《RNA酶稀释步骤》由会员分享，可在线阅读，更多相关《RNA酶稀释步骤（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、4ml 水+50ul 1M TRIS(PH 7.5)+ 15u 15 M NACL(PH 7.5)+50 mg RNase常用酶的配制方法最后更新：2009-12-18阅读次数：163【字体：小中大】1. 溶菌酶用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20C。每 一小份一经使用后便予丢弃。2. 蛋白水解酶类贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理0.01mol/L Tris(pH7.8)链霉蛋白酶 a20mg/ml-20C(溶于水)1mg/ml0.01mol/L EDTA37C 自消化 b0.5% SDS0.01mol/L Tris(pH7.8)蛋白酶 Kc20mg/ml-
2、20C(溶于水)50 以 g/ml0.005mol/L EDTA3756C无 须预处理0.5% SDSa：链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomyces griseus)中分离到的一 种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。上自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris. HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37C温育1h。经消化的链霉 蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20C。c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念 球菌(Tritirachium album
3、 Limber)中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合 位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而， 如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80% 左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。 所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA (以抑制依赖于Mg2+的核酸酶 的作用)。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白 一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化 完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。3. 无DNA酶的RNA酶将胰 RNA 酶(RNA 酶入)溶于 10mmol/lTris. HCl(pH7.5)、15mmol/lNaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100C加热15min，缓慢冷却至室温， 分装成小份保存于-20C。
