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1、生活饮用水中氯硝柳胺含量的高效液相色谱测定方法编 制 说 明1、项目简介本项目系环境卫生标准委员会卫生标准制（修）订项目，该项目研制类别为制定。扬州市疾病预防控制中心为该标准制定单位，主要参与人如下：吴飞、姜友富、邵爱梅、夏俊鹏。测定方法验证单位：江苏省疾病预防控制中心、南京市疾病预防控制中心、镇江市疾病预防控制中心。标准制定主要通过：1.资料查询；2.实验室检测条件摸索、干扰实验、精密度准确度实试验；3.样品存放条件实验；4.文件起草等阶段。2、国内外情况氯硝柳胺(niclosamide),是世界卫生组织推荐的高效灭螺药物，在我国作为灭螺药物应用多年，然而氯硝柳胺对于非目标生物的毒性是值得关
2、注的一个问题，持续大范围、大剂量使用是否会对生活饮用水产生影响，已越来越引起人们的重视。目前已见报道的氯硝柳胺的分析方法有电位滴定法、分光光度计法和高效液相色谱法，但这些方法仅适用于氯硝柳胺和氯硝柳胺乙醇胺盐的原药纯度检测，对于生活饮用水中氯硝柳胺残留量的检测尚未有相关报导。本文根据氯硝柳胺的理化性质，在盐酸酸性条件下，加入氯化钠，以二氯甲烷为萃取剂，建立了生活饮用水中氯硝柳胺残留量的高效液相色测定方法。3、采用本方法理由本方法根据氯硝柳胺的理化性质，采用磨口塞玻璃瓶采集水样，在盐酸酸性条件下，加入氯化钠，以二氯甲烷为萃取剂，经Kromasil -C18柱（4.6250mm，5m，100）分离
3、，配有二极管阵列检测器的高效液相色谱检测。本方法选择性强、线性范围宽、定量准确、精密度高、准确度好，方法的最低检测质量2ng ，若取200mL水样测定则最低检出质量浓度为0.001mg/L，测定下限浓度为0.0003 mg/L。4、本法的主要技术指标4.1色谱条件的选择：4.1.1流动相条件的选择在其他实验条件相同的情况下比较了不同配比的甲醇+水与乙腈+水两种流动相；在甲醇:水=85:15条件下峰型对称性和分离效果都较好，且甲醇毒性小于乙腈，因此，本方法选用甲醇:水=85:15作为流动相。4.1.2检测波长的选择 本方法利用二极管阵列检测器对氯硝柳胺在190700nm之间进行波长扫描，在本流动
4、相条件下氯硝柳胺在330nm处有最大吸收波长,本实验采用甲醇作为溶剂定容处理样品,甲醇的紫外吸收波长在190nm200nm，对本实验无干扰，故选用有较强吸收的330nm作为本方法的检测波长。4.2水样前处理方法的选择在盐酸酸性条件下，分别选择二氯甲烷液液萃取方法、石油醚液液萃取方法和C18小柱吸附甲醇洗脱的固相萃取方法，对相同浓度的加标水样进行加标回收率对比实验，经色谱分析，结果表明二氯甲烷的萃取回收率优与其它三种方法，通过进一步实验发现在加入氯化钠的条件下能降低氯硝柳胺在水相溶解度，有效提高二氯甲烷萃取率，故本方法选择在盐酸酸性条件，加入氯化钠，以二氯甲烷作为萃取剂，提取、浓缩水样。4.3方
5、法的线性和检测限以氯硝柳胺浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为=38335+227.92，相关系数r为0.9999，表明在0.225 mg/L范围内呈良好线性关系，本方法最低检测质量为2ng ，以3倍噪声信号比计算，最低检测限为0.06mg/L。若取200ml水样测定，最低检测浓度为0.0003 mg/L，最低检出质量浓度为0.001mg/L。以下为氯硝柳胺标准色谱图（图1）图1 氯硝柳胺标准色谱图4.4方法的准确度和精密度试验在200ml水样中分别加入4g 、40g 、200g （相当于水样中氯硝柳胺浓度为0.02mg/L、0.2mg/L、1.0mg/L）低、中、高三个
