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3、是是利用DDNA聚聚合酶进进行专一一性的连连锁复制制.目前前常用的的技术,可以将将一段基基因复制制为原来来的一百百亿至一一千亿倍倍。 PCRR的要素素 基基本的PPCR须须具备.要被被复制的的DNAA模板(Teempllatee).界定定复制范范围两端端的引物物(Prrimeers).DNNA聚合合酶(Taqq.PPolyymeaarsee)4.合合成的原原料及水水。PCCR反应应包括三三个主要要步骤，分别是是 1).DDenaaturratiion2).AAnneealiingofpriimerrs,andd3).EExteensiionofpriimerrs。所谓Dennatuurinng
4、乃是是将DNNA加热热变性，将双双股的DDNA加加热后转转为单股股DNAA以做为为复制的的模板.而AAnneealiing则是令令Prrimeers于于一定的的温度下下附着于于模板DDNA两两端。最后在在DNAA聚合酶酶(ee.g.Taaq-ppolyymerrasee)的的作用下下进行引引物的延延长(Exttenssionnoffprrimeers)及另一一股的合合成。PCR的的历史 PPCR的的发展可可以说是是从DNNA合成成酵素的的发现缘缘起。DDNA合合成酵素素最早于于19555年发发现(DNAApoolymmeraaseI),而较较具有实实验价值值及可得得性的 Kleenowwfrr
5、agmmenttoffEE.CColii则是是于700年代的的初期由由Dr.H.Kllenoow所所发现,但由由于这个个酵素是是一种易易被热所所破坏之之酵素,因此此不符合合一连串串的高温温连锁反反应所需需。现今今所使用用的酵素素(简简称TTaqpollymeerasse),则是是于19976年年从热泉泉Hootsspriing中中的细菌菌(ThhermmusAquuatiicuss)分分离出来来的。它的特特性就在在于能耐耐高温，是一个个很理想想的酵素素，但它它被广泛泛运用则则于800年代之之后。PPCR的的原始雏雏形概念念是类似似基因修修复复制制(DDNAreppairrreepliicatt
6、ionn)，它它是于119711年由Dr.KjjelllKllepppe提提出。他他发表第第一个单单纯且短短暂性基基因复制制(类类似PCCR前两两个周期期反应)的实实验。而现今今所发展展出来的的PCRR则于119833由DDr.KarryBB.MMulllis发发展出的的，Drr.MMulllis当当年服务务于一家家物科技技研究公公司(Perrkinn- EElmeerCCetuusCCorpporaatioon).目前前这家公公司在PPCR的的相关仪仪器及原原料上占占有很大大的巿场场。Drr.Muulliis并并于19985年年与SSaikki等等人正式式表了第第一篇相相关的论论文。此此后，
7、PPCR的的运用一一日千里里，相关关的论文文发表质质量可以以说是令令众多其其它研究究方法难难望其项项背。在在19989年，SScieencee将PPCR中中的DNNA合成成酵素命命名为当当年的风风云分子子(MMoleeculleoofttheyeaar)，而PCCR本身身则列为为年度的的重要科科学发明明产物。当然，它的原原发明者者更在往往后获得得诺贝尔尔的桂冠冠。 影响PPCR的的因素 PPCR是是非常直直接、简简单又具具有强大大威力的的技术。诚如一一位当年年参与PPCR诞诞生的资资深研究究员HeenryyErrlicch所言言”在分分子生物物学的领领域中，只要拥拥有它，你便可可以无照照营业”
8、 (PPCRalllowsspeeopllettoppraccticcemmoleecullarbioologgywwithhouttalisscennce)。也因因此，活活用及慎慎用PCCR是确确保一定定品质的的必要条条件。PPCR本本身虽然然是一个个单纯的的实验技技术，但但是一个个好的PPCR反反应及其其产物则则是受到到很多因因素的影影响。这这些因素素色括反反应中各各种原料料的浓度度(TTaq.Poolymmeraase,prrimeers,dNNTPss,MMgCll2)，也包包括整个个反应中中各步骤骤的温度度与时间间的设定定。当然然DNAA模板(Temmplaate)与引信(Prrim
