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1、编号：04435鸡冠花黄酮化合物对DM小鼠脾脏及巨噬细胞吞噬功能的影响*郭晓玲1李万里彳尉辉杰1张霞1李喜龙1新乡医学院基础医学院2002级临床医学专业（新乡医学院， 453003） $新乡医学院微生物与免疫教研室（新乡，453003） 摘要目的探讨鸡冠花黄酮类化合物对糖尿病动物模型（DM） 小鼠脾脏及巨噬细胞吞噬功能的影响. 方法 选取小鼠27只，随 机分为3组：（1）正常对照（Control）组；（2）糖尿病模型（DM） 组；（3）糖尿病+鸡冠花黄酮化合物预防（CCF）组。DM组与CCF组 腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ） 65mg/kg,制成糖尿病模型小 鼠，对照组仅注射等量枸橼酸缓冲
2、液。CCF组用鸡冠花黄酮类化 合物（100mgkg -1d-1）灌胃，Control组和DM组仅给予等量 自来水灌胃。实验10周，分离小鼠脾脏并测脾重，计算脾重指数。 做单核巨噬细胞外吞噬实验，测吞噬百分数，吞噬指数。 结果： CCF组与DM组相比，体重升高，而脾重指数显著降低（P0.05）, 单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数有所降低 （P0.05），而且各项指标与Control组接近（无显著性差异）。 结论：补充鸡冠花黄酮类化合物可调节糖尿病动物巨噬细胞吞噬 的作用，可能有利于减少巨噬细胞激活所引起的免疫病理损伤，可用于糖尿病的预防。关键词 鸡冠花黄酮吞噬指数 糖尿病*新乡医学院大学
3、生科研重点立项课题（2004）作者：郭晓玲（1983 ）女，河南安阳人，系新乡医学院基础 医学院临床医学专业02级学生；李万里（1956 ）男，医学硕 士，教授，主要从事糖尿病的发病机理与临床研究Effects of Celosia Cristata Flavonoid on the Spleen and the Function of Macrophage Ph agocytosing in DM Mice Guo Xiaolingi Li Wanli2 Wei Huijie1 Zhang Xia1 Li Xilong i1 Department of 2002, the school of
4、 Basic Medical science,XinXiang Medicalcollege 2 Department of Microbiology and Immuniology，XinXiang Medical College ( XinXiang ,453003)ABSTRACT Objective To study effect of theab s t ra c t ion of t h e c e lo sia c ri s t a t a flavonoi d on t h e s pl e e n andthefunctionof macrophagephagocytosin
5、ginDMmice. MethodsChoose36miceanddivideinto3groupsatrandom: (1)thenormalgroup(control);(2)thediabetemodelgroup (DM );(3) diabete + the celosia cristata flavonid group (CCF).Injectthestreptozotocin(STZ)65mg/kgwithmetred doseinceliaccavityinDMgroupandonlythesamequantity ofcaitratebufferincontrolgroup.
6、TheCCFgrouparegiven celosia cris tata flavonoid of 100mgkg -1 d-1 ,the DM froupandtheControlgroupareonlygiventhesamequantity ofwater.Threegroupsarefeededwithnormalfoodandwater. After 10 weeks , measure the spleen weight and the index of the spleen weight。 The experiment of macrophage phogocytosing m
7、easures the rate and the index. Results Compared with the DM group, the weight increases and the indexofspleenweightdecreasesapparently(P0.05), the rate and the index of macrophage phagocytosing RBC decreases(P0.05); and all these items were close to the control group.Conclusion The celosia cristata
8、 flavonoid can adjust the function of macrophage of the diabete animals, may be good for reducing the immunity pathology damage caused by the active macrophage and prevent from diabete.Key words Celosia Cristata Flavonoid The index of spleen Diabete.鸡冠花是苋科青葙属天然植物, 富含蛋白质、不饱和脂肪 酸、0-胡萝卜素、VB1、VB2、VC及多种矿
