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1、期刊文献山石榴对小菜蛾拒食活性成分的初步研究*高广春1*，张偲2，李庆欣2(1 浙江省农业科学院 植物保护与微生物研究所，杭州 310021；*基金项目：中国科学院重要方向性项目（KZCX2-YW-216）*作者简介：高广春，博士后，研究方向为天然产物及其功能研究；E-mail：2 中国科学院南海海洋研究所 海洋药物重点实验室，广州 510301)摘要：山石榴是海南红树林区的一种常见红树伴生植物。为了从该植物中寻找对小菜蛾具有良好拒食活性的化学成分开发成为高效植物源农药，本研究运用大孔吸附树脂层析、常压正相和反相硅胶柱层析以及制备高效液相色谱对其正丁醇萃取部位进行分离纯化得到了2个单体化合物，
2、通过酸水解、核磁共振波谱和质谱对化合物的结构进行了鉴定，分别为Arjunetoside和Randiasaponin VII。两个化合物均为3，28位二糖基化的齐墩果烷型三萜糖甙，系首次从该植物中分离得到。关键词：山石榴；三萜糖甙；植物源农药植物源农药是指有效成分来源于植物体的农药，用于防治植物的病、虫、草害等。它来源于植物体，本身就是自然界的一部分，所以能自然降解，不会污染环境及农产品，在环境和人体中积累毒性的可能性小，具有低毒、低残留的特点，能够保持农产品的高品质，并且植物源农药还具有高效、选择性高、有害生物难以产生抗性等优点1。因此开发利用我国丰富的植物资源用于有害生物防治具有重要的意义。
3、小菜蛾（Plutella xylostella linnaeus）又名菜蛾，属于鳞翅目（Lepidoptera）菜蛾科(Plutellidae)，是世界性害虫，我国各地具有发生，是十字花科蔬菜的重要害虫。其危害主要表现在幼虫取食叶片，使产品质量及品质下降。近年来受暖冬和少雨干旱天气的影响，小菜蛾越冬基数大，自然死亡率低，导致蔬菜种植区危害严重，是当今世界最难对付的害虫之一2。它对许多化学杀虫剂产生了不同程度的抗性，全球每年防治费用高达10亿美元3。因此，开辟小菜蛾防治新途径成为当前蔬菜生产亟待解决的问题，其中低毒高效的植物源农药研制成为研究的热点。山石榴Catunaregam spinosa
4、Tirveng属于茜草科（Rubiaceae）山石榴属（Catunaregam Woif），是海南省的一种常见红树伴生植物。在印度(当地名Madna, Mainphal)和巴西(当地名Sacrifcio de Cristo)，山石榴是作为传统草药被用于催吐、抗肿瘤和抗生育4、驱虫和抗痢疾等5、灭螺6和毒鱼7等作用。值得注意的是2005年华南农业大学对山石榴提取物进行了小菜蛾拒食试验，结果表明提取率最高的甲醇提取物对幼虫的拒食活性最高，在10 mg/ml的质量浓度下，拒食率达82.49%。并且初步确定活性成分主要存在于正丁醇萃取物（拒食率91.24%）和甲醇/水（体积比为10/3）（拒食率96.
5、77%）的沉淀物这些极性较大的提取物中 8。因此通过对山石榴次生代谢物的研究将有助于开发灭杀小菜蛾的新型高效植物源农药。1 仪器、试剂及材料1H-NMR、13C-NMR谱用Bruker AV-500核磁共振谱仪测定；ESI-MS谱用MDS SCIEX API 2000 LC/MS/MS液质联用仪测定；硅胶为青岛海洋化工厂产品；分析纯试剂为广州化学试剂厂生产；高效液相色谱仪：Waters 600E Multisoven Delivery System，Waters 996 Photodiode Detector, Phenomenex Luna TMC18 (2) column。山石榴于2006
6、年3月采于海南省三亚市沿海，由中国科学院南海海洋研究所张偲研究员鉴定为Catunaregam spinosa，标本收藏于中国科学院南海海洋研究所广东省海洋药物重点实验室（标号：GKLMMM020）。2 提取和分离山石榴干燥茎枝约9 kg，用95%和50%乙醇分别室温和回流提取三次，提取液合并，减压浓缩得浸膏860 g。浸膏加适量水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。将正丁醇部分总萃取物170 g溶于水中，过滤得水不溶部分80 g和水溶解部分90 g，后者过D101大孔吸附树脂，依次用水、30%、60%和100%乙醇洗脱，得到四组流份。60%乙醇洗脱部分（35 g）通过正相和反相硅胶柱层析
7、，后经HPLC分别用甲醇：水（65：35）和（50：50）纯化得到化合物Arjunetoside (96 mg)和Randiasaponin VII (96 mg)。 3 结构鉴定Arjunetoside:透明固体，分子式为C42H68O15。1H NMR (pyridine-d5，500 MHz)：d 3.57(1H, br s, H-19), 3.53 (1H, br s, H-18), 4.96 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1), 5.49 (1H, br s, H-12), 6.38 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1), 3.26 (br d, J = 9
