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1、花青苷种类、提取及检测一种类花色素均具有类黄酮的基本结构，由两个苯环和一个含氧杂环组成的(C6-C3-C6)C15化 合物(如图)，根据B环羟基化和甲基化位置和数目的不同而将花色素主要分为六类:天竺葵色 素(Pelargonidin)、矢车菊色素(cyanidin)、芍药色素(peonidin)(3-甲基矢车菊色素)、飞燕草 色素(delphinidin)、矮牵牛色素(petunidin)(3 ,5,-甲基飞燕草色素)和锦葵色素(malvidin)( 3, ,5 / -二甲基飞燕草色素)。不同植物中花色素发生糖昔化的位点(C3、C5和C7位等)和数目的差异, 及酞化程度的不同使植物中存在着不同
2、的花色素普，其结构复杂，但都以这六种花色素为基 本结构(Grotewold， 2006)。图1.1郭芭蠢基本化学蜡絢.元埜驀色購：R1=H. R2=Ht矢罪菊色#；RI=OH,飞義草色糞；比EU-OHFlf. 1”1 ChcmkaJ structure f RntbocynDlns. Fdaigonidin： R2=H; Cyanidin： R.AOH, R2=H. OElphinidin: RI-OH,R2=OHr二提取国内外学者对花青昔的提取做了大量研究，提取目的及目标花青昔不同，提取方法略有 差异。花青昔易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶液，花青昔的稳定性受酶、温度、氧气、光、 pH值、金属离
3、子等理化性质的影响，在中性和碱性条件下不稳定。提取过程常采用酸性溶液，酸能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效 率高于乙醇及水溶液。花青昔一般用于食品着色，考虑到甲醇的不安全因素，一般选用体积 分数为1%的乙醇溶液。采用盐酸酸化可保持提取液pH值较低，阻止无酰基花青昔的降解。 随着盐酸被浓缩，pH值升高，导致花青昔的降解。为获得更接近于天然状态的花青昔，采 用弱有机酸或中性溶剂做初步提取，弱有机酸多用甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸和酒石酸，中 性溶剂一般采用丙酮作提取剂。粗提后的花青昔提取液浓度很低，浓缩时一般不超过40C, 时间也不宜太长。1.植色素苻和类黄酮、总酚的測定参照Pirel
4、li等的方法略作修改，O.lg叶片， 洗净，用5ml的0.1S6HCL甲(V/V)4DC浸提24九 测定提取液在530nm色素首=)、 320 nm(类資酮)和2S0nm (总酣)的吸光值。U=0D网您FW作为一个花色素昔单位， U=OD325/g.?w作为一个类黄酮单位，U=OD/g.Fw作为一个总酣单位。2.花青昔含量的测定：用0.1%的盐酸甲醇浸提叶片2 h后，测657nm、530nm处的吸光度。3.花色背的测定参考仝月澳等（1982的方法，将叶片取回，洗净，擦 干，剪碎后采用1.5 m&l-L-1 HC1 :邸乙醇=15 : 85（v/v）混合液，在黑 暗条件下浸提第h,后用岛津UV-
5、2450紫外可见分光光度计检测予站nm 波长的光密度值，参照胡位荣等（20。4）的计算方法进行花色背含量的计 算*叶绿素自，b和类胡萝卜素的含量参照Lichtenthaler等G983的方4.花青昔的主要吸收峰是5铀tie左右，叶绿素的皈收峰是在E&Omn左右、几种提取槪比较的结果表 明，95%乙醇*】.5mol/LHCl=8S : 1&时混合液所提取的色素的主要吸收峰与花膏昔和叶尿素的吸枚 峰相吻合，并且对色索的提取效果较好+核选挣9詛乙醇；1.5mol/LHCl = 85- 15的混合液作为以后5.结果表明对提取影响最大的是pH,其次为乙醇浓度、料液比、提取时间。最隹提取条 件拘：浓度旳坯
6、、pH=1的乙醇溶液为提取剂，料液比1： 60?提取时间60 mm.（?）紫外可见光谱分析纯化后的紫甘蓝色素，在28 nm, 3 23 nm和羽0 nm处的 吸收峰说明紫甘蓝色素属于花青背类物质，且含有醸基化的屁青背，色素的性质比普通 花青苗稳定。6.2* 2 测定方法2- 2. 1 样品处理将含有花青素的植物叶片（鲜）用剪刀剪成12mm碎片、准确称量加官，置于50ml.三角 瓶中，加入lOmL 0. lmol/LJfc酸溶液，杯口用封 口膜扎紧以防水分蒸发.T32-C恒温培养箱中浸 提勺讥 不时摇荡。取出过滤，滤液作为待测溶液.2. 2- 2 测定用Lem比色皿r在TU 1221型紫外可见光
7、分光光度计上于530nm处测定其吸光度(A), 以Q* lmol/L盐酸溶液作为空白对照.2. 2. 3 计算设每 览样品在10nJ. 0. lmol/k盐酸溶液中 的浸提液的吸光度A = 0l 一个花肯素单位，H 此比较花肯素的相对含量“花青素含量(花青素单位/百 lOmL 0* lmol/L 盐酸)=10A13式中，10将吸光度换算成対花青素单位A测得的吸光度H稀释倍数7.花色苦芒中性和弱碱性潛液中不太稳定:因此.提取过程通常要采用酸性潛剂*気丁提取溶剂:甲醇是最崔选择,31为 甲醇提取效率比乙醇高2。兌，出水高73%25o酸性洛剂在破坏植物纽胞膜的同时溶解水溶性色素.最常用的提取洛剂是
8、】帥的盐酸甲醇潘液，隹是用丁食品着色时，考虑到甲醉的毒性，可臥选择1%的盐酸乙醇潘液*花芭昔的最尢吸收区在50%菊Otm范围内，而离这一范围最近的类黄爾的最大吸收范围在了50心38Unm.崔新鲜的植 物提取物中;因为很少含有在花色昔的最丈吸收区发生吸收的干扰物质，花色昔总量可以利用比耳定量通过适当波长处的 吸光度来测定8.2. L 3花青素的提取及其含量的分光光度法测定剪取硫灯或亂灯光照培养34d(4片真叶期)的番茄幼苗真叶0-5gf经过液氮冷冻lhr. 然后用研钵研成细粉，加L2mol/LHCMml提取花青素据叽在530nm处测定提取液的 光吸收(A53O),换算成单位衅重叶片在530nm波
9、长的光吸收(A5S0/g FW)来表示叶片 中花青素相对含量。9.3花青秦的提取和鉴别花青素分子中存在高度分子井窥体系，具有 酸性与碱性基团，易溶于水=甲醇、乙醇等极性 溶和中。通常用含有少量盐酸或甲酸的甲醇做溶 剂提取，其中的酸能防止非酰基化的花色昔的降 解，黙而在蒸发浓缩时这些酸会导致色素的降 解。在一些植物中，少量的酸会使联基化的花色 昔部分或全部的水解。ReviLla在1夕溯年对从葡萄 中提取花青素的峯种方法进行了比较实验，证明 当溶剂中的HC1达到0- 12mOlH时就能便酰基化 的花色苜部分水解2=后来，用丙酮提取花青 素，与用酸性甲醇相比，用丙酮提取效果更好， 消除了果胶的影响，
10、并且提取温度低W对于 三检测紫外一可见光谱是花青苷结构鉴定的经典方法，其鉴定方法为：花青苷有2个最大吸 收波长,500540nm附近及27nm附近，据此可判定是否为花青苷色素；若B环有邻位酚羟 基，则向体积分数0.01%盐酸-甲醇溶液中滴加35滴A1C13,甲醇或乙醇溶液时会出现蓝移; 糖苷位置可据花青苷吸光度比值A440/Amax判定；在波长300330nm间有吸收峰，表明存 在酰基；若在波长440n处有肩峰，则5号位羟基没被取代；若在紫外光下有荧光，表明 在5号位有取代基。（取代基位置参考下图）1511花青盂的耳本结构表1伍种常见花青素的结构特点英文名砥代牧1yPelargonidinHH矢车菊色素CyanidinOHH飞燕草色素DelphinidinOHOH芍貓色素PeonidinOKfeH奉牛花色素PetunidinOMeOH锦矣色素MaliidinOMe
