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1、毕业论文诚信声明 本人郑重声明：所呈交的毕业论文二甲酸钾对断奶仔猪肠道菌群的影响是本人在指导老师的指导下，独立研究、写作的成果。论文中所引用是他人的无论以何种方式发布的文字、研究成果，均在论文中以明确方式标明。 本声明的法律结果由本人独自承担。 毕业论文作者签名： 年 月 日成绩：江西科技师范大学 毕业设计（论文）题目（中文）：二甲酸钾对断奶仔猪肠道菌群的影响 题目（外文）：The effect of dimethyl potassium on the intestinal flora of the piglets 院 （系）：生命科学学院 专 业：食品科学与工程 学 生 姓 名：樊友金 学
2、号：20081172 指 导 教 师：黄建华 2012年5月10 日 目 录1. 引言12. 材料与方法22.1 试验材料22.1.1 二甲酸钾和培养基22.1.2 试验动物及分组32.1.3 仪器与试剂32.1.4 试验日粮42.2 试验方法52.2.1 乳酸杆菌的测定52.2.2 大肠杆菌的测定62.2.4 计算结果93. 讨论94. 结论10参考文献10 二甲酸钾对断奶仔猪肠道菌群的影响摘要：大量研究表明， 二甲酸钾对动物体内肠道有益菌(乳酸杆菌)的繁殖抑制不明显，又能够有效减少肠道病原菌（大肠杆菌）数量，提高肠道黏膜的完整性，调节动物免疫反应， 从而提高动物的生产性能。本试验旨在研究二
3、甲酸钾对断奶仔猪肠道菌群的影响，选择21日龄体况良好 (杜洛克长白大约)三元杂交断奶仔猪36 头,按窝别相同原则分为 4 个处理，每个处理3个重复，每个重复3头,分别饲喂 A (不添加二甲酸钾)、B (添加 0.7% 二甲酸钾)、C (添 1.1% 二甲酸钾)和 D (添加 1.5 % 二甲酸钾) 4 种日粮,考察二甲酸钾对断奶仔猪肠道菌群的影响。试验结果表明:（1）断奶仔猪日粮中二甲酸钾添加量为0.7%、1.1%、1.5%时，试验猪肠道乳酸杆菌与日粮中没有添加二甲酸钾相比分别提高了40.0%（P0.1）、26.7%（P0.1）和33.3%（P0.1）；（2）日粮中添加1.1%的二甲酸钾试验猪
4、肠道中大肠杆菌数低于没有添加组，低于35.0%（P0.1）；（3）日粮中添加1.1%的二甲酸钾试验猪肠道中乳酸杆菌与大肠杆菌数比值将近高出没有添加二甲酸钾试验组一倍（P0.1）。关键字：二甲酸钾；断奶仔猪；大肠杆菌；乳酸杆菌1. 引言饲料用二甲酸钾的研究和开发起源自欧洲上世纪90年代中期。而二甲酸钾的化学结构早在上世纪初就被确定了，但是从此就停留在新奇学术发现而已。据报道，二甲酸钾具有抗细菌感染和提高饲料消化率的作用。对生长、肥育猪和哺乳母猪的促生长效果明显，能显著提高生产性能。猪生长性能试验和在欧洲的大规模应用显示，与抗生素促生长剂相比，不仅安全、无副作用，而且猪的日增重和饲料报酬获得可观、
5、稳定的改善。其次，简单的化学结构决定的安全性和纯结晶盐的物理性状决定的易用性成为受欢迎的另一个原因。 Hebeler等（2000）报道，日粮中添加1.8%二甲酸钾能降低断奶仔猪肠道中总厌氧菌、总需氧菌和大肠杆菌等的数量，乳酸杆菌与大肠杆菌的比例相对提高1。Papenbrock等（2005）发现在断奶仔猪日粮中添加二甲酸钾可以减少消化道大肠杆菌的数量，并可减少排泄物中沙门氏菌的数量，说明二甲酸钾的可能的作用机理是抑制有害微生物的繁衍，类似抗生素的作用2。Canibe，Steien等（2001）研究发现，在断奶仔猪日粮中添加二甲酸钾同时降低食糜和粪便中的大肠杆菌、乳酸菌和酵母菌数量，说明二甲酸钾对
6、各种微生物都有抑制或者杀灭作用，这与抗生素的作用机理类似3。王冉等（2001）的研究也得到类似的结果4。从2006年1月1日起，欧盟在动物饲料中全面禁止抗生素生长促进剂的使用。因此，寻找安全的非抗生素类动物促生长剂成为当今饲料添加剂研究的热点之一。作为抗生素促生长剂主要消费市场的养猪业和世界第一养猪大国，我国也投入了大量资源开展了包括有机酸、酶制剂、微生物添加剂、寡糖、植物提取物，甚至类激素物质在内的研究，试图解决该问题。而二甲酸钾作为类抗生素能解决上述问题。 猪的胃和小肠中最主要的细菌是大肠杆菌和乳酸杆菌，而在肠道的后段则存在着多种细菌。通过液态饲喂、日粮酸化、添加益生菌、益生素、酶制剂等营