9、eers)本身身条件也也占有一一定的重重要性。近来的的观念中中，共溶溶剂诸如如Diimetthyllsuulfooxidde(DSMMO)、glyycerrol、 FoorammideeanndTTetrrameethyylammmonniummchhlorridee(TTMACC)也也对整个个反应产产生若干干重要的的影响。 PPCR的的运用 PPCR除除了是一一个诊断断工具外外，更重重要的是是它有广广泛的运运用。PPCR本本身可直直接用来来鉴定特特定基因因的存在在与否，也可以以用来侦侦测基因因是否有有异常(Geenemuttatiion,deelettionn,aandreaarraange
10、emennt)。例如如，在医医学上对对遗传疾疾病或肿肿瘤癌症症的诊断断及预后后的评估估；对对细菌、病毒及及霉菌感感染的诊诊断。它它也可成成为一个个生产线线进而大大量复制制特定的的基因进进行基因因密码的的读取(DNNAssequuenccingg)及及其它的的运用。举凡对对生物标标本及法法医学上上的样本本鉴定，从单一一毛发、一只精精虫或一一滴血液液、唾液液来找出出凶手。也可可以做DDNA指指纹(Finngerrpriintss)比比对帮助助亲子关关系的鉴鉴定。PPCR更更可以用用于器官官移植组组织兼容容性HLLA的分分析。另另外在演演化上的的分析，经由PPCR的的运用也也产生重重大的进进展。近近
11、来，在在生物医医学的研研究上，特别是是细胞间间讯息的的传递分分子，诸诸如介白白质(Intterlleukkinees)及各种种生长因因子(Groowthhfaactoors)基因因的表现现都可用用 PCCR来进进行质与与量的分分析。 PCRR污染及及解决对对策PCCR检测测微量感感染因子子时，一一定要注注意产物物残留污污染的问问题。 一污染染的预防防 进行行PCRR操作时时，操作作人员应应该严格格遵守一一些操作作规程，最大程程度地降降低可能能出现的的PCRR污染或或杜绝污污染的出出现。 （一）划分操操作区：目前，普通PPCR尚尚不能做做到单人人单管，实现完完全闭管管操作，但无论论是否能能够达到
12、到单人单单管，均均要求实实验操作作在三个个不同的的区域内内进行，PCRR的前处处理和后后处理要要在不同同的隔离离区内进进行： 1.标本处处理区，包括扩扩增摸板板的制备备； 22.PPCR扩扩增区，包括反反应液的的配制和和PCRR扩增； 3.产物物分析区区，凝胶胶电泳分分析，产产物拍照照及重组组克隆的的制备。 各工工作区要要有一定定的隔离离，操作作器材专专用，要要有一定定的方向向性。如如：标本本制备PCRR扩增产物分分析产产物处理理。 切切记：产产物分析析区的产产物及器器材不要要拿到其其他两个个工作区区。（二）分分装试剂剂：PCCR扩增增所需要要的试剂剂均应在在装有紫紫外灯的的超净工工作台或或负
13、压工工作台配配制和分分装。所所有的加加样器和和吸头需固固定放于于其中，不能用用来吸取取扩增后后的DNNA和其其他来源源的DNNA： 1PCRR用水应应为高压压的双蒸蒸水； 2引物和和dNTTP用高高压的双双蒸水在在无PCCR扩增增产物区区配制； 3引物物和dNNTP应应分装储储存，分分装时应应标明时时间，以以备发生生污染时时查找原原因。 (三)实验验操作注注意事项项尽尽管扩增增序列的的残留污污染大部部分是假假阳性反反应的原原因，样样品间的的交叉污污染也是是原因之之一。因因此，不不仅要在在进行扩扩增反应应是谨慎慎认真，在样品品的收集集、抽提提和扩增增的所有有环节都都应该注注意： 1.戴一次次性手
14、套套，若不不小心溅溅上反应应液，立立即更换换手套； 2.使用用一次性性吸头，严严禁与PPCR 产物分分析室的的吸头混混用，吸吸头不要要长时间间暴露于于空气中中，避免免气溶胶胶的污染染； 33.避避免反应应液飞溅溅，打开开反应管管时为避避免此种种情况，开盖前前稍离心心收集液液体于管管底。若若不小心心溅到手手套或桌桌面上，应立刻刻更换手手套并用用稀酸擦擦拭桌面面； 44.操操作多份份样品时时，制备备反应混混合液，先将ddNTPP、缓冲冲液、引引物和酶酶混合好好，然后后分装，这样即即可以减减少操作作，避免免污染，又可以以增加反反应的精精确度； 5.最后后加入反反应模板板，加入入后盖紧紧反应管管； 6.操作作时设立立阴阳性性对照和和空白对对照，即即可验证证PCRR反应的的可靠性性，又可可以协助助判断扩扩增系统统的可信信性； 7.尽可能能用可替替换或可可高压处处理的加加样器，由于加加样器最最容易受受产物气气溶胶或或标本DDNA的的污染，最好使使用可替替换或高高压处理理的加样样器。如如没有这这种特殊殊的加样样器，至至少PCCR操作作过程中中加样器器应该专专用，不不能交叉叉
