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1、常用免疫组化染色方法SP法免疫组化染色1. 原理：链霉素抗生物素蛋白（SA）是从链霉素中分 离出的蛋白质，穿透组织的能力比ABC、PAP复合物大，反 应速度快，它含有四个亚基，每个亚基都有与生物素（Biotin） 连接的部位，且二者间有极强的亲和力，SA的等电位接近 于6.5，近中性，而卵白素（Avidin）为10，因此，SA几乎 不与组织中的内源性凝集样物质发生非特异性结合，使用链 霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶放大系统，即可产生低背景、 高放大效果。S-P采用生物素标记的第二抗体与链霉素抗生 物素蛋白连接的过氧化物酶及基质素混合液来测定细胞和 组织中的抗原。2. 基本染色方法：（1）石蜡切片
2、脱蜡至水。（2）3%H202室温孵育510分钟，以消除内源性过 氧化物酶的活性。（3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，（如需采用抗原修复，可在此步后进行）。(4) 510%正常山羊血清(PBS稀释)封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或 一抗工作液，37C孵育12小时或4C过夜。(5) PBS冲洗，5分钟乂3次。(6 )滴加适当比例稀释的生物素标记二抗 (1%BSA-PBS稀释)，37C孵育1030分钟；或滴加第二代 生物素标记二抗工作液，37C或室温孵育1030分钟。(7) PBS冲洗，5分钟乂3次。(8 )滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS 稀释)，37C孵育1030分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵 白素工作液，37C或室温孵育1030分钟。(9) PBS冲洗，5分钟乂3次。(10) 显色剂显色(DAB或AEC)。(11) 自来水充分冲洗，复染，封片。(附，冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片48um， 室温放置30分钟后，入4C丙酮固定10分钟，PBS洗，5 分钟乂3次。用3%过氧化氢孵育510分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟X2次。下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤）。
