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1、病原性球菌学习要点： 掌握：葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、淋病奈瑟菌的生物学特性、致病性及微生物检验。 熟悉：脑膜炎奈瑟菌生物学性状、致病性及微生物检验。 了解：微球菌属的生物学特性及微生物检验。一、葡萄球菌属 1生物学特性 (1)形态染色：球形或略呈椭圆形，典型的葡萄球菌排列成葡萄串状，无鞭毛，无芽胞，革兰染色为阳性。 (2)培养特性：营养要求不高，在普通基础培养基上生长良好，兼性厌氧或需氧，最适生长温度为37，最适pH值为7.4，与普通平板上可形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，菌落因菌种不同而呈现金黄色、白色或柠檬色，色素为脂溶性。血平板上，致病菌株可形成溶血现象。
2、 (3)生化反应：触酶阳性，多数菌株能够分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气，致病菌株能分解甘露醇。 (4)抗原结构：主要有葡萄球菌A蛋白(SPA)，荚膜抗原及多糖抗原。 (5)抵抗力：在无芽胞的细菌中抵抗力最强。对青霉素等抗生素敏感。但是耐药菌株逐年增多，已成为医院内感染最常见的致病菌。 (6)分类：根据色素、生化反应等表型的不同，葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。 2临床特征 (1)致病物质：凝固酶、耐热核酸酶等。凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。毒素包括葡萄球菌溶素，杀白细胞素，肠毒素，表皮剥脱毒素，毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)。 (2)所致
3、疾病：有侵袭性和毒素性两种类型。侵袭性疾病主要引起化脓性炎症，是葡萄球菌引起的最常见感染。如局部感染的疖、痈、毛囊炎等皮肤及肺炎等内脏器官感染；全身感染的败血症、脓毒血症等。毒素性疾病由葡萄球菌产生的有关外毒素引起，主要有食物中毒假膜性肠炎烫伤样皮肤综合征毒性休克综合征。 (3)免疫性：人类对葡萄球菌有一定的天然免疫力。病愈后免疫力不牢固。 3微生物检验 (1)标本采集：不同病型采集不同标本。化脓性病灶采集脓汁、渗出液；疑为败血症采集血液；脑膜炎采集脑脊液；食物中毒采集病人呕吐物、可疑食物和粪便等，采集时避免病灶周围正常菌群污染。 (2)检验程序及方法： 1)直接涂片镜检：无菌体液标本经染色直
4、接显微镜镜检后，发现有革兰阳性球菌，可做出“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”的初步报告。 2)分离培养和鉴定：不同标本经处理后接种血琼脂平板。经37孵育1824h，观察菌落形态，致病葡萄球菌有溶血现象。挑选可疑菌落进一步作形态、生化等方面的鉴定。鉴定试验方法及要点如下： 血浆凝固酶试验，鉴定致病性葡萄球菌； 耐热核酸酶试验，用于检测金黄色葡萄球菌产生的耐热核酸酶； 甘露醇发酵试验，金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇，该试验为阳性； SPA的检测，是鉴定金黄色葡萄球菌的指标之一； 触酶试验，葡萄球菌该试验阴性，以区别于链球菌； 肠毒素的测定，将食物中毒病人的呕吐物或剩余物接种于肉汤管中，孵育后取上清液注
5、射至68周龄的幼猫腹腔，若于4h内发生呕吐、腹泻、体温升高、死亡等现象，提示有肠毒素存在。二、链球菌属 1生物学性状 (1)形态与染色：球形或椭圆形，其中链球菌呈链状排列，革兰染色阳性，无鞭毛，无芽胞。 (2)培养特性：营养要求较高，在血琼脂平板上可形成灰白色、圆形细小菌落，不同群链球菌可出现不同溶血现象，即溶血环，溶血环及不溶血。 (3)生化反应：触酶阴性，一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两个特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。 (4)抗原结构：主要有蛋白质抗原，多糖抗原，核蛋白抗原。其中M蛋白抗原与致病性有关，多糖抗原又称为C抗原，根据C抗原不同，将链球菌分为20个群，核蛋白抗原无
