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1、常用缓冲液及培养基配方LB 液体培养基10g5g10gBacto-蛋白胨酵母抽提物 氯化钠加 950ml 蒸馏水溶解，用 5N 氢氧化钠调 pH 至 7.0，定容至 1000ml ，高压灭菌后保存。 LB 固体培养基 ：每升 LB 液体培养基中加入 12g 琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB 液体培养基20g5g0.5gBacto-蛋白胨酵母抽提物NaCl加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCI溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0,定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl 2。SOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为
2、20mmol/L。麦康凯固体培养基每 1000ml 水中加 52g 培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。NA 固体培养基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨5g蔗糖10g琼脂粉15g加950ml蒸馏水溶解，调 pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。TB 培养基 ：将下列组分溶解在 0.9L 水中：Bacto-蛋白胨12g酵母抽提物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60 C,再加 100ml灭菌的 170mmol/L KH 2PO4/0.72 mol/L K 2HPO4 的溶液。高压灭菌或用0.22um 的滤膜过滤除菌。溶液I葡萄糖 2.25 g50mmol/L1mol/L Tr
3、is CI(pH8.0)6.25ml20mmol/L0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。溶液n10 mol/L NaOH2ml10% SDS10ml用水定容至100 ml，现配现用。溶液川5 mol/L 醋酸钾60ml11.5ml28.5ml冰醋酸水高压灭菌后保存。高盐 TE 缓冲液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl 于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB 抽提液2%（w/v）CTAB（ 古立烷基三乙基溴化铵 ）100mmo
4、l/L Tris.Cl,pH 8.0 *1.4mol/L NaCl 于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB/NaCl 溶液 （10% CTAB/0.7mol/L NaCl ）在 80ml H 2O 中溶解 4.1g NaCl, 缓慢加入 10 一 CTAB （十六烷基三乙基溴化铵） ，同时加 热并搅拌。如果需要，可加热至65C溶解。定容终体积至100ml.CTAB 沉淀液1%（w/v ） CTAB50mmol/L Tris.Cl, pH 8.010mmol/L EDTA, pH8.0PBS 缓冲液：十二水磷酸氢二钠15g磷酸二氢钾1g氯化钠40g氯化钾1g定容至 5000ml, 调 pH 至
5、 7.2。ELISA 包被液 ：碳酸钠1.59g碳酸氢钠2.93g定容至 1000ml ，调 pH 至 9.6。ELISA 洗涤液（0.01M PBST）:5000ml PBS 中加 2.5ml 吐温 -20显色液（底物溶液 -邻苯二胺溶液） :pH5.0 磷酸盐-柠檬酸缓冲液: 0.1 M 柠檬酸（ 19.2 g/L） 24.3 ml、0.2 M Na2HPO4 （28.4g/L） 25.7 ml、临用时取上述溶液10 ml,加邻苯二胺（OPD） 4 mg，溶解后加入30 % H2O2 15终止液 : 2 M H 2SO4TE 缓冲液 (pH8.0):10mmol/L1mmol/LTris
6、HCI(pH8.0)EDTA(pH8.0)高压灭菌。10% SDS :10g十二烷基硫酸钠溶于 90ml水中，加热至68C溶解，加几滴浓盐酸调pH至7.2，定容至100ml，过滤除菌。50 X TAE缓冲液Tris242 g57.1 ml100 ml54g27.5ml20ml冰醋酸0.5 mol/L EDTA(pH8.0) 用水定容至 1000 ml ，用时稀释 50倍。5X TBE 缓冲液 ：Tris 碱 * 硼酸 0.5mol/L EDTA(pH8.0)加水定容至1000ml , 0.5X使用。6X DNA 上样缓冲液 ：0.25%溴酚蓝*0.25%二甲苯青 FF*30%甘油甲醛凝胶加样缓
7、冲液 (DEPC 处理水配制 )：50%甘油1mmol/L EDTA(pH8.0)0.25 溴酚蓝 *0.25 二甲苯青 FF*适量溴化乙锭 *20X SSC：氯化钠175.3g柠檬酸钠88.2g蒸馏水900ml溶解后用5N氢氧化钠调pH至7.0,定容至1000ml，高压灭菌保存。预杂交液 ：6X SSC5 X Denhardt 试剂0.5% SDS100ug/ml 经变性并断裂成片段的鲑精 DNA5X甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/L MOPS(pH7.0)*40mmol/L 乙酸钠5mmol/L EDTA(pH8.0)*甲醛变性凝胶配方 ：加入0.7 g琼脂糖到49.7 ml DEPC-
