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1、生理学实验一、蛙（蟾蜍）坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】1. 掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。2. 观察组织的兴奋性、刺激与反应律以及骨骼肌收缩的特点。【实验原理】蛙和蟾赊是两栖类动物，其生存环境较简单，离体组织或器官所要求的条件也较简单。 坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，把它们置于人工配制的林格液中，其兴奋性在几个小时 内保持不变。若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉上产生一个可传导的动作电位， 肉眼可以看到一次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一次。【实验材料】实验对象：蟾赊或蛙。实验器材：蛙板、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪刀、尖镊子、培养皿、锌铜弓。实验试剂：任氏液【实验方
2、法】坐骨神经腓肠肌标本的制备可采用离体或在体的方法。1、离体坐骨神经腓肠肌标本制备（1）破坏脑脊髓：取蟾赊1只，以左手示指压其头部前端使其尽量前俯，中指与示 指夹住其前肢，拇指抵住其骶部，使整个躯干做最大屈曲，后肢悬空。探针自枕骨大孔处垂 直刺入，到达椎管，随即将探针改变方向刺入颅腔，向左右两侧不断搅动，彻底捣毁脑组织。 将探针退出至枕骨大孔处，转向后刺入椎管，捻动探针使其逐渐刺入整个椎管内，完全捣毁 脊髓。脑脊髓完全破坏的标志是：下颌呼吸运动消失，反射消失，四肢松软。（2）去除头部和内脏：左手握住蟾赊后肢，此时躯干上部及内脏即全部下垂。右手 持粗剪刀在骶骼关节前1cm处剪断脊柱，剪除全部躯干
3、及内脏组织，注意勿损伤神经。（3）去皮：用圆头镊子夹住脊柱，注意不要碰到神经，捏住皮肤边缘，逐步向下牵 拉剥离皮肤。全部皮肤剥除后，把标本置于盛有林格液的培养皿中。（4）双手和用过的全部手术器械。（5）分离两后肢：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪 成左右两半，再从耻骨联合中央剪开两腿，将已分离的下肢标本浸入盛有任氏液的培养皿中 保存。（6）完成坐骨神经腓肠肌标本。游离坐骨神经：取出一下肢，用蛙钉固定于蛙板上。固定时要注意坐骨神经和腓肠 肌朝上。先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后顺股二头肌和半膜肌之间的坐骨 神经沟纵向分离暴露坐骨神经的大腿部分直至胭窝，并将坐骨
4、神经从脊柱根部剪下（可连一 小块脊椎骨）。在分离过程中，把神经周围的结缔组织去除干净，并把神经细小分支剪断， 但要注意不要用金属器械触碰神经，也不要对神经过度牵拉，且应不断滴加林格液使神经保 持湿润。完成坐骨神经腓肠肌标本：把游离的坐骨神经搭在腓肠肌上，在腓肠肌的跟腱处穿 线结扎，用组织剪在靠结扎线远端剪断跟腱。从膝关节周围开始剪掉大腿所有的肌肉，用粗 尖刀将股骨刮干净。然后，在股骨中部剪去上段股骨（留1.5cm长的股骨），沿膝关节剪去 小腿（注意保留完整的腓肠肌）。一个附着股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的 标本就完成了。2、在体坐骨神经腓肠肌标本制备（1）取一只蟾蜍洗净，按操作程序
5、破坏蟾蜍脑和脊髓。（2）剥离一侧下肢自大腿根部起的全部皮肤，然后将标本俯卧位固定于蛙板上。（3）游离坐骨神经，并在神经下穿线备用。然后，分离腓肠肌的跟腱穿线结扎，并 连同结扎线将跟腱剪下，一直将腓肠肌分离至膝关节，在膝关节旁钉蛙钉固定住膝关节。至 此，在体标本制备完成。3、观察项目用浸有林格液的锌铜弓轻触坐骨神经内，观察腓肠肌的反应。如腓肠肌发生收缩，表明 标本具有正常生理活性，兴奋性良好，说明实验操作成功。将离体坐骨神经腓肠肌标本放在 盛有任氏液的培养皿中，以备实验之用。【注意事项】1、制作离体坐骨神经腓肠肌标本分离两腿时，注意不要将坐骨神经剪断。2、离坐骨神经时用玻璃分针，避免使用金属器械