6、特异性。 (5)分类：按链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将其分为20个血清群(AH，KV)，对人致病的链球菌约90属于A群，即化脓性链球菌。 (6)抵抗力：不强，对常用消毒剂抗菌药物均敏感。青霉素为首选治疗药物，极少发现耐青霉素的菌株。 2临床特征 (1)致病物质：A群链球菌致病力最强，有较强的侵袭力，是最常见的致病性链球菌。主要有链球菌溶血素：分为链球菌溶血素O(SLO)和链球菌溶血素S(SLS)两种。致热外毒素。侵袭性物质：主要包括脂磷壁酸、纤维黏连蛋白结合蛋白、M蛋白等黏附素以及透明质酸酶、链激酶、链道酶等侵袭性酶。 (2)所致疾病及临床表现：A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的90，
7、可引起化脓性、中毒性和超敏反应性三类疾病。化脓性炎症猩红热链球菌性超敏反应性疾病。 (3)免疫性：人体感染链球菌后血清中可出现多种抗体，但因链球菌的型别多，各型间无交叉免疫力，故常反复感染。 3微生物检验 (1)标本采集：根据不同疾病的特点取不同标本。 (2)检验程序及方法： 1)直接涂片镜检：无污染标本经直接涂片革兰染色后镜检，发现有典型的链状排列革兰阳性球菌时，可初步报告。 2)分离培养和鉴定：采用血琼脂平板培养有助于识别链球菌的溶血特性和鉴定，在5C02环境下，经37孵育24h，观察菌落性状，取可疑菌落做进一步鉴定。主要鉴定试验方法及要点如下： 杆菌肽试验敏感试验，出现抑菌环者即可初步鉴
8、定为A群链球菌。 Optochin敏感试验，抑菌环14mm为敏感，肺炎链球菌抑菌环为敏感，其他链球菌不出现或抑菌环14mm，本试验较胆盐溶菌试验鉴别价值更可靠。 胆盐溶菌试验，肺炎链球菌阳性，草绿色链球菌阴性。 血清学鉴定试验，目前应用较普遍的是商品化试剂盒STREPTEX，它主要用于检测链球菌群的特异性抗原，出现凝集者为阳性。 抗SLO试验，常用于风湿性关节炎、急性肾小球肾炎的辅助诊断。三、肺炎链球菌 1生物学特性：为革兰阳性球菌，呈矛尖状，成双排列，有荚膜，无鞭毛，无芽胞。营养要求较高，兼性厌氧菌，可形成中心下陷的脐窝状的菌落，有自溶现象。可分解多种糖类，产酸不产气，多数菌株分解菊糖，胆汁
9、溶解试验阳性，Optochin敏感试验阳性，可作为肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别。其抗原成分包括荚膜多糖，菌体多糖，M蛋白。抵抗力弱，有荚膜的抵抗力强，对一般消毒剂敏感。对青霉素、红霉素敏感。 2临床特征：肺炎链球菌是一种条件致病菌，可以引起大叶性肺炎，其次是支气管炎，可继发胸膜炎、脓胸，还可引起中耳炎、乳突炎和脑膜炎。 3微生物检验 (1)标本的采集：根据病种采集不同的标本。 (2)检验程序及方法： 1）直接涂片检查，除血液标本，其他标本均可做直接涂片检查。如见革兰阳性矛尖状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初诊，并报告“找到肺炎链球菌”。 2）分离培养，血液、脑脊液增菌培养后，
10、呈均匀浑浊，且有绿色荧光。血液、脑脊液增菌后，脓汁或痰标本直接接种于血琼脂，置510CO2环境中培养后观察菌落，并取可疑菌落做进一步菊糖发酵实训，胆盐溶菌试验和Optochin敏感试验。 3）动物实训，小白鼠对肺炎链球菌极为敏感，通常在接种后1236h，因败血症而死亡。 4）荚膜肿胀试验：将接种待检菌的小白鼠腹腔液置于玻片上，混入不稀释的抗荚膜抗原的免疫血清，加少量碱性美蓝染色液后，覆盖玻片，用油镜检查，如发现荚膜出现肿胀为阳性。四、肠球菌属 1生物学特性：肠球菌为G+，呈单个、成双或短链状排列，无芽胞，无荚膜，营养要求较高，在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、圆形菌落，并伴有或不溶血现