8、H2O中，用煮沸法溶解琼脂糖，待溶液冷却至55C同时加入 7 ml 10 XMOPS(0.2 mol/L MOPS pH7.0, 20 m mol/L 乙酸钠， 10 m mol/L EDTA pH8.0)电泳缓冲液和13.3 ml甲醛，摇匀，制板待用。0.5 mol/L 磷酸缓冲液( PH 7.2)134 g Na2HPO4, 4 ml 85% H3PO4, 用水定容至 1L。探针标记中的逆转录终止液 1 X TEN40 m mol/L Tris-Cl (PH 7.5),1 m mol/L EDTA (PH 8.0),150 m mol/L NaCl 。洗膜液 I 2X SSC,0.1 %(
9、 mN ) SDS洗膜液 H 0.1 X SSC,0.1%( m/V) SDSSDS-PAGE电泳分析所用的试剂：30%丙烯酰胺：29g丙烯酰胺和1g N , N 亚甲基双丙烯酰胺，加入 60ml ddH2O，完 全溶解后定容至100ml，过滤，置棕色瓶中备用。Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris 3.00g，甘氨酸14.4g，SDS 1g，调pH至8.3，用水定容至1L。12% 分离胶：ddH2O 3.3ml，30%丙烯酰胺 4ml，Tris-HCl（ pH8.8）2.5ml，10%SDS 0.1ml， 10%过硫酸铵 0.1ml，TEMED 0.006ml。5% 浓缩胶：ddH2O 1.4
10、ml，30%丙烯酰胺 0.33ml，Tris-HCl （ pH6.6）0.25ml， 10%SDS0.02ml，10%过硫酸铵 0.02ml，TEMED 0.002ml。考马斯亮蓝染色液：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O 450ml，考马斯亮蓝R-250 2.5g。 脱色液（1L）： 乙醇 450ml，冰醋酸 100ml，ddH2O 450ml。DTT )，2X上样缓冲液：100mmol/L Tris-HCl （ pH6.8 ），200mmol/L 二硫苏糖醇 4% SDS，0.2%溴酚蓝，20%甘油。蛋白纯化所需的缓冲液：Buffer B(pH 8.0) : 8M urea、Bu
11、ffer C(pH 6.3) : 8M urea、Buffer D(pH 5.9) : 8M urea、Buffer E(pH 4.5) : 8M urea、 电洗脱缓冲液：SDSTris-Base甘氨酸定容至1000ml蛋白提取缓冲液：Tris-HCl，pH6.8SDS100 mM NaH 2PO4、100 mM NaH 2PO4、100 mM NaH 2PO4、100 mM NaH 2PO4、10mM Tris-Cl10mM Tris-Cl10mM Tris-Cl10mM Tris-Cl0.1-0.5g3g18.8g50mmol/L4.5%-疏基乙醇7.5%尿素9mol/L电转移缓冲液：T
12、ris-Base 3.00g，甘氨酸 14.4g，SDS 1g，甲醇 200ml，调 pH至8.3，用水定容至 1L。 Western blot所用试剂：1 XPBS（pH7.4） ： NaCl 8 g，KCl 0.2 g，KH2PO4 0.24 g，Na2HPO4 1.44g，用蒸馏水溶解 至1 L1 XPBST : 5L 1 采BS 中加入 2.5ml Tween-20 封闭液：100ml PBS缓冲液中加入5克脱脂奶粉植物基本培养基溶液大量元素 （1L ）七水硫酸镁370mg磷酸二氢钾170mg硝酸钾1900mg硝酸氨1650mg二水氯化钙440mg微量元素 （1L）硼酸6.2mg一水硫
13、酸锰15.6mg七水硫酸锌8.6mg二水钼酸钠0.25mg五水硫酸铜0.025mg六水氯化钴0.025mg碘化钾0.83mg七水硫酸亚铁27.8mg乙二铵二乙酸二钠37.3mg有机 (1L)盐酸硫胺素0.5mg盐酸吡哆辛0.5mg烟酸0.05mg肌醇100mgMSs 培养基10X大量100ml100 X微量10ml100 X铁盐10ml500X B5 有机2ml6-BA1mg蔗糖30g琼脂0.8%调 PH5.8 并加水定容至 1LMsr (1L)10 X大量兀素100ml100 X微量兀素10ml100X Fe 盐10ml500X B5 有机2ml蔗糖3g葡萄糖7g琼脂0.8%PH5.8 加水
14、定容至 1L水稻转化用培养基培养基成分NB（基本培养基）（刘巧泉等,1998）Nbi（愈伤诱导和继代培养基）咼渗培养基NBs（筛选培养基）MS（再生培养基）NBr（再生培养基）1/2MS（生根培养基）N6大量元素营养液、EDTA-Fe营养液、B5微量元素营养液、B5维生素营养液NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L 蔗糖、2mg/L 2,4-D、2.6g/L 植物胶，pH5.8Nbi、47g/L 山梨醇、47g/L 甘露醇，pH5.8NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L 蔗糖、2mg/L 2,4-D、40mg/L Hyg（第二次筛选用量为 50mg/L）、 2.6g/L 植物胶，pH5.8MS大量元素营养液、EDTA-Fe营养液、MS微量元素营养液、B5维生素营养液、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、 2.0mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA、30mg/L Hyg、3.0g/L 植物胶，pH5.8NB、2g/L 水解酪蛋白、30g/L 蔗糖、30g/L 山梨醇
