乳酸菌的培养检测方案

《乳酸菌的培养检测方案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乳酸菌的培养检测方案（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、品质管理检测工程细菌形态学分类厌氧O1 历杆,科划埃希克雪碧 赤属施立赁. 法门属，事尔痛鼻. 中*置*.等新 不动杆 ft鼻胞 y y - MW 曲杵 布良 MS-KV* 施特氏 爻肯 巴瞬 杆 军团属草竺阳性革兰阴性一 乳酸杆困乳酸杆菌的根本属性：乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。 这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。 利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。因而别离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。无芽抱，革兰氏染色呈阳性。微好氧，厌氧发酵，最适温度3040摄

2、氏度，最适PH值为5.56.2,在微酸环境下可以生长，中性或者偏碱性环境中那么生长速率下降。在固体培养 基上培养时，通常厌氧条件或者减少氧气压力和充有体积分数为5%10%的CO2可以增加其外表生长物，有些菌株在别离时就是厌氧的。一实验仪器和试剂：实验仪器：现有的仪器：欠缺的仪器：培养基和试剂：培养基： BCP培养基、MRS培养基和 SL培养基BCP培养基：酵母膏2 5g,蛋白陈5g,葡萄糖5g,澳甲酚紫0.04g,琼脂15g,蒸储水 1000ml , pH7 0 ;MRS培养基可以培养包括双岐乳杆菌、嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌：重 量g牛肉蛋 白粉10 ,鱼肉汁10 ,酵母浸出汁粉 5 ,葡萄糖2

3、0 ,醋酸钠5 ,柠檬酸二镂 2 ,吐 温80 0.1 ,硫酸镁 0.58 ,硫酸镒 0.28 ,蒸溜水 1 000ml ,备注：用高压锅在 121c灭菌 15min,调节 pH6.2 6.4 。乳酸杆菌选择性琼脂 SL:酪蛋白水解物10g;酵母提取物 5g;柠檬酸二镂 2g;乙酸钠(CH3COONa? 3H2O) 25g ; MgSO4 ? 7H2O 0.58g ;琼月旨 15g;葡萄糖 20g;吐温 80 1.0ml; 磷酸氢二钾 6g; FeSO4? 7H2O 0.03g; MnSO4 ? 4H2O 0.15g。以上用量为 1000ml 培养基的 用量。溶解琼脂在 500ml的沸水中，溶

4、解其他组分在500ml的水中，用冰醋酸调 pH=5.4 ,并混合已融化的琼脂，进一步煮沸5分钟，倾倒平板或此热的培养基适量分装入灭菌的试管， 这样无需进一步灭菌，防止重复融化和冷却。乳酸杆菌在液体培养基中的生长状况背景资料：培养基有 MRS培养基、 RS MA 培养基、 番茄汁琼脂培养基。当乳酸杆菌是待别离区 系的优势菌时，常用MRS培养基对其进行别离。一些常见的食品污染菌如金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌等在 MRS培养基上生长较差或几乎不生长，从而减少了杂菌的污染，降低了别离 难度。目前MRS培养基已经成为国标上公认的用于乳酸杆菌别离较好的培养基。常用于从 乳酸杆菌发酵制品中别离菌种以及菌种别离

5、后的传代培养。番茄汁琼脂培养基，这是一种传统的用于别离乳酸杆菌的培养基，此种培养基由于含有一定量的番茄汁，为乳酸杆菌的生长提供必要的营养，使得乳酸杆菌在此环境下更容易生长。 但由于配置过程中需要制备新鲜番茄汁，所以操作起来较为费时费力，目前已逐渐被MRS等培养基所代替。某些选择性培养基可用于从菌群复杂的基质(例如肠道)内进行乳酸杆菌的别离。APT( All Purpose Tween)培养基通常用于从肉制品中别离乳酸杆菌，改进的RogosaSL( Rogosa Sodium Lactate Modified )完全选择性培养基那么常用于胃肠内容物中乳酸 杆 菌的别离。Briggs琼脂培养基和s

6、 L( Sodium Lactate)培养基常用于酸奶中乳酸杆菌别离。(二)检测内容、流程、方式：内容：1通过对水体当中的的乳酸杆菌的筛选培养，最后计数得到相应水体当中的乳酸杆菌的数量。方法为：逐级稀释法。2乳酸杆菌的定性流程：采集：每个采集点各自采集10ml的池塘水，经过过滤杂质(固体)，冷冻运送等环节送到实验室内部。稀释平板测数法1、样品稀释液的制备准确称取待测样品10g,放入装有90mL无菌水并放有小玻璃珠的 250mL三角瓶中，用 手或置摇床上振荡 20min,使微生物细胞分散，静置 2030s,即成10 1稀释液；再用1mL 无菌吸管，吸取10 1稀释液1mL,移入装有9mL无菌水的

7、试管中，吹吸 3次，让菌液混合 均匀，即成10 2稀释液；再换一支无菌吸管，吸取 10 2稀释液1mL,移入装有9mL无菌 水的试管中，也吹吸 3次，即成10 3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10一4、10一5、106、107、108、109等一系列稀释菌液。用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之那么低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用107、108、10 9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10一4、10一5、10一6稀释度，测定放线菌数量时，采用10一3、104、105稀释度，测定真菌数量时，采用102、103、104稀释度。2、平板