6、。勿损伤、过度牵拉神经和肌肉。3、及时添加任氏液，保持标本湿润。【思考题】为什么锌铜弓一接触坐骨神经就能使腓肠肌发生收缩？生理学实验二、不同刺激跟肌肉反应关系的验证【实验目的】了解刺激类型与肌肉反应的关系。【实验原理】神经受到电、机械、化学药品和温度等刺激都能产生兴奋，并能引起其所支配的肌肉产 生不同程度的收缩反应。通过实验，可以发现不同刺激种类所引起的肌肉收缩反应的状况是 不一样的。【实验材料】实验对象：蟾蜍；实验器材：整套解剖器，玻璃解剖针，纱布，棉线，铅笔，酒精灯，温度计，铜锌弓； 实验药品：食盐。【实验方法】1. 制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本。浸于任氏液约10分钟。2. 在蛙板的右侧平
7、放一支铅笔，笔杆对着实验者。在蛙板的右边下面垫一泡沫塑料， 使蛙板向左倾斜。3. 取坐骨神经-腓肠肌标本，把腓肠肌安放在蛙板和左边，拉直坐骨神经，把连着神经 的脊柱骨片搁在与坐骨神经呈垂直方向的铅笔上，使坐骨神经悬空，不接角蛙板。4. 用铜锌弓刺激神经，观察肌肉收缩。重复多次刺激神经，看肌肉是否收缩。再用电 极直接刺激肌肉，注意肌肉的反应。5. 在靠近脊柱骨片的神经上放数粒食盐，并滴上一滴任氏液在食盐上，观察肌肉收缩 的形式。待肌肉出现反应后，即用任氏液不断冲洗神经，直到肌肉停止收缩为止。6. 用镊子轻夹靠近脊柱骨片的神经，观察肌肉收缩，然后用力夹神经数次，观察肌肉 的反应。待肌肉没有反应后，
8、将镊子稍向近腓肠肌的神经处移动，轻夹神经，观察肌肉的收 缩。7. 分别以38C和40C的任氏液滴于坐骨神发上，观察肌肉有无反应。生理学实验三、屈肌反射、搔扒反射的观察及反射弧分析【实验目的】1. 分析屈肌反射弧的组成部分。2. 探讨反射弧的完整性与反射活动的关系。【实验原理】在中枢神经系统参与下，机体对内、外环境变化所作出的规律性应答称为反射。反射活 动的结构基础是反射弧，它一般包括感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部 分。反射弧中任何一个部分的解剖结构和生理完整性受到破坏，反射活动就无法完成。【实验材料】实验对象：蟾蜍或蛙。实验器材：蛙类手术器械一套、铁夹、电刺激器、刺激电极、棉
9、球、纱布、培养皿、烧 杯。实验药品：0.5%硫酸。【实验方法】制备脊蛙：用探针捣毁蛙脑部，保留脊髓。用铁夹夹住蛙下颌，将蛙悬挂在支架上。【观察项目】1. 观察屈肌反射：用培养皿盛0.5%硫酸溶液，将蟾蜍左后肢的脚趾尖浸于硫酸溶液中， 观察屈肌反射（在脊动物的皮肤接受伤害性刺激时，受刺激一侧的肢体出现屈曲的反应，关 节的屈肌收缩而伸肌弛缓，称为屈肌反射）有无发生，然后用烧杯盛自来水洗去皮肤上的硫 酸溶液。2. 搔扒反射的观察：将浸有0.5%硫酸溶液滤纸片贴在蛙的下腹部，观察蛙的反应。3. 感受器的分析：剥掉左后肢足趾皮肤再观察屈肌反射，在趾关节上方皮肤作一环状 切口，将足部皮肤剥掉，重复步骤一，
10、结果如何？4. 刺激右侧脚趾尖：按步骤一的方法以硫酸溶液刺激右侧脚尖，观察反射活动。5. 传入神经的分析：剪断右腿坐骨神经：在右侧大腿背侧剪开皮肤，在股二头肌和半 膜肌之间分离找出坐骨神经，在神经上作两个结扎，在两结扎线间剪断神经。重复步骤4。 结果如何？6. 传出神经的分析：刺激蛙背部的中央部分（纸片应稍大些），观察两后肢的反应。7. 效应器的分析：将右后肢大腿处的肌肉在远体一端剪断，刺激蛙背部的中央，观察 两后肢的反应。8. 脊髓的分析：用探针捣毁蛙的脊髓，刺激蛙背部的中央，观察两后肢的反应。【注意事项】1. 每次试验时，要使皮肤接触硫酸的面积不变，以保持相同的刺激强度。2. 刺激后要立即
