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1、精品论文大集合扶正冲剂对小鼠免疫功能的影响李春雨，杨永茂，李佳川，缪舒益，孟宪丽成都中医药大学，四川成都（611730)E-mail: 摘要:目的：研究扶正冲剂对小鼠免疫功能的影响。方法：采用腹腔注射环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型，观察扶正冲剂对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能、DNCB 致小鼠迟发型超敏 反应的影响及对正常小鼠血清溶血素抗体生成的影响。结果：扶正冲剂能明显增强小鼠单核 巨噬细胞的吞噬能力；有明显的恢复小鼠迟发型超敏反应的作用；能明显提高小鼠血清溶血 素抗体含量。结论：提示扶正冲剂对小鼠机体非特性免疫、细胞免疫、体液免疫功能有一定 的调节作用。关键词:扶正冲剂；小鼠；免疫功能；实验研究
2、扶正冲剂是以黄芪为主药配伍其它中药，经现代技术手段制备而成的中药复方制剂，临 床上拟用于治疗小儿反复呼吸道感染（RRTI）。本研究拟从非特异性免疫、体液免疫和细胞 免疫探讨扶正冲剂对小鼠免疫功能的调节作用，为进一步的药效学和机理研究提供实验依 据。1. 实验材料1.1 实验药物扶正冲剂浸膏，由成都中医药大学民族医药学院民族医药研究所提供，该药成人的日用 剂量为 10g/60kg(以原药材计)，即成人每日每千克体重用量为 0.17g（成人均以 60kg 体重计 算），批号：071210；注射用环磷酰胺，由江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：07092521； 盐酸左旋咪唑片，由重庆市青阳药业有限
3、公司生产，批号：070403。1.2 实验动物昆明种小鼠，1822g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，合格证 号均为：SCXK（川）2004-15。英国种豚鼠，200300g，雌雄各半，由四川省实验动物专 委会养殖场提供，许可证号为 SCXK（川）2004-14。1.3 实验试剂刚果红试剂,上海化学试剂分装厂,批号:870815；氯化钠注射液，由太极集团西南药业股 份有限公司生产，批号：07091025；无水碳酸钠，分析纯 AR，由成都市科龙化工试剂厂生 产，批号：20070401；EDTA-2K（乙二胺四乙酸二钾盐），由天津市科密欧化学试剂有限公 司生产，批号：2007090
4、5；2，4二硝基氯苯（DNCB），由中国上海试剂一厂生产，批号：890901；鸡红细胞（CRBC）悬液，鸡血取自成都温江天府菜市场，自行配置。1.4 实验仪器Spectrumlab22PC 型分光光度计，上海棱光技术有限公司； Thermo 可调式移液器，上 海雷勃分析仪器有限公司。1.5 实验场地国家中医药管理局中药药理三级科研实验室，NO：TCM-03-043;成都中医药大学药学院- 1 -中药药理实验动物观察室，许可证号：川实动管第 015 号。1.6 统计方法用 SPSS15.0 统计软件进行统计分析。计量数据均用（x- s）表示，满足正态性用单因素 方差分析法进行组间比较，同时进行方
5、差齐性检验（若方差齐性，用 LSD 法；方差不齐性， 用 Tamhanes T2 法）。不满足正态性用非参数检验中的多组秩和检验（Kruskal-Wallis H 法）。2. 方法与结果2.1 对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响2.1.1 实验方法KM 小鼠 60 只，雌雄各半，按体重分层，随机分为 6 组，即空白对照组、模型对照组、 阳性对照组（盐酸左旋咪唑）、扶正冲剂高、中、低剂量组，每组 10 只，各受试药物组小鼠 均采取灌胃给药,空白对照组和模型对照组小鼠给予等容量的蒸馏水，每天 1 次，连续给药 7 天。各组小鼠于开始给药的第 3 天给药后 1 小时，每鼠腹腔注射环磷酰胺 100mg/
