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1、_MS培养基母液的配制：20 MS大量元素 (1 L) ：38 g KNO3， 33 g NH4 NO3， 8.8 g CaCl 22HO，7.4 g MgSO47H2O，3.4 g KH 2PO4。200MS微量元素 (1 L) ： 0.166 g KI， 1.24 g H 3BO3，4.46 g MnSO44H2 O，1.72 g ZnSO47H2O， 0.05 g Na2MoO42HO，0.005 g CuSO45H2O， 0.005 g CoCl26H2O。200MS维生素和氨基酸 (1 L) ：20 g 肌醇， 0.1 g 烟酸， 0.1 g 盐酸吡哆醇(VB6) ，0.02 g 盐
2、酸硫胺素 (thiamine hydrochloride, VB1) ，0.4 g 甘氨酸。 200MS 铁盐 (1 L) ： 5.56 g FeSO 47H2O， 7.46 g Na 2EDTA2H2 O，先溶于500 mL ddH2O，加热，调 pH至 5.5 ，定容至 1 L 。注意：配制大量元素母液时， 为避免产生沉淀， 要用纯度高的重蒸馏水溶解， 药品采用分析纯。化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合， 混合时需注意边搅拌边混合。 CaCl22HO要在最后单独加入，在溶解 CaCl22HO 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的 CO2，以防沉淀。配制铁盐母液时， FeSO4和 Na2
3、-EDTA 应分别加热溶解后混合， 并置于磁力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色 ( 约加热 20-30 min) ，调 pH 值至 5 .5 ，室温放置冷却后，再冷藏。使用上述配好的母液，按照稀释倍数，配制基础MS培养液：1MS大量元素， 1MS微量元素， 1MS维生素和氨基酸， 1MS铁盐，蔗糖 30 g/L ，定容后调节 pH 至 5.8 ，高温高压灭菌。固体培养基含植物凝胶 3.5 g/L 或琼脂 9 g/L 。另 MS 基 本 培 养 基 可 用 Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (Sigma-Aldrich) 快速配制。播种方法：将烟草种子在
4、自然条件下进行浸种处理（无菌水中浸泡100h），自然晾干后依次用酒精（ 70%）和汞（ 0.1%）进行消毒处理，最后用无菌水洗涤3-5 次，彻底清除残留于种子表面的汞。将消毒后的种子在无菌条件下播于MS固体培养基上，放入 (25 2) 的光照培养箱中培养。培养30d 后取样测定。配制培养液 :精品资料_1. 溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂 9 g、蒸糖 30 g ，放入 1 000 mL 的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水 750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL ，搅拌均匀2. 需要注意的是，在
5、加热琼脂、 制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤3. 调 pH 用滴管吸取物质的量浓度为 1 mol/L 的 NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，一直到培养基的 pH 为 5.84. 培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时， 先将培养基倒入烧杯中， 然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或 100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5 1/4 。每 1 000
6、 mL 培养基，可分装 25 30 瓶。高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。第一， 码放锥形瓶。 将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐， 可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶( 以上物品都要用牛皮纸封口 ) ，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、 121.3 下，灭菌20 min。 灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d 后再使用。精品资料_Welcome ToDownload !欢迎您的下载，资料仅供参考！精品资料