7、养策略来建立猪正常的肠道菌群。苏勇等研究新生仔猪从7日龄至35日龄(断奶后2周)胃中细菌及乳酸杆菌的菌群变化，发现仔猪断奶后，引起断奶应激，仔猪断奶前、后胃中乳酸杆菌变化较小，胃pH值显著上升，并造成潜在病原菌在胃中大量增生5。吴忠良等研究表明，仔猪出生早期饲喂乳酸杆菌有明显的促生长效果，随着时间的推移这种效果逐渐降低，断奶后已无明显影响，可明显控制白痢的发生，断奶后饲喂低剂量乳酸杆菌，发病率和死亡率都明显降低，但高剂量使发病率和死亡率都明显增加6。乳酸杆菌是厌氧型细菌，乳酸杆菌能分解糖类产生乳酸，增加肠道的酸度，pH值降低，不耐酸的。吴向军等发现乳酸杆菌裂解物在体内外对金黄色葡萄球菌、大肠埃
8、希菌均有较强的抑制作用7。任庆娜等的试验研究结果说明将植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌应用到饲料中，乳酸菌可以抑制饲料中寄生曲霉的生长，从而避免黄曲霉毒素的产生，以及减少黄曲霉毒素对人类的危害8。李晓卉选用的肠道乳酸杆菌均来自健康成年羊，所选菌株中3株乳酸杆菌对大肠杆菌有明显的生物颉颃作用，说明肠道乳酸杆菌可显著抑制病原性大肠杆菌的生长繁殖9。通过在饲料中添加乳酸杆菌，研究乳酸杆菌对饲料中寄生曲霉菌孢子活性的影响，得出乳酸杆菌能通过改善饲料的有益菌，从而增加动物体内的有益菌，增强动物机体的抵抗力；在高温、高湿地区的饲料中加入植物乳酸杆菌可以防止霉菌的生长和产毒10。2. 材料与方法2.1 试验材
9、料2.1.1 二甲酸钾和培养基 二甲酸钾商品名福尔，为白色晶体状，有效成分含量为97，流散性好，易溶于水。在配合饲料中应用时，先用适量粉碎好的豆粕预混合，而后加入猪配合饲料中与其它原料一起混合。在仔猪饲料里分别配成质量含量百分比0%、0.7%、1.1%、1.5%。二甲酸钾添加量的设计（见表1）。表1 二甲酸钾添加量项目 添加物 质量含量百分比空白对照A组 二甲酸钾 0%处理B组 二甲酸钾 0.7%处理C组 二甲酸钾 1.1%处理D组 二甲酸钾 1.5%表2 MRS琼脂培养基的配方和EMB培养基的配方MRS培养基的配方 EMB培养基的配方组成成份 重量 （g/L） 组成成份 重量 （g/L）牛肉
10、蛋白粉 10 蛋白胨 10.0鱼肉汁 10 乳糖 10.0酵母浸出汁粉 5 磷酸氢二钾 2.0葡萄糖 20 琼脂 15.0 醋酸钠 5 伊红 0.4柠檬酸二铵 2 美蓝 0.065吐温-80 1 pH 6.97.3硫酸镁 0.58硫酸锰 0.28pH 6.26.4 注：两培养基各加入蒸馏水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，充分溶解，121高压灭菌15min。为油酸酯。2.1.2 试验动物及分组 选用4窝21日龄体况良好的(杜洛克长白大白)三元杂交仔猪（每窝体重生长状况都差不多且不少于9头），每窝挑选9头大小差不多的，4窝共36头。36头仔猪从产后的22天开始断奶。按窝别相同原则分为
11、4 个处理，每个处理3个重复，每个重复3头，都放有保温箱培养（实验过程中猪圈温度10C 保温箱温度20C）。2.1.3 仪器与试剂恒温培养箱（PYX-300Q-A 科力仪器）；无菌超净工作台（ZHJH-1214B 洁净等级100级 上海智城分析仪器制造有限公司）；JJ500型精密电子天平（美国双杰兄弟公司）；电热恒温保温箱（上海精密实验设备有限公司）； 立式高压蒸汽灭菌锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；通风厨；Milli-Q超纯水系统（美国Milli Pore公司）；实验所用试剂均为分析纯。 2.1.4 试验日粮采用单因子试验设计，共设4个处理组（日粮），分别为A组不添加二甲酸钾、B组添加0.7%的二甲酸钾、C组添加1.1%的二甲酸钾和D组添加1.5%的二甲酸钾，来考察不同比例的二甲酸钾对断奶仔猪肠道菌群的影响。选择36头21日龄体况良好的断奶仔猪，以窝别相同原则分为4个处理组。试验日粮标准参照美国NRC(1998)猪的营养需要，饲料类型为粉料，其组成及营养水平见表3和表4。表3 日粮组成日粮ABCD玉米%60606060去皮豆粕 %24.524.524.524.5豆油%2222肠膜蛋白%1.51.51.51.5鱼粉%2222葡萄糖%2222乳清粉%44444%预混料%4444合计100100100100表4 日粮营养指标日粮ABCD消化能33903390339033