6、kg 进行免 疫低下模型的复制。造模后继续灌胃给药 4 日，末次给药后 60min，尾静脉注射 1%刚果红 生理盐水溶液，给药容量为 0.1ml/10g（体重），于注射后 2min 和 12min 用毛细玻管（预先 用 EDTA-2K 溶液湿润）分别从眼眶静脉丛取血 20l，溶于 3ml0.1%碳酸钠溶液中摇匀，置 分光光度计在波长 590nm 下比色，测定光密度值（OD 值），最后将小鼠脱颈椎处死，解剖 取肝脏和脾脏用电子天平称重1。按下式计算廓清指数 K 和校正廓清指数 。实验结果见表1。廓清指数 K 和校正廓清指数 a 计算公式:logOD1-logOD2K=100%t1-t23 K 体
7、重=100%肝重+脾重表 1对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响（-s）x组 别剂 量（g 生药/kg）动物数（只）吞噬指数（K 值,10-3）吞噬活性（ 值）空白对照组106.363.74*3.590.91*模型对照组103.252.712.340.79左旋咪唑组37.5mg107.793.36*3.590.80*扶正冲剂高剂量组10107.574.52*3.730.84*扶正冲剂中剂量组5105.672.463.030.57扶正冲剂低剂量组2.5105.174.232.760.72注：与模型对照组比较，* P0.05,*P0.01.2.1.2 结果表 1 结果表明：与模型对照组比较，扶正冲剂各
8、剂量均有一定的增强单核巨噬细胞吞噬 能力的作用趋势，且呈一定的剂量依赖性。扶正冲剂高剂量能明显增强环磷酰胺致免疫功能 低下小鼠的吞噬指数和吞噬活性（P0.05P0.01），提示扶正冲剂对小鼠非特异性免疫功 能有一定的调节作用。2.2 对二硝基氯苯（DNCB）致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响2.2.1 实验方法KM 小鼠 60 只，雌雄各半，按体重分层，随机分为 6 组，即空白对照组、模型对照组、 阳性对照组（盐酸左旋咪唑）、扶正冲剂高、中、低剂量组，每组 10 只，各受试药物组小鼠 均采取灌胃给药,空白对照组和模型对照组小鼠给予等容量的蒸馏水，每天 1 次，连续给药10 天。各组小鼠于开始给药的
9、第 3 天给药后 1 小时，每鼠腹腔注射环磷酰胺 100mg/kg 进行 免疫低下模型的复制。第 4 天给药后 1 小时以 8%硫化钠溶液脱毛剂在小鼠腹部脱毛，脱毛 范围 33cm2，将 5%DNCB 在脱毛处致敏，每鼠 10l，涂匀。各组小鼠继续给药致敏后第 6 天用 2.5%DNCB，10l 均匀涂抹于小鼠的左耳两面进行攻击，24 小时后颈椎脱臼处死小鼠， 立即剪下左右两耳郭，用打孔器在两耳相同部位取下直径 5mm 的耳片称重，以左右耳片重 量之差值即肿胀度（mg）做为小鼠迟发型超敏反应强度的指标23。实验结果见表 2。xs表 2对 DNCB 致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响（- ）剂 量