8、.0 Hz, H-3), 1.40 (1H, s, H-23 ), 1.07 (1H, s, H-24 ), 1.63 (3H, s, H-27), 1.14 (3H, s, H-29), 1.14 (3H, s, H-26), 0.98 (3H, s, H-30), 0.97 (3H, s, H-25), 0.93 (3H, s, H-25)；13C NMR (pyridine-d5，125 MHz)：d 47.1 (C-1), 66.7 (C-2), 95.8 (C-3), 40.2 (C-4), 55.7 (C-5), 18.7 (C-6), 33.0 (C-7), 40.7 (C-8)
9、, 48.3 (C-9), 38.0 (C-10), 24.2 (C-11), 123.0 (C-12), 144.3 (C-13), 42.1 (C-14), 29.0 (C-15), 28.0 (C-16), 46.5 (C-17), 44.6 (C-18), 81.0 (C-19), 35.5 (C-20), 28.9 (C-21), 33.1 (C-22), 28.5 (C-23), 18.0 (C-24), 16.6 (C-25), 17.6 (C-26), 24.8 (C-27), 177.2 (C-28), 28.7 (C-29), 24.6 (C-30)；28-O-：95.6
10、(C-1), 74.1 (C-2), 78.9 (C-3), 71.1 (C-4), 78.3 (C-5), 62.2 (C-6)；3-O-：106.5 (C-1), 75.6 (C-2), 78.7 (C-3), 71.6 (C-4), 78.6 (C-5), 62.6 (C-6)。正离子ESIMS：m/z 835 M + Na +。通过与文献9核磁数据对照确定该化合物为Arjunetoside。Randiasaponin VII:透明固体，分子式为C42H68O15。 1H NMR (pyridine-d5，500 MHz)：d 3.56(1H, br s, H-19), 3.52 (1H
11、, br s, H-18), 5.14 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1), 5.50 (1H, br s, H-12), 6.38 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-1), 3.70 (br d, J = 10.5 Hz, H-3), 3.72 (1H, d, J = 10.5 Hz, H-23a ), 3.43 (1H, overlapped, H-23b), 1.58 (3H, s, H-27), 1.17 (3H, s, H-29), 1.14 (3H, s, H-26), 0.99 (3H, s, H-30), 0.98 (3H, s, H-25), 0.93
12、 (3H, s, H-25)；13C NMR (pyridine-d5，125 MHz)：d 38.5 (C-1), 25.8 (C-2), 82.2 (C-3), 43.4 (C-4), 47.8 (C-5), 18.4 (C-6), 32.9 (C-7), 40.2 (C-8), 48.4 (C-9), 37.1 (C-10), 24.2 (C-11), 123.1 (C-12), 144.3 (C-13), 42.1 (C-14), 28.9 (C-15), 28.0 (C-16), 46.5 (C-17), 44.6 (C-18), 81.0 (C-19), 35.5 (C-20),
13、29.0 (C-21), 33.0 (C-22), 64.8 (C-23), 13.5 (C-24), 16.1 (C-25), 17.6 (C-26), 24.7 (C-27), 177.2 (C-28), 28.7 (C-29), 24.9 (C-30)；28-O-：95.8 (C-1), 74.1 (C-2), 78.9 (C-3), 71.1 (C-4), 78.3 (C-5), 62.2 (C-6)；3-O-：105.8 (C-1), 75.8 (C-2), 78.7 (C-3), 71.7 (C-4), 79.3 (C-5), 62.8 (C-6)。正离子ESIMS：m/z 835
14、 M + Na +。通过与文献10核磁数据对照确定该化合物为Randiasaponin VII。本研究阐明了山石榴极性较大组分主要为三萜糖甙类化合物，结合文献报道证明山石榴提取物对小菜蛾拒食活性组分为三萜皂甙，因此对山石榴三萜皂甙类化合物的研究将有助于开发灭杀小菜蛾的新型低毒植物源农药。目前我们正在进行三萜皂甙类化合物的进一步分离和结构鉴定，后期进行小菜蛾拒食作用构效关系研究并对结构进行优化，开发一种新的植物源农药。参考文献1 从大鹏我国植物源农药的研究及问题分析J农药研究与应用，2009，13（1）：7-92 Talekar N S，Yang J CInfluence of crucifer
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