9、物质和黄酮类化合物, 并具有止血、降血脂等药理功能和抗疲劳等保健功能1。本研 究探讨鸡冠花黄酮类化合物对糖尿病（DM）小鼠脾脏及巨噬细胞 吞噬功能的影响。1 材料与方法11 材料 本学院实验动物中心提供的健康昆明小鼠27只，雌 性，体重19土lg, 1月龄。本学院实验动物中心提供正常动物饲 料。本室于10月中下旬采收普通鸡冠花的花序,除去种子和茎梗，烘干后粉碎备用。取粉碎研细后的花序用乙醚回流抽提7h, 除脂。脱脂后的样品再用95%乙醇于65C水浴上提取6h,得乙醇提 取液，蒸发干燥得粉剂2，溶解后再过滤除菌。美国Sigma公司出 产的链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ, C3H
10、15N307），其它试 剂为国产分析纯。尿糖测定仪SUPER GLUCOCARDII（日本第一科 学株式会社）1.2 动物分组及模型制备 昆明小鼠随机分为3组, 每组枸橼酸 缓冲液9只：（1）正常对照组（control）； （2）糖尿病（DM）组； （3）糖尿病+鸡冠花黄酮提取物预防（CCF）组。DM组和CCF组腹腔 单剂量注射链脲佐菌素（STZ） 65mg kg -1, con trol组小鼠注 射等量的枸橼酸缓冲液。在48-72h后DM组和CCF组小鼠全血血糖 浓度均M16.7mmol/L （尾静脉采血测血糖浓度）,制成糖尿病模 型小鼠3。13方法1. 3. 1小鼠体重、脾重、脾重指数CC
11、F组用鸡冠花黄酮类化 合物（100mgkg -1d-1）灌胃，control组和DM组仅给予等量 自来水灌胃。各组给予正常饲料（由本院动物试验中心提供）,自 由饮水。实验第10周3，5，测小鼠体重，分离小鼠测脾重，并计 算脾重指数。1.3. 2单核巨噬细胞体外吞噬实验 实验10w,各组动物腹腔 注射 8%淀粉肉汤液体 1ml 致敏, 4d 后，腹腔注射 10ml Hanks 液,10 min 后抽取腹腔液 5ml, 离心沉淀，取上清液用硫代巴比 妥酸比色法检测MDA含量，取试管下部的腹腔细胞做单核巨噬细 胞体外吞噬实验, 将腹腔细胞滴加在洁净的载玻片上， 用等量 的 1%鸡红细胞悬液滴加其上摇
12、匀。置于玻璃平皿内盖好，并用 胶带密封，于37C水浴30min,其间轻摇玻璃皿2次，取出载玻 片，生理盐水漂洗、固定、染色，观察60个巨噬细胞（N），计 数已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数（n）和所吞噬的鸡红细胞总数 （m）。按下式计算吞噬百分率（a）： a = n/N X 100%，及吞 噬指数（ k） : k=m/n。1.4统计学方法：用SPSS11.0软件进行统计学分析，组间进行t 检验。2 结果2.1小鼠体重、脾重、脾重指数DM组体重低于Con trol组 （P0.05），但脾重指数显著高于Control组（P0.01），CCF 组与DM组相比体重增加（P0.01），脾重指数显著降低（P0.
13、05）， CCF组与Con trol组比较各项指标无显著差异，单纯比较脾重各组 间无显著差异，见表1 。表1动物体重、脾重、脾重指数（X S）Tab1thebodyweight,spleenweightandindexofspleenof the miceGroup体重（g）脾重（mg）脾重指数（mg/g）Control 组35.44 土2.07 a202.67 土 21.25 6.742 0.735bDM组32.67 土 1.87213.56 土25.90 7.825 土1.077CCF组 35.78 土1.56 b195.78 土31.06 6.439 土1.239与DM比：aP0.05
14、; b P0.012.2单核巨噬细胞体外吞噬鸡红细胞的能力DM组与con trol 组比，小鼠单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率显著增高（P0.01），吞噬指数也显著增加（P0.05）, CCF组与DM组比 单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数有所降低（P0.01），而与正常对照组接近（P0.05）,（表2）。表2 单核巨噬细胞体外吞噬红细胞百分数与吞噬指数Tab2Phagocytoticfunctionof Mononuclearmacrophageof DM mice in vitro (x S)Group吞噬率（%）吞噬指数Control组31.667+7.993b1.588+0.420
15、aDM组39.074+3.8292.129+0.354CCF组30.741+5.780b1.729+0.364b与DM组比:aP0.05 ; b P0.01,3 讨论糖尿病是一种常见的内分泌功能障碍性疾病。常可产生许多 并发症 , 在其并发症的形成中 , 巨噬细胞参与其多个环节。已有 实验证实：在高糖环境下，巨噬细胞对CSF-1刺激增生反应能力 增强 , 巨噬细胞与糖基化白蛋白一起培养可导致某些细胞因子 的释放如TNF、IL-1 ,这些因子可导致细胞生理功能紊乱而产生 许多并发症 , 特别是参与肾脏并发症的发生。动物在糖尿病状态 下 , 巨噬细胞释放血管生长因子并刺激内皮细胞增生之能力增 强
16、, 由此而导致糖尿病的微血管病变 （包括肾脏及视网膜病 变 ) 。糖尿病时巨噬细胞处于激活状态。巨噬细胞被激活后 , 其吞噬作用增强。在糖尿病大鼠，巨噬细胞通过产生NO抑制脾脏 淋巴细胞对有丝分裂原的增殖反应 , 此可能与糖尿病人易发生 感染有关2。陈国荣等人研究表明糖尿病大鼠腹腔及肺泡巨噬细 胞对中性红的吞噬能力均大于对照组 ， 进一步说明在糖尿病发 病过程中巨噬细胞处于激活状态。此激活的巨噬细胞通过多种途 径参与糖尿病并发症的形成5。有研究表明一些植物黄酮类可促进糖尿病动物糖原恢复正 常水平，增加细胞、组织和靶器官对糖的摄取，纠正糖代谢紊乱。 桑叶富含黄酮类，将200 mg/kg桑叶提取物腹腔
