基因关键工程原理试题

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1、基因工程原理练习题及其答案一、填空题1. 基因工程是70年代发展起来日勺遗传学日勺一种分支学科。2. 基因工程勺两个基本特点是：（1）分子水平上勺操作，（2）细胞水平上勺体 现3. 基因克隆中三个基本要点是：克隆基因勺类型；受体勺选择；载体勺选择4. 通过比较用不同组合勺限制性内切核酸酶解决某一特定基因区域所得到勺不 同大小 勺片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点互相位置勺限 制性酶切图谱。5. 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合勺原则命名勺，第一种大写字母 取自属名勺第一种字母，第二、三两个字母取自种名勺前两个字母，第四个字 母则用株名表达。6. 部分酶切可采用勺措施有：（1）减

2、少酶量；（2）缩短反映时间；（3）增大反映体积7. 第一种分离勺限制性内切核酸酶是EcoK；而第一种用于构建重组体勺限制性 内切核酸酶是 EcoRl。8. 限制性内切核酸酶BsuRI和Haelll勺来源不同，但辨认勺序列都是GGCC 它们属于异源同工酶9. DNA聚合酶I勺Klenow大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得 到勺分子量为76kDa勺大片段，具有两种酶活性：（1）5-3合成酶勺活性；（2） 3-5外切核酸酶勺活性。10.为了避免DNA勺自身环化，可用碱性磷酸酶去双链DNA_5端勺磷酸基 团。11. EGTA是工2+_离子螯合剂。12. 测序酶是修饰了勺T7 DNA聚合酶，它

3、只有 5-3合成酶勺活性，而没有3-5 外切酶勺活性。13. 切口移位（nick translation）法标记DNA日勺基本原理在于运用DNA聚合酶I 日勺5 3外切核酸酶和5 3合成酶勺作用。14. 欲将某一具有突出单链末端勺双链DNA分子转变成平末端勺双链形式，一般可采用 S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平。15. 反转录酶除了催化DNA勺合成外，还具有_核酸水解酶H勺作用，可以将 DNA-RNA杂种双链中勺 RNA 水解掉。16. 基因工程中有3种重要类型勺载体：质粒DNA，病毒DNA，质粒和病毒 DNA杂合体。17. 就克隆一种基因（DNA片段）来说，最简朴勺质粒载体也必需涉及三个部分

4、： _复制区： 具有复制起点；选择标记：重要是抗性基因；克隆位点：便于 外源DNA勺插入。此外，一种抱负勺质粒载体必须具有低分子量。18. 一种带有质粒勺细菌在有EB勺培养液中培养一段时间后，一部分细胞中 巳测，质粒消除（或治愈）。19. pBR322是一种改造型勺质粒，它勺复制子来不出质粒，这种现象叫源于pMBl，它勺四环素抗性基 因来自于pSCl01 它勺氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124（R质粒）。20 . YAC勺最大容载能力是1000kb，BAC载体勺最大容载能力是 300kb21. pSCl01是一种一严紧 复制勺质粒。22. pUCl8质粒是目前使用较为广泛勺载体。pUC系列

5、勺载体是通过pBR322和 M13两种质粒改造而来。它勺复制子来自 pMBl，Amp 抗性基因则是来自 转座子。23. 噬菌体之因此被选为基因工程载体，重要有两方面勺因素：一是它在细菌中 可以大量繁殖，这样有助于外源DNA勺扩增；二是对某些噬菌体（如噬菌）勺 遗传构造和功能研究得比较清晰，其大肠杆菌宿主系统日勺遗传也研究得比较详 尽。24. 野生型勺M13不适合用作基因工程载体，重要因素是没有合适勺限制性内 切核酸酶辨认位点和选择标记。25. 黏粒（cosmid）是质粒一噬菌体杂合载体，它勺复制子来自质粒、COS位点序列来自入噬菌体，最大勺克隆片段达到45巡。26. 野生型勺入噬菌体DNA不适

6、宜作为基因工程载体，因素是：（1）分子量大，（2）酶勺多切点，（3）无选择标记27. 噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成勺，其中来自质粒勺重要构造是复制区，而来自噬菌体勺重要构造是 IG区28. 入噬菌体载体由于受到包装勺限制，插入外源DNA片段后，总勺长度应在 噬菌体基因组勺75%105% 勺范畴内。29. 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目勺 是螯合Mg2+离子，克制核酸酶勺活性30. 用乙醇沉淀DNA时，一般要在DNA溶液中加人单价勺阳离子，如NaCl 和NaAc，其目勺是中和DNA分子勺负电荷，增长DNA分子间勺凝聚力31. 引物在基因工程中至少有4个方

7、面勺用途：（1）合成探针；（2）合成cDNA；用于PCR反映；（4）进行序列分析32. Clark发现用Taq DNA聚合酶得到勺PCR反映产物不是平末端，而是有一 种突出碱基末端勺双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物勺T一载 体。33. 在cDNA勺合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 第二链合成时形成 勺发夹环34. 乙醇沉淀DNA勺原理是乙醇使DNA分子脱水35. 假定克隆一种编码某种蛋白质日勺基因，必须考虑其体现日勺三个基本条件：（1）保持对日勺日勺可读框（2）可以使其转录日勺启动子（3）具有翻译日勺起始和终结信号36. 受体细胞勺感受态是接受外源DNA勺生理状态。37.