11、象。能在高盐、高碱条件(pH96)，高胆汁(40)培养基上和1045C的环境下生长。触酶阴性，胆汁七叶苷水解、万古霉素敏感性及吡咯烷基芳基酰胺酶均为阳性。 2临床特征：肠球菌所致的感染中最常见为尿路感染，而其中绝大部分为院内感染，亦是引起老年人和严重基础疾病患者败血症的常见病原菌。近年来肠球菌耐药菌株及其所致的感染率增加。 3微生物检验 (1)标本的采集：根据病种的不同，可采集尿液、血液及脓性分泌物等标本。 (2)检验程序及方法： 1)直接涂片：可见单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰阳性球菌。 2)分离培养：用血平板或选择性培养基，如叠氮胆汁七叶苷琼脂进行分离培养，该培养基可抑制革兰阴性杆菌的
12、生长，而长出的肠球菌菌落为黑色，便于识别。 3)鉴定：主要试验有 PYR试验。本法是一种快速筛选鉴定试验。用于鉴定能产生吡咯烷基芳基酰胺酶的细菌，如肠球菌、链球菌属中的化脓性链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。 胆汁一七叶苷试验。D群链球菌和肠球菌能在含有胆盐的培养基中水解七叶苷，其生成物与铁离子反应生成黑色化合物，97的肠球菌在24h培养后呈阳性反应，72h后100为阳性。但本法不能区别肠球菌和非肠球菌，进一步鉴定需做盐耐受试验。 盐耐受试验。肠球菌能在含6.5NaCl的心浸液肉汤中生长，本法结合胆汁-七叶苷试验可鉴定肠球菌。五、奈瑟菌属 1脑膜炎奈瑟菌 (1)生物学特性 形态与
13、染色：为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，新分离的菌株有荚膜和菌毛，无芽胞，无鞭毛。 培养特性：营养要求高，最适温度为37C，最适pH为7.47.6。在巧克力平板上菌落为蓝灰色、半透明、光滑、湿润、扁平、边缘整齐呈露滴状；在血平板上菌落不溶血，无色素；卵黄双抗(EPV)培养基菌落为无色，较大且光滑、湿润、扁平，边缘整齐等。 生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气(因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别)。 抗原及分型：根据群特异性荚膜多糖抗原不同，将该菌分为13个血清群，其中H、I、K血清群是由我国发现的，我国流行的菌株以A群为主。 抵抗力：抵抗力弱，对干燥、热、寒冷、紫外
14、线、消毒剂等均十分敏感。对磺胺类、青霉素、链霉素均很敏感。 (2)临床特征 致病物质：主要有内毒素、荚膜和菌毛。 所致疾病及临床表现：本菌主要引起流行性脑脊髓膜炎，传染源是病人和带菌者，经飞沫传播，主要临床症状为脑膜刺激征，严重者可死亡，病死率极高。 免疫性：病后可产生群特异性抗体，但不持久。 (3)微生物检验 1)标本采集：根据临床病程采集不同标本。采集的标本应立即送检或用血平板进行床旁接种后立即孵育。 2)检验程序及方法： 直接涂片检查：取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色或美蓝染色镜检，若发现中性粒细胞内(或胞外)革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初步报告。 分离
15、培养：增菌后接种于巧克力琼脂或EPV琼脂，置510CO2环境中培养后观察菌落，取可疑菌落涂片，并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。 鉴定：通过直接凝集试验鉴定血清型别，及氧化酶、糖类发酵和触酶试验等生化反应作出鉴定。总之，如直接镜检形态为革兰染色阴性双球菌时可初步报告，经分离培养后见菌落特征典型、分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸，氧化酶试验阳性、血清凝集试验阳性，即可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。 2淋病奈瑟菌 (1)生物学特性：本菌的形态常呈球形或肾形，成对排列，形似咖啡豆，革兰阴性。新分离的菌株可有荚膜和菌毛，无芽胞和鞭毛。需氧生长，营养要求较高，只能在巧克力琼脂培养基中生长，初次分离时须在510CO2环境
