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2、对本论文所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。毕业论文作者签名：签字日期：年月日摘 要摘要：用高效液相色谱法检测市售酸奶制品中三聚氰胺的含量,对不同厂家生产的酸奶制品的食品安全做客观检测。关键词：酸奶；三聚氰胺；食品安全；高效液相色谱。AbstractAbstract：high performance liquid chromatography method is used to detect melamine levels in commercially available yogurtproducts to subjective test for provide , of
3、yogurt products from different manufacturers food safety purpose.Key word：Yogurt；Melamine; food safety, high performance liquid chromatography.引言酸奶是的特产,也有几百年的历史,它是以新鲜全脂牛奶为原料,经乳酸菌发酵制成的乳制品。酸奶由纯牛奶发酵而成,除保留了鲜牛奶的全部营养成分外,在发酵过程中乳酸奶酸菌还可产生有益于人类生命和健康的肠道益生菌以及人体营养所必须的多种维生素,酸奶是牛奶经过发酵制成的,口味酸甜细滑,营养丰富,深受人们喜爱。专家称它是21
4、世纪的食品,是种功能独特的营养品,能调节机体微生物的平衡。有好多人喜欢吃酸奶随着经济的发展人们的生活水平也在提高,希望能够吃到健康的安全的食品20XX我国三鹿奶粉事件引起了社会各界人士的关注,所以食品安全极为重要,对此本文就几家乳业公司出产的酸奶进行了对比性的检测及数据处理1。三聚氰胺：化学式C3H6N62相对分子质量126.12是三嗪类含氮再换有机化合物,主要用于化工行业,其化学性质稳定常温下为晶体,微溶于水,其水溶液微呈碱性,可与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等等形成三聚氰胺盐,氮不溶于醚、苯和四氯化碳3三聚氰胺具有与氨基酸类似的结构和元素组成,因此一些造假者在食品中添加三聚氰胺以此提高检测
5、的蛋白质含量,这种食品若被人或动物摄入后肾小管中出现晶体,如长期食入会造成生殖、泌尿系统的损害,就会造成肾衰竭甚至死亡4。 三聚氰胺是一种用途广泛的有机化工中间产物 ,最主要的用途是作为生产三聚氰胺 /甲醛树脂 的原料5。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。该树脂硬度比脲醛树脂高 ,不易燃 ,耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度 ,广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业6。三聚氰胺的测定有方法,例如：苦味酸法、升华法、HPLC-UV检测法、HPLC-MC检测法,其中HPLC-MC检测法是最简单快捷高效液相色谱法具有以下特征7
6、： 高效液相色谱法以液体为流动相称为载液8,液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。一般可达150350 105Pa。高速：流动相在柱的流速较经典色谱快得多,一般可达110ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于1h 9。高效：近年来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。定相,使分离效率大大提高定相,采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g10。另外,用样量小,一般几个微升11。适应围宽12：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方
7、便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法只要求试样能制成溶液,而不需要汽化,因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大大于400 以上的有机物这些物质几乎占有机物总数的 75% 8%原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70%80%。高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器其适用于对紫外光或可见光有吸收性能样品的检测13。其特点是,使用面广如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用、灵敏度高测下限为10-10gml