6、浓度的氯硝柳胺标准溶液，按上述实验条件分别进行6次测定，测定结果见表1表1 样品加标回收率和精密度试验（n=6）加标浓度（mg/L）加标测定值（mg/L）（n=6）加标测定均值（mg/L）加标回收率（%）RSD（%）0.020.020630.020370.019000.019980.019600.020650.0200495.02103.33.240.200.20670.19270.19270.20040.20320.19790.198996.35103.42.851.000.99161.01130.97651.00670.99570.99570.996497.65101.11.374.5样品
7、测定使用本方法对自来水样进行测定，其中样品加标色谱图见图2图2 样品加标色谱图4.6干扰试验同时取末梢自来水和水箱水样，测定余氯含量，末梢水为0.3 mg/L，水箱水为0.05 mg/L,分别在上述两种水中加入氯硝柳胺标准，配制成0.2 mg/L的加标水样，分析余氯对氯硝柳胺检测的影响。结果见表2表2 水样干扰试验水样名称加标浓度(mg/L）第1天测定结果（mg/L）第2天测定结果（mg/L）第3天测定结果（mg/L）下降至（%）自来水0.20.1920.1140.061730.9水箱水0.20.1940.1860.18391.5实验表明氯硝柳胺可在氯消毒过的水中降解，通过加入硫代硫酸钠可消除
8、氯带来的影响。水样采集后应尽快测定。4.7稳定性试验用二氯甲烷萃取1.0 mg/L的加标水样，萃取液于4冰箱保存。分别于1、3、5天测定，结果表明在低温下保存5天后氯硝柳胺无显著变化。结果见表3表3 氯硝柳胺稳定性试验保存天数1天(mg/L）3天(mg/L）5天(mg/L)10.98940.97700.998020.98191.0101.02630.99640.99471.016平均值(mg/L)0.98920.99391.013回收率（%）98.9299.39101.34.8三实验室间验证比对实验 分别请江苏省疾病预防控制中心、南京市疾病预防控制中心、镇江市疾病预防控制中心的三个实验室方法验
9、证实验,，实验结果见表4。表4三实验室方法验证实验 验证单位加标浓度（mg/L）加标测定值（mg/L）加标测定均值（mg/L）加标回收率（%）RSD（%）123456江苏省疾病预防控制中心0.020.019490.020680.019820.019350.021260.020610.02020.200.19420.19450.19660.20370.20420.19720.19841.000.99581.01270.97491.01070.99550.99440.9979南京市疾病预防控制中心0.020.019270.020540.019730.019040.020590.020720.019
10、9895.02103.91.523.770.200.19870.19650.19370.20140.20440.19920.1991.001.01340.98231.0130.97810.99690.98750.9967镇江市疾病预防控制中心0.020.020780.020620.019840.020530.021070.019020.020310.200.19490.19720.20420.19530.20010.20160.20721.000.98751.02010.97511.01370.98950.97950.9972综上所述，本方法根据氯硝柳胺的理化性质，采用磨口塞玻璃瓶采集水样，在
11、盐酸酸性条件下，加入氯化钠，以二氯甲烷为萃取剂，经Kromasil -C18柱（4.6250mm，5m，100）分离，配有二极管阵列检测器的高效液相色谱检测。本方法具有选择性强、线性范围宽、定量准确、精密度高、准确度好。经三个实验室对浓度范围为0.01 mg/L1.25 mg/L的加标水样重复六次测定，其相对标准偏差均小于5%，加标回收率为95.02%103.9%，适用于生活饮用水中氯硝柳胺残留量检测。参考文献1.刘榆华，罗秉荣，王尚位等用化学检测法测定氯硝柳胺含量J大理学院学报，2004，31(5)：48-492. 王娇娜 ，龙海 ，肖同等，HPLC测定氯硝柳胺的含量J华西医药杂志，2006，21（4）：401-402.3.嵇正平，姜友富，汪世新等萃取光度法测定水中氯硝柳胺含量J中国血吸虫病防治杂志，2005，17(6)：l30131
