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1、实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香甙（Rutisude），广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁 的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、养麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤 以槐花米和养麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L。）的花蕾，所含主要成分为芦丁， 含量可达12% 16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素 等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床 上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。槐花米中主要化学成分的结构及性质：1.
2、芦丁（Rutin）淡黄色细小针状结晶，C178C（含三分子结晶），188C（无水物）。溶解度：水：1:100（冷），1:200（热）甲醇：1:100（冷），1:9（热）乙醇：1:650（冷），1:60（热）毗啶：1:（冷），易溶（热）不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后 复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。2. 槲皮素（Quercetin）即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313C314C（含2分子结晶水），316C（无水物）。 溶解度：乙醇：1:290（无水乙醇），1:23（热）可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、毗啶、冰醋酸不溶于水、乙醚、苯、氯仿、 石油醚等
3、。3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210C220C（分解）。易溶于水、毗啶，能溶于200倍的 甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄 糖醛酸内酯。 白桦脂醇（Betulin）无色针晶，C252C。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、 苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。(2)槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，C220C或224C。能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于 水。4. 槐属甙(Sophoricoside)mp.298C。易溶于热乙醇、热醋酸、毗啶、稀碱液；难溶于水；冷乙醇、冷 醋酸；难溶于乙酸乙酯、丙酮中。5. 槐属黄酮甙(Sophor
4、aflavonoloside)mp.207C208C。可溶于热水及乙醇，难溶于冷水、乙酸乙酯、丙酮，不溶 于乙醚等低极性有机溶剂。6. 槐属双甙(Sophorabioside)针状结晶，mp.156C160C(含结晶水)，无水物mp.248C。易溶于毗啶，能 溶于热乙醇、丙酮，稍溶于热水，不溶于弱极性有机溶剂。一、实验目的1. 掌握酸碱法提取黄酮甙的一般原理及方法。2. 掌握黄酮甙(包括甙元)的鉴定方法。3. 学会纸色谱的操作技术。二、实验原理1. 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱 酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸 沉淀的方法
5、自槐花米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为 结晶溶剂进行精制。2. 利用芦丁可被稀酸水解，生成甙元和糖，通过颜色反应，薄层层析及纸 层析进行检识和确认芦丁和槲皮素。三、实验内容(一)芦丁的提取1. 于1000m1烧杯中加500m1蒸馏水加热煮沸后，称取40g槐花米粗粉，投人 沸水中，直火加热煮沸5分钟，在搅拌下小心加入石灰乳至pH 89,加热保 持微沸20-30分钟，趁热用棉花过滤，滤渣再用调pH 89的石灰水200m1煮10 分钟，趁热过滤，合并两次滤液，稍冷(60-70C)用浓盐酸调至pH23左右， 放置过夜g，2. 减压过滤，沉淀用水洗二次，然后用少量乙醇洗二次，抽干，
6、称重 即得芦丁粗品。(二)芦丁的精制1. 将芦丁粗品置烧杯中，按(1：200)加蒸馏水，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜;g，2.减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2-3次，抽干，即得芦丁精品，称重计算提取率.(三)芦丁的水解1. 取精制芦丁 2 g，尽量研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%硫酸250ml，于 直火加热微沸回流 小时，放冷2. 减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，称重g；滤液保留作糖部分的鉴定。3. 取水解母液约20ml，小心地用BaOH细粉中和至近中性，自然过滤，滤液蒸 干，加23ml乙醇溶解，作为糖的供试液。(四)检识1. 理化鉴别(1).莫氏(Molish)反
7、应取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇溶解，再加 10% 0-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观 察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。(2) .盐酸-镁粉反应取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁 粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。(3) .醋酸镁纸片反应取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲 醇溶液两滴，黄酮类应呈黄色荧光。紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。(4).三氯化铝纸片反应取两张滤纸，分别滴两滴芦丁和槲皮素的乙醇溶液，然后各加
8、1%三氯化铝甲醇溶液两滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。紫外灯下观察荧光的变化，并记录 现象。2. 色谱鉴定(1) 芦丁和槲皮素的纸色谱支持剂：新华层析滤纸点 样：1.自制精制芦丁乙醇液2.自制精制槲皮素乙醇液对照品：3.芦丁标准品乙醇液4. 槲皮素标准品乙醇液展开剂：正丁醇一醋酸一水(4:1:5)(上层)或15%醋酸水溶液显 色：(1)可见光下显黄色斑点，紫外光下观察荧光斑点。(2) 用氨熏后再观察。(3) 喷1%三氯化铝试液后再观察。(2) 糖的纸色谱鉴定支持剂：新华层析滤纸点 样：自制糖的供试品溶液及葡萄糖、鼠李糖对照品展开剂：正丁醇一醋酸一水(4:1:5)(上层)显色剂：苯胺一邻苯二甲酸试剂(喷后105C烘10min显色)画出图谱，计算Rf值。