11、用清水洗去硫酸，以免损伤皮肤。生理学实验四、红细胞渗透脆性测定【实验目的】1. 本实验学习测定红细胞渗透脆性的方法。2. 加深对细胞外液渗透张力在维持红细胞正常形态与功能重要性方面的理解。【实验原理】将红细胞悬浮于等渗NaCl液中，其形态不变。若置于低渗NaCl溶液中则发生膨胀破裂， 此现象称为红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定抵抗力，其大小可用NaCl溶 液浓度的高低来表示。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中，开始出现溶血现象的NaCl 溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力（正常为0.42-0.46%NaCl溶液）。出现完全溶血现象 时的NaCl溶液浓度为该红细胞的最大抵抗力（正
12、常为0.28-0.32%NaCl溶液）。前者代表红细 胞的最大脆性（最小抵抗力），后者代表红细胞最小脆性（最大抵抗力）。生理学上将能使悬浮 于其中的红细胞保持正常形态的溶液称为等张溶液，不能跨过细胞膜的微粒所形成的力，但 等渗溶液并不一定是等张溶液（如1.9%的尿素溶液）。【实验材料】实验对象：动物种类不限；实验器材：试管架、小试管、滴管，移液管；实验药品：1%NaCl溶液、0.85%氯化钠溶液、蒸馏水、1.9%尿素溶液、1%肝素。【实验方法】1. 配制不同浓度的低渗NaCl溶液：取口径相同的干燥洁净小试管10支，分别编号排 列在试管架上，配制出10种不同浓度的NaCl低渗溶液（0.25%，0
13、.3%，0.35%，0.4%，0.45%， 0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。每个试管总量均为2.5ml或4ml，视试管大小而定。另取3支小试管，在三个试管上分别编号11-13，分别加入0.85%NaCl溶液、1.9%尿素 和蒸溜水2.5ml或4ml，与前面10支试管量一致。2. 制备抗凝血：不同动物采血方法各异，但多采用末梢血。把血液放入含有肝素的烧 杯内，混匀。1%肝素1ml可抗10ml血。3. 加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，依次向13支试管内各加1滴，轻轻颠倒混均，切 忌用力振荡。先观察11、12、13管的变化，其他10支试管在室温下放置1小时。4. 观察结果：血液溶
14、血情况，其现象可分为以下几种:(1) 试管内液体完全变成透明红色，说明红细胞完全破裂，称为完全溶血。(2) 试管内液体下层为混浊红色，上层无色透明，表示部分红细胞没有破坏，称为不完 全深血。(3) 试管内液体下层为混浊红色，上层无色透明，说明红细胞完全没有破坏。5. 观察项目(1) 观察不同浓度低渗NaCl混合液的颜色和透明度。(2) 比较第11、12、13管的溶血情况并分析其原因。【实验结果】试管号 12345678910111213现象【注意事项】1. 每支试管内血液滴入量应准确无误(只加一滴)。2. 确保每支试管NaCl溶液的浓度准确、容量相等。3. 试管必须清洁、干燥。4. 观察结果时
15、应以白色为背景。【要求与思考】1. 实验前要预习实验内容。2. 复习和掌握生理学教材有关血液凝固、渗透压的概念以及红细胞的形态、可塑变形 性等基本知识。3. 何谓等渗、等张溶液，红细胞的最大脆性、最小脆性、最大抵抗力和最小抵抗力？【思考题】1. 为什么红细胞在等渗的尿素溶液中迅速发生溶血？2. 测定红细胞渗透脆性有何临床意义？3. 同一个体的红细胞的渗透脆性不一样，为什么？生理学实验五、ABO血型鉴定【实验目的】1. 观察红细胞凝集现象。2. 学习鉴定血型的方法，掌握ABO血型鉴定的原理。【实验原理】血型是指红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B 两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则 产生凝集现象。因此，血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与 标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而得知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表2-1）表2-1 ABO血型中的抗原和抗体血型红细胞膜上所含的抗原血清中所含的抗体AA抗BBB抗A
