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1、各种转染方法比较转染方法DEAE 葡聚糖法磷酸钙法原理带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜 被细胞内吞主要应用瞬时转染特点主要的厂家及产品相对简便、重复比磷酸钙好,但对细 胞有一定的毒副作用,转染时需除血 Sigma-Aldrich（DEAE-Dextran 清且一般只用于 BSC-1,CV-1,COS Transfection Kit） 细胞系不适用于原代细胞（所需的DNA浓稳定转 度较高）,操作简便但重复性差,有些染,染瞬 细胞不适用GIBCO BRL ，Promega转染 细胞建议用 CSCL 梯度离心，转染是拷贝数较多
2、阳离子脂质体法带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质 体上剩余的电核与细胞膜上的唾 稳定转 液酸残基的负电核结合；另一种 染,瞬时 解释是通过细胞是内吞作用而被 转染,所 进入细胞。（若DNA浓度过高，有细胞 中和脂质体表面电核，而降低了 与细胞的结合能力）Invitrogen（Lipofectamine 使用方法简单，可携带大片段 DNA， 2000， Lipofectamine， 通用于各种类型的裸露DNA或 Lipofectin, Lipofectamine RNA，能转染各种类型的细胞，没Plus，Cellfectin） 有免疫原性。虽在体外基因转染中 Roch（Do
3、sper， DOTAP， FuGENE 有很高的效率，但在体内，能被血 6） 清清除，并在肺组织内累积，诱发 CPG Biotech Co（GeneLimo 强烈的抗炎反应，导致高水平的毒 Plus， GeneLimo Super） 性，这在很大程度上限制了其应用 Promega（Tran s f a s t ， Tfx，Transfectam）阳离子聚合物带正电的聚合物与核酸带负电的 稳定转 磷酸基团形成带正电的复合物后 染稳,定瞬转时 与细胞表面带负电的蛋白多糖相 转染,染瞬,时所 互作用，并通过内吞作用进入细 转染,所 有细胞 胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率 高，操作简单，适用范围广
4、，重复 性好等特点外，还具有在体内，转 染效率高，细胞毒性低等特点，是 新一代的转染试剂。Sunma (梭华一Sofast)Qbiogene(jetPEI) Qiagen(SuperFect，Polyfect)逆转录病病毒毒（RNA）病毒介导通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞 表面的受体相互作用而进入宿主 细胞，之后反转入酶启动合成 DNA 并随机整合到宿主基因组 中稳定转 染,特定 宿主细 胞可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等,但携带基因不能太大（v8kb），细胞需处分裂期，需考虑安全因素瞬时转中国科学院典型培养物保藏委员会可用于难转染的细胞,需考虑安全因 素腺病毒（双 先和细胞表面的受体结
5、合，继而 染,特定 链DNA）在av整合素介导下被细胞内吞宿主细Biolistic颗 将DNA用显微重金属颗粒沉淀，瞬时性粒传递法 （基 再将包被好的颗粒用弹道装置投 转瞬染时，性稳可用于：人的表皮细胞，纤维原细 因枪粒子轰击 射入细胞， DNA 在胞内逐步释 转染，稳胞，淋巴细胞系以及原代细胞 法） 放，表达 定转染显微注射法用显微操作将 DNA 直接注入靶 细胞核稳定转染,瞬时转染转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞电穿孔法高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA 通过膜上形成的小孔导入稳定转 适用性广，除了质粒外，还可转染 染，瞬时 大的基因组（65kb）但细胞致死率 转染,所 高， DNA 和细胞用量大， 需根据 有细胞 不同细胞类型优化电穿孔实验条件，拷贝数较少 1-20