8、接种培养平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。混合平板培养法将无菌平板编上 107、108、10 9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌 操作要求吸取1X10-9稀释?各1mL放入编号109的3个平板中，同法吸取 10 8稀释液各 1mL放入编号1 M08的3个平板中，再吸取1X10-7稀释?各1mL放入编号1*10一7的3个 平板中，由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换。然后在9个平板中分别倒入已熔化并冷却 至4550c的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀， 冷凝后倒置，在30 C 下培养。至菌落长出后即可计数。涂抹平板计数法涂抹平板计数法与混合法根本相同

9、，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板 中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1mL菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上，每个编号设三个重复。 再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。 将涂抹好的平板平放于桌上2030min,使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至菌落长出后即可计数。a1单图示稀释平板测数法中样品的稀释和稀释液的取样培养划线法不采用，因为需要对乳酸菌和大肠杆菌进行筛选培养：用灭菌接种环沾取10-1稀释液1环于已凝固的平板上进行划线图示。划线可按以下两种方式进行

10、，一种为交叉划线法，是在平板的一边做第一次Z字形划线。转动培养皿70。角，将接种环在火上烧过并冷却后，通过第一次划线局部，做第二次Z字形划线。同法进行第三次、第四次划线。另一种为边疆划线法，是从平板边缘的一点开始，连续作紧密的波浪式划线，直至平板中央。转动培养皿180。，再从平板另一边不烧接种环同样划线至平板中央。划线法实质上属于一种 由点到线的稀释法，较适用于含菌比拟单一的材料的纯 化，对于土壤这类微生物高度混杂的样品那么较少使用。以上各种别离法，都应按无菌操作进行。所用的培养基假设在倒平板前，按50四/m L的量参加用乙醇溶解的制霉菌素或放线菌酮起抑制霉菌的作用，效果会更好。3、培养16个

11、小时即可将上述接种过土壤悬液的平板倒置，于2830c培养，至长出菌落为止2436h。4、挑菌纯化在平板上选择别离较好的有代表性的单菌落接种斜面，同时作涂片检查，假设发现不纯， 应挑取此菌落做进一步划线别离，或制成菌悬液再做稀释别离，直至获得纯培养体。5、计数选取混菌法和涂抹法中每皿菌落数30300的平板，分别按 稀释平板测数法中的 混合平板测数法和 涂抹平板测数法中的公式计数。这样求得的是每克原始土样中的活菌数， 假设要折算为每克干土的含菌数，还应将此数值除以干土在土样中所占的质量分数烘干土的质量/原土样白质量。四数据的收集整理：数据库模板的建立二大肠杆菌一大肠杆菌的根本属性：二仪器和试剂：仪

12、器：试齐I：液态培养基： 配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中参加：胰化蛋白月东10g, 酵母提取物 5g , NaC110g 。摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离 子水定容至1L.在15Psi高压下蒸汽灭菌 20min。固态培养基：LB固体培养基 1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之 前加好抗生素，并且倒好板。LB固体培养基倒板1 .配制：100mlLB培养基参加1.5g琼脂粉。2 .抗生素的参加：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与 55c的水浴中，待培养基温度降到55c时手可触摸参加抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。3

13、 .倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，翻开盖子，在紫外下照10-15分钟。4 .保存：用封口胶封边，并倒置放于 4c保存，一个月内使用。1普通培养基：固体培养基是在液体培养基中加1.5%琼脂制成，先配液体培养基，然后参加1.5%琼脂，高压灭菌20min ,取出后再无菌状态下铺平板2选择性培养基：将消毒好的固体培养基置室温下冷却50c时加抗生素或其他必加成分，摇匀后倒入灭菌皿中厚度 2-3mm,室温固化。抗生素用三蒸水溶解后，用无菌滤头过滤到 无菌瓶中，氨芳青霉素终浓度 50pl/ml新制备的固体培养基较湿，铺上的液体不易吸收，可 在室温下放2-3天，或37c放半小时，然后4c保

14、存备用。3 LB培养基中所用抗生素终浓度：氨茉青霉素-50 口/ml;氯霉素-20 口/ml;庆大霉素-15科l/ml卡那霉素-30科l/ml春日霉素-1000科l/ml壮观霉素-100科l/ml链霉素-30科l/ml四 环素-12l/mk三培养检测方法：乳品中大肠杆菌检测国标 GB/T4789.38-2021的具体步骤及达标的标准：第一法大肠杆菌MPN计数操作步骤6.1、 样品的稀释6.1.1、 固体和半固体样品：以无菌操作取 259样品，置盛有225 mL磷酸盐缓冲 液的无菌均质杯内，8000r / min1000r/ min均质1 min2 min ,制成l:10样品匀液，或 置盛有22

15、5 mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min2 min制成1:10的样品匀液。6.1.2、 液体样品：以无菌吸管吸取样品25 mL置盛有225 mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶瓶内预置适当数量的玻璃珠中，充分振摇，制成 1:10的样品匀液。6.1.3、 样品匀液的 pH值应在6.57.5之间，必要时分别用 1mol/L氢氧化钠 NaOH或 1mol/L 盐酸HCI调节。6.1.4、 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取 1:10样品匀液1mL ,沿管壁徐徐注 人盛有9 mL磷酸盐缓冲液的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面，振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其棍合均匀，制成 1:100的样品匀液。6.1.5、 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成 10倍递增系列样品 匀液。每递增稀释1次，换用1支1m