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1、补充实验 荧光法测定维生素 B2 片剂中核黄素含量一、实验目的1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理2、掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法二、实验原理某些物质被某种波长的光（如紫外光）照射后，会在极短时间内，发射出较入射光 波长为长的光，这种光称为荧光。吸收什么波长范围的光和发射什么波长范围的光，这 与被照射的物质有关。而所发射的荧光的强度与该物质的浓度有如下关系：If二gl。（1-e-aic）式中：If为荧光强度；K为仪器常数；e为荧光物质的荧光量子产率；I。为入射光强度；I为样品池厚度；c为荧光物质的浓度（molLi）; a为荧光物质的摩尔吸光系数。当溶液浓度
2、较稀时，则If=Kei0aIc可见，在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。维生素b2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解， 对热稳定。核黄素B2在230- 490nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526nm左右的绿 色荧光，在pH为67范围内荧光强度最大，在pH = 11的碱性溶液中荧光消失。基于上述性质建立维生素b2的荧光分析法，选择合适的激发波长、荧光波长和实验条件， 即可进行定量测定。三、实验用品1、仪器 荧光分光光度计，离心机，离心管，酸度计或
3、pH试纸，移液管，容量 瓶（25ml、50ml、100ml）,比色管（25ml）,烧杯（50ml）2、试剂50pgml-i核黄素，冰醋酸（5%）,盐酸（1:1）,氢氧化钠（10%）, 市售维生素B2片剂四、实验步骤1、配制10卩g mL-i的核黄素标准溶液：移取50卩gmL-i核黄素（维生素佟）10mL，用5%醋酸溶液稀释定容到50.00mL。2、实验条件的选择（1 ）、激发光波长和荧光波长的选择 准确移取10pg ml-1的核黄素标准溶液1.0ml 于 25ml 容量瓶中,用 5%醋酸溶液稀释至刻度,摇匀。转移部分溶液至样品池 中，利用荧光分光光度计测得该样品的扫描功能测得最适的入射光的波长为451 nm, 强度最大的荧光峰值为526nm。将荧光分光光度计的荧光波长暂设定在526nm处， 在220-500nm波长范围内对激发波长进行扫描，记录激发光谱曲线，约在265nm、 372nm、451 nm有三个峰。然后将激发波长设定在451 nm处，在460-700nm波 长范围内对荧光波长扫描，记录荧光光谱曲线，约在526nm处荧光强度最大。从激发 光谱及荧光光谱上确定最佳的激发光波长和最佳荧光波长。（2、酸度的选择 于一组25ml容量瓶中各加入10pgml-1的核黄素标准溶液