8、、线性围宽、对温度和流速变化不敏感、可检测梯度溶液洗脱的样品14。 所以选择高效液相色谱是最为简单快捷的方法。1 材料与方法 1.1材料与仪器设备1.1.1 材料 酸奶,好朋友乳业、小西牛乳业、天露出品,购于超市。1.1.2 仪器设备 高效液相色谱仪安捷伦1100系列；分析天平良平仪器仪表;离心机环保仪器厂80-1型；超声波水浴XX超声仪器KQ-1型,固相萃取装置XX市恒奥科技发展SHE-12D型；氮气吹干仪仪川仪器厂；涡旋混合器浦东物理光学仪器厂SK-1型；具塞塑料离心管,研钵。1.1.3试剂 甲醇、乙腈、辛烷磺酸钠：色谱纯；氨水：含量25%28%；三氯乙酸,柠檬酸,三聚氰胺标准品：纯度大于
9、99.0；微孔膜：0.22 m有机相； 海砂 氮气：纯度大于等于99.99%。甲醇水溶液：50ml 氨水和50ml水,混匀后备用。三氯乙酸溶液：称取10g三氯乙酸与1L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,备用。氨水甲醇溶液5%：量取5ml氨水和95ml甲醇,混合均匀后备用。离子对试剂缓冲溶液：准确称量2.1g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠,加入约980ml水溶解,调节pH至3.0后,定容至1L备用。三聚氰胺标准储备溶液；准确称取100mg精确到0.1mg三聚氰胺标准品100ml容量瓶中,用甲醇水溶液融解并定容至刻度,配制成浓度为1mg/ml的标准储备液,与4闭光保存。阳离子交换萃取柱：混合型阳离子交
10、换固相萃取柱,基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物,60mg, 3ml,或相当者。使用前一次用3ml甲醇、5ml水活化。1.1.4样品制备5ml乙腈,超声提取10min,在振荡提取10min,以不低于4000r/min欣10min。上清液经过三氯乙酸溶液市容的绿植过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25ml,移取5ml滤液,加入5ml水混匀后做待净化液。将待净化液转移到国相萃取柱中。一次用3ml水喝3ml甲醇洗涤,抽至净干后,用6ml氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1ml/min。洗脱液于50下用氮气吹干,残留物相当于0.4g样品用1ml流动相定容,涡旋混合1min,过微孔滤膜后,提
11、供HPLC测定。准确称取2g试样于50ml具塞塑料离心管中,加入15ml三氯乙酸溶液和1.1.5高效液相色谱测定条件色谱柱：C8柱,1504.6,5m,或相当者。 流动相：C8柱,离子对试剂缓冲溶液-乙腈85+15,体积比,混匀。流 速：0.2ml/min。柱 温：40。波 长：240nm。进样量：20l. 1.1.6标准曲线的绘制准确称取三聚氰胺标准溶液0.8、2、20、40、80g/mL的标准工作液,浓度由低到高进样检测,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程,标准曲线如下： 图 1.1 空白试样的标准曲线图 VWD1A,波长240nm。图1.2 三聚氰胺标准液标准曲线图 VWD1A,波
12、长240nm图1.3 小西牛三聚氰胺高效液相色谱图,VWD1A,波长240nm。图1.4 天露三聚氰胺高效液相色谱图 VWD1A,波长240nm。图1.5 好朋友三聚氰胺高效液相色谱图 VWD1A,波长240nm。结果计算与分析结果计算： 三聚氰胺的含量有色谱数据处理公式计算获得：根据色谱条件,配制不同浓度的标准品溶液,在波长240nm ,时间在21.599min时测定峰面积,.根据图1.2计算得到X的值为6.3ug/ml,在标准液中实际含量为10ug/ml.由图1.3可以看出在相同时间里并没有出现像图1.2那样明显的峰面积,相同的图1.4和图1.5都没有明显的峰面积出现,只有少许的小峰,这几
13、个小峰不是三聚氰胺有可能是酸奶中所含的蛋白质或是其他物质所以影响产生的峰,并且这些小峰不在数据分析围。故此,这几家出产的酸奶都是安全食品。参考文献1毛岳忠,田师一,晓辉,等.智舌对奶粉中三聚氰胺的检测研究J.中国食品学报,20XX6月,第11卷第3期.2邵静君,温家琪,徐世文三聚氰胺毒理学研究进展J现代畜牧兽医,200712：52- 543汪辉,曹小彦,彭新凯,等.高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺J.食品与机械, 2007, 23: 114-124.4GB/T 223882008.原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法S：中国标准,2008,68:58-59.5黄芳,黄晓兰,吴惠
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