验5.4.3.1 测试将测温仪之热电偶固定在柱温箱中央，关好柱箱门。以限流阻尼管替代色谱柱，分别 设定柱温箱温度为20C, 25C, 30C, 35C, 40C等值进展校验，这些温度覆盖了实验 室使用的柱温围。待测温仪指示温度稳定后，记录温度显示值，每隔5分钟测一次，每个
9、 温控点测定 1 小时，求出平均值，并以下表所列容记录测试数据和结果。设定值与平均值 之差为设定值误差 T, 13次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。表 7 柱温箱温度稳定性测试温度设定值：次数工程12345678910111213平均值温度实测值C设定值误差AT稳定性误差Tc5.4.4检测器性能测试5.4.4.1 基线漂移和基线噪声的测试5.4.4.1.1 测试条件检测波长：254nm；文件编号Document No.SOP - LOP-790-8/00高效液相色谱仪校验规程Calibration SOP for HPIC页码Page5 / 8流动相：水；流速：1.0ml/mi
10、n；色谱柱：4.6mmx250mm, C18, 5pm。5.4.4.1.2测试按不同的仪器配置,设定检测器的灵敏度为较灵敏值。待系统平衡后,调整基线在图 谱的中部位置,记录基线 30 分钟。以图谱显示的刻度值或灵敏度与积分仪的匹配关系, 计算基线噪声和漂移值。基线噪声为峰峰噪声,选择最大的噪声作为基线噪声。计算方法：基线噪声二图谱单位距离对应的吸光度AUx噪声峰-峰间的垂直距离。漂移值为30分钟噪声的最高值和最低值之间垂直距离L对应的吸光度AU。计算方法：漂移值二图谱单位距离对应的吸光度AUxL/0.5h。5.4.4.2 波长准确度的测试5.4.4.2.1 DAD/PDA 的测试取咖啡因标样2
11、）进样，记录色谱图和200nm 400nm围的紫外吸收图谱，其205nm 处的最大吸收处波长与205nm比较，其273nm处的最大吸收处波长与273nm比较，最小 吸收处的波长与245nm比较，三波长处的差值|入|均应w2nm。5.4.4.2.2UV检测器的测试a具备紫外图谱扫描功能的检测器：以水流过流通池时作一空白扫描，然后，以手动 方式将咖啡因标样2）注入流通池，扫描200nm 300nm围的紫外吸收图谱。记录咖啡因 最大吸收和最小吸收处的波长，其205nm处的最大吸收波长与205nm比较，其273nm处 的最大吸收波长与273nm比较，最小吸收波长与245nm比较，三波长处的差值|入均
12、应 w2nm。b不具备紫外图谱扫描功能的检测器：以水注入流通池调零，然后，将咖啡因标样2） 注入流通池，通过设定不同波长，记录205nm、245nm、273nm三个波长上下各5个nm 围的吸收度A或流通池参比能量R与样品能量S的比值，205nm、273nm波长处各取该 波长围最大的吸收值或比值对应的波长为测定波长；245nm波长处取该波长围最小的吸 收值或比值对应的波长为测定波长。测定波长分别与对应的波长205nm、245nm、273nm 比较，三波长处的差值|入|均应w2nm。5.4.4.2.3 线性测试a测试条件流速：1.5ml/min；流动相：水-乙腈=85：15；检测波长：273nm；
13、色谱柱：4.6mmx250mm, C18, 5pm。文件编号Document No.SOP - LOP-790-8/00高效液相色谱仪校验规程Calibration SOP for HPIC页码Page6 / 8b测试待系统平衡后， 分别取咖啡因标样 1）、2）、3）、4）、5）、6），手动进样器依仪器配置 之定量环的体积进样，记录色谱图。以标样浓度Ci为横坐标，以咖啡因峰面积Ai为纵坐 标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。对各标样浓度的响应因子fi进展数理统计， 按公式3计算其RSD。其中fi =Ci/Ai。5.4.5 进样器性能测试5.4.5.1 定性、定量重复性的测试a测试条件流速：
14、1.5ml/min；流动相：水-乙腈=85：15；检测波长：273nm；色谱柱：4.6mmx250mm, C18, 5pm。b.测试取咖啡因标样5）浓度为0.125mg/ml，自动进样器以5Ml, 10Ml, 20M l的体积各 连续进样 6次；手动进样器依仪器配置之定量环的体积连续进样 6 次，记录色谱图，以咖 啡因峰的保存时间和峰面积，按公式（3）计算相对标准偏差RSD，并以下表所列容记 录测试数据和结果。表 8 定性、定量重复性的测试进样体积次数n123456平均值RSD保存时 间（min）峰面积5.4.5.2 线性测试a测试条件流速：1.5ml/min；流动相：水-乙腈=85：15；检测波长：273nm；色谱柱：4.6mmx250mm, C18, 5pm。b测试取咖啡因标样3）浓度为0.025m