8、 DNA重组连接勺措施大体分为四种：（1）黏性末端连接；（2）平末端连接;（3）同聚物接尾连接；（4）接头连接法。38. 将具有外源基因组一种酶切片段勺质粒称之为具有一种基因组DNA克隆 _,多种此类质粒勺集合体称之为构建了一种基因组DNA文库。39. 将具有一种mRNA勺DNA拷贝勺克隆称作一种cDNA克隆，源于同一批 RNA制备物勺克隆群则构建了一种cDNA文库。40. 只要懂得基因组中某一特定区域勺部分核苷酸构成，用聚合酶链式反映 （PCR）可以将这段DNA进行百万倍勺扩增。41. 人工感受态勺大肠杆菌细胞在温度为冬时吸附DNA, 4空时摄人DNA。42. 目前，在重组体勺筛选中，已经发

9、展了许多构思巧妙、具有极高精确性勺筛 选措施。大体可以分为：遗传学措施；（2）物理筛选法；（3）核酸杂交法；（4）体现产 物分析法等。43. PCR扩增筛选重组体是比较简便勺筛选措施，它适合于_插入外源片段勺种 类较多，大小又极为相似勺重组体勺筛选。44. 核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又 分为基因组DNA探针和cDNA探针。45. 如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5突出勺黏性末端，则可以用_ Klenow酶弥补勺措施进行3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生勺是3突出勺黏性末端，可以用_T4DNA聚合酶进行3末端标记。46. 单链DNA探针

10、勺标记可以采用下列措施：（1）用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；（2）从mRNA反转录合成单链cDNA探针；（3）用不对称PCR 合成单链DNA探针。47. 根据Northern杂交日勺成果可以阐明：外源基因与否进行了转录_。48 .差示杂交(differential hybridization)技术需要两种不同勺细胞群体可以体现不同勺基因，即在一种群体中可以体现某些基因，而在另一种细胞群体中 不能体现这些基因49. RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射DNA探针杂交勺技术称Northern印迹_。50. 在Southern印迹_技术中，

11、DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到 硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性勺DNA探针杂交。51. 可用T4 DNA聚合酶进行平末端勺DNA标记，由于这种酶具有_53合 成酶_和_3 5外切核酸酶勺活性。52. 根据外源片段提供勺遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)克隆勺是完整勺基因；(2)使用勺是体现载体；(3)不含内含子53. Northern印迹和Southern印迹有两点主线勺区别：(1)印迹勺对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA； (2)电泳条件不同， 前者是变性条件，后者是非变性条件。54. 放射免疫筛选勺原理基于如下三点：(1)抗体可以被

12、吸附到固体支持物上；同一种抗原可以同几种抗体结合；(3)抗体可以被标记二、选择题(单选或多选)1. 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖勺科学家是()(a)A. Kornberg (b)W. Gilbert (c)P. Berg (d)B. McClintock2. 第一种作为重组DNA载体勺质粒是()(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83. 有关宿主控制勺限制修饰现象勺本质，下列描述中只有()不太恰当。(a) 由作用于同一 DNA序列勺两种酶构成(b) 这一系统中勺核酸酶都是II类限制性内切核酸酶(c) 这一系统中日勺修饰酶重要是通过甲基化作用对DNA进行

13、修饰(d) 不同勺宿主系统具有不同勺限制-修饰系统4.II型限制性内切核酸酶：()(a) 有内切核酸酶和甲基化酶活性且常常辨认回文序列(b) 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由此外一种酶提供(c) 限制性辨认非甲基化勺核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e) 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由此外一种酶提供5. 下面有关限制酶勺论述哪些是对勺勺?()(a) 限制酶是外切酶而不是内切酶(b) 限制酶在特异序列(辨认位点)对DNA进行切割(c) 同一种限制酶切割DNA时留下勺末端序列总是相似勺(d) 某些限制酶在辨认位点内稍有不同勺点切割双链。政，产生黏末端(e) 某些限制酶在辨认位点内相

14、似勺位置切割双链。,产生平末端6. 第一种被分离勺II类酶是：()(a)EcoK(b)Hindlll(c)Hindll (d)EcoB7. 在下列进行DNA部分酶切勺条件中，控制那一项最佳?()反映时间0)酶量反映体积(d)酶反映勺温度8. 在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?()(a)EDTA(b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA9. 在下列工具酶中，那一种可以被EGTA克制活性?()(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶10. 限制性内切核酸酶可以特异性地辨认：()(a)双链DNA勺特定碱基对0)双链DNA勺特定碱基序列(c)特定勺三联密码(

15、d)以上都对勺11. 下列有关限制性内切核酸酶勺表达措施中，对勺一项勺是()。(a)Sau3A I (b)E. coRI (c)hind III (d)Sau 3A112. 限制性内切核酸酶日勺星号活性是指：()(b)活性大大提(a) 在非常规条件下，辨认和切割序列发生变化的活性。高(c)切割速度大大加快(d)辨认序列与本来勺完全不同13. 下面哪一种不是产生星号活性勺重要因素?()(a) 甘油含量过高(切反映体系中具有有机溶剂(c)具有非MgZ+勺二价阳离子(d)酶切反映时酶浓度过低14. 有关宿主控制勺限制修饰现象勺本质，下列描述中只有()不太恰当(a) 由作用于同一 DNA序列勺两种酶构成(b) 这一系统中勺核酸酶都是II类限制性内切核酸酶(c) 这一系统中勺修饰酶重要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d )不同勺宿主系统具有不同勺限制-修饰系统15. 在长模板链勺指引下引物延伸合成长勺DNA互补链时应选用()(a)T4DNA 聚合酶 (b)Klenow 酶.(c)大肠杆菌DNA聚合酶I(d)T7DNA聚合酶16. 末端