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1、问题：超滤膜处理蛋白时，使用前应该做哪些处理呢？1. 使用后应将超滤膜用 0.2MNaOH 处理30分钟，然后用水清洗之中性，最后保存在 20%的乙 醇中。2.根据使用的超滤膜的性质（稳定性），一般情况建议用0.10.5M NAOH,进行30分钟以上的清 洗，在使用前后通过测试膜的水通量评估膜的透过性能和清洗效果。为了减少蛋白的损失， 建议浓缩前用缓冲液润洗膜，浓缩后用缓冲液冲洗膜回收蛋白。并且保存膜的条件也要根据 膜性质选择合适的条件。问题：虽然知道是一次性的，但实验室的 millipore 超滤还是久经考验，用了又用。但最近超滤 一个悬浊液，不慎把膜堵了，请教高手有没有在不损伤膜的前提下把
2、堵膜的物质洗下来。（改物 质可能是一些蛋白沉淀）呵呵 不要仅仅建议我重新买噢！我需要建设性意见，先谢谢了！1. 如果堵得比较厉害，还可以在 NaOH 溶液中加点 NaClO 效果会更好，洗膜的时候最好用热 的溶液。2. 我用一个管子提一种蛋白的不同溶液，纯化后的分部收集管子如果保养的好可以用很多 次一般不用时候放在乙醇中，放置染菌 另外，容易出问题的环节主要有 滤膜破裂， 套管破裂，滤膜堵塞等我最近碰到的问题就是堵塞楼上的方法不错，今天试用过了另 外，需要提醒你的是：滤膜过滤后，附着在膜上的蛋白量比较大，也就是说，体积的变化倍 数和浓缩倍数是不一样的3. 可以使用0.1-0.5 M NAOH清
3、洗问题：在使用之后，用水和1N NAOH清洗完后，测得水通量也没问题。但是在把膜包从夹具拿出来准备保存的时候，发现膜包边上的小孔仍然有很多可见杂质。这些杂质是否需要用物理方法处理掉？建议在你的样品上超滤前选用0.45um的膜过滤一下，这样就不会有这个问题了，长时间有大颗 粒或别的杂质进去对膜包可不太好。问题：我的蛋白14kD,用截流10000的怎么一点都离不下。而且在我只加超纯水时，水也离不 下，十分迷惑你是用超滤离心管吗？水都离心不下，不是离心力不够吧，要不膜用别的什么处理过了变疏水的 了。还是选错了型号。问题：请问 millipore 的超滤管可以反复使用吗? 如果可以的话,第一次使用后该
4、如何处理呢? 为避免交叉污染，同种蛋白我想可以重复使用。millipore 的膜，您选择的是什么材质。如果是PES材质，那么用后可以用0.5M NaOH浸泡，这样水通量可能会保持的久一点。问题：目前我公司也在用 millpore 得超滤系统以及超滤管，也存在一些问题想咨询一下。超滤管 在使用过以后应该如何维护才能延长使用寿命保证超滤效果？ 超滤管一般是一次性使用的，有些时候可以反复用几次，就当白赚了。一定要谈维护的话，在材质允许的情况下，如PES的膜，用毕可以用0.1-0.5M NaOH浸泡，有 可能多用几次。具体millipore的材质，需要和millipore咨询问题：请问如何选定超滤膜的
5、孔径大小？如果我选择30kd得超滤管，那么我得到的目标蛋白应 该在什么范围之内？那很难说，不同公司的膜孔径标称是存在明显差异的，没有通用标准。而且，某个蛋白的具体的截留状况和蛋白的浓度、构象、buffer种类、压力、膜材质、是否滤洗 等密切相关。只能说，如果希望100%截留某个蛋白，一般膜孔径选择为目标蛋白的1/3-1/5。问题：用10KD, 15ml的超滤管超滤含20KD目的蛋白的蛋白溶液，会不会有目的蛋白穿过滤膜 呢，我同学用这个超滤管超滤17KD的蛋白液，竟然有目的蛋白透过滤膜可能会有一定的透过损失，因为截留和分子的形状也有关系。为了 100%截留，超滤膜的截留分子量最好是目的蛋白的1/
6、3比较保险问题：我们公司需要的是通过超滤管的那部分液体，将我们的产品分离，我说的超滤液就是指离 心以后，透过滤膜进入一次性试管中的那部分液体，而不是残留在超滤管中的那部分液体。我们 的目标液体就是离心出来的那部分液体，我想知道的是，30kd的滤膜截留的应该是30000以上 的蛋白质分子吧，30000 一下的蛋白分子是不是就随着离心作用流入试管中了？滤膜的孔径并不像你想象的那样是完全均一的，事实上，膜的孔径是一个范围。膜分离的分辨率 并不像你想象的那么高。只有分子量相差10倍以上的两种分子，才有可能使用膜分离技术加以 分离。膜孔径的选择，如果希望截留目标物，膜孔径一般是目标分子量的1/3-1/5
7、；如果希望目标物透过，膜孔径需要是目标分子量的5-10倍。所以剩下的，你就可以自己判断了。用30k的膜多数情况下不能完全截留30k的分子，一定有一部分会透过膜，但也常常会有一部 分被截留。问题：狠狠心买了一个包装的millipore超滤离心管，用了一支没结果，问问清楚：1。用于同一种样品的浓缩，可以重复使用该离心管吗？ 我用一支管子（15ml）分次离心了 60ml的样品，浓缩到250ul；2。实验室的吊桶式离心机达不到说明书上的4000g，最多3000rpm,通过延长离心时间来达到浓 缩倍数可以吗？3。使用应注意什么才能高效而蛋白损失最小？1. 应该可以，因为超滤管的作用只是像个筛子一样，把分
8、子量小的蛋白漏下去，分子量大的留 在上面，既然是筛同样的东西，应该可以用同一把筛子吧土人小时候在家里干活用筛子 筛过谷子、豆子什么的，所以这一点还是知道2. 可以的，只是慢一些，多等一会而就是了。3. 我也只用过几次超滤管，所以也不知道这里面有些什么学问一一用筛子筛谷子好像也没有 什么学问吧 W2. 相同的cen tricon可以反复多次使用，只要把sample con tai ner掉过来离一下除去上次的成分 即可，也可用1N的NaOH处理一下滤膜以除去残留的蛋白。其中离心管再次使用的最关键的一点是在一次使用后完，除去残留物后，用70%乙醇滴加在膜 上，防止干膜和长菌。由于乙醇易挥发所以要经常看一下，千万不要干膜（那样纤维会裂，不能 起到有效分离作用）。3. 我的经验是：应根据你浓缩的样品来确定超滤离心管的清洗再生方法，比如有些残留蛋白不能 用高浓度NaOH去除，因为高浓度NaOH使其立即变性，结合在膜上非常紧，反而难以清除， 同时对膜的使用寿命也有很大影响。清洗再生的方法很多，但不宜采用较剧烈的方式。 平常保存可以将离心管浸泡在 20%的乙醇里，抑菌保存，一般每周更换一次乙醇。4. 可以反复用，但反复用后滤过流量下降，需要延长滤过时间，我用 50%甘油防止膜干燥