10、组别（g 生药/kg）动物数（只）肿胀度（mg）空白对照组106.9.2.1*模型对照组103.91.6左旋咪唑组37.5mg106.42.1*扶正冲剂高剂量组10106.32.1*扶正冲剂中剂量组5106.21.6*扶正冲剂低剂量组2.5105.42.4注：与模型对照组比较，* P0.05,*P0.01.2.2.2 结果表 2 结果表明：与空白对照组比较，扶正冲剂各剂量均有恢复免疫功能低下小鼠的迟发 型超敏反应的作用趋势，且呈一定的剂量依赖性。扶正冲剂高、中剂量能明显恢复免疫功能 低下小鼠的迟发型超敏反应（P0.05）。提示扶正冲剂对小鼠细胞免疫功能有一定的调节作 用。2.3 对小鼠血清溶血
11、素水平的影响2.3.1 实验方法KM 小鼠 50 只，雌雄各半，按体重分层，随机分为 5 组，即空白对照组、阳性对照组（盐酸左旋咪唑）、扶正冲剂高、中、低剂量组，每组 10 只，各受试药物组小鼠均采取灌胃 给药,空白对照组小鼠给予等容量的蒸馏水，每天 1 次，连续给药 10 天。各组小鼠于开始给 药的第 3 天，每鼠腹腔注射 5%鸡红细胞的生理盐水悬浮液 0.2ml 进行免疫。免疫后继续灌 胃给药 7 日，末次给药后 24 小时各鼠摘取眼球取血，静置 1 小时，3000 转离心 10 分钟，取血清用生理盐水稀释 100 倍，取稀释血清 2ml，与 5%鸡红细胞的生理盐水悬浮液 1ml，10%补
12、体 1ml 混合（补体的制备：取 2 只豚鼠的血，静置 1 小时，3000 转离心 10 分钟，分 离血清，混合，然后用生理盐水配成 10%备用），37恒温箱中保温 30min 后，置 0冰箱 内终止反应。然后 2000 转离心 10 分钟，取上清液于分光光度计 540nm 处比色，测定光密 度值（OD 值）,以光密度（OD）值作为血清素抗体含量的指标4 5。实验结果见表 3。x表 3对小鼠血清溶血素抗体生成的影响（-s）剂 量 组 别（g 生药/kg）动物数（只）OD 值空白对照组 10 0.41420.383 左旋咪唑组37.5mg101.18530.504* 扶正冲剂高剂量组 10101
13、.31040.623* 扶正冲剂中剂量组 5101.02640.607* 扶正冲剂低剂量组2.510 0.85380.643注：与空白对照组比较，* P0.05,*P0.01.2.3.2 结果表 3 结果表明：与空白对照组比较，扶正冲剂各剂量均有一定的提高小鼠血清溶血素抗 体水平的作用趋势，且呈一定的剂量依赖性。扶正冲剂高、中剂量能明显提高小鼠血清溶血 素抗体水平（P0.05）。提示扶正冲剂对小鼠体液免疫功能有一定的调节作用。3. 讨论机体的免疫系统由特异性免疫和非特异性免疫所组成。非特异性免疫是特异性免疫的基 础,特异性免疫所产生的免疫物质又能增强非特异性免疫的作用,因此,增强机体的非特异性
14、 免疫对提高机体的整个免疫功能意义重大。巨噬细胞具有吞噬异物、处理抗原等多种功能。 CRBC 对鼠类是一种较强的抗原性异物,当其被注入小鼠腹腔后,可引起腹腔巨噬细胞聚集并 吞噬,这是一项机体非特异性免疫功能的主要指标,因此可用于评价药物对机体非特异性免疫 功能的影响。血清溶血素反映了机体体液免疫能力,溶血素的含量与机体体液免疫能力呈正 相关。DNCB 诱导的小鼠迟发型超敏反应是由特异性致敏效应细胞介导的细胞免疫反应, 其中的细胞在排斥移植物抗宿主病、自身免疫和肿瘤免疫等方面起着关键作用,是考察药 物对细胞免疫功能影响常用方法之一6。本研究结果表明，扶正冲剂能明显的提高小鼠机体单核巨噬细胞的吞噬能力；升高小鼠 血清溶血素抗体的含量；恢复免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应，提示扶正冲剂对机体非 特性免疫、体液免疫、细胞免疫功能有一定的调节作用。参考文献1柴秋彦,韩文兰,李百强,等.肝愈胶囊对小鼠免疫功能的影响J, 时珍国医国药,2004,15(8):472-475. 2王伟明,张树明. 芪风固表颗粒对小鼠免疫功能影响的实验研究J,黑龙江中医药,2005,2:37-4